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ROS水平测定 1、收集500ul骨髓或脾脏(2106个)细胞悬液至标记好的流式管中。 2、加入PBS液5ml,4300rpm/min离心5min,沉淀细胞. 3、用大枪头小心去除上清;剩下的少量上清换用小枪将其去掉,尽量避免吸出管底细胞。 4、向弃去上清的每个流式管中加入用PBS 稀释的2.5uM 的DCFDA染料(Invitrogen,stock:1mM)100ul。 5、 将流式管在Vortex上振荡使细胞充分散开,然后37避光孵育30min。 6、加入PBS液5ml以终止反应,将小鼠骨髓或脾脏细胞分别装入5ml流式管中。 4300rpm/min离心5min,弃去上清。 7、按照抗体说明书,在第3 管和第5管中各加入0.25l的CD11b-PE,在第4管和第5管中也各加入0.25l的Gr-1-APC,4避光孵育30min。加入PBS液5ml以终止反应,4300rpm/min离心5min,弃去上清。, 8、加500ulPBS液,将沉淀细胞轻轻吹打均匀,用流式细胞仪检测。
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