.常见真菌的分离与鉴定病原真菌的一般特性真菌（Fungi ）是微生物中的一个大类，是一群数目庞大的细胞生物，估计全世界已有记载的真菌有10 万种以上 。它们的子实体小者用显微镜才能见到，大者可达数十厘米 ，它们共同特征是具有真正的细胞核，产生孢子和不含叶绿素，以寄生或腐生等方式吸取养料，仅少数类群为单细胞 ，其他都有分支或不分支的丝状体 ，能进行有性或无性繁殖 ，具有纤维素 （或其他葡聚糖 ）或几丁质的微纤维或两者兼有的细胞壁的有机体。对人类和动物致病的真菌大约100余种，属于病原真菌 。一、基本性状（一）形态结构真菌分单细胞真菌与多细胞真菌两大类，前者属于酵母菌 （yeast）一般呈球形或卵圆形 ，后者称为霉菌 （mold ）或丝状真菌 ，呈丝状分枝 ，菌丝交织象绒球状，另有一些真菌可因寄生环境及培养条件（养料、温度、氧气等）的不同可交替出现两种形态 ，即在室温中呈霉菌型 ，在 37或体内呈单细胞的酵母型，这类真菌有双相性 ，所以称之为双态真菌或二相真菌。真菌的细胞结构与一般植物细胞相似，有定型的细胞核及完善的细胞器，但胞壁与细菌胞壁不同 ，不含粘肽而是由角质及葡聚糖组成，也含有脂多糖蛋.专业 .专注.白质，其中酵母菌及类酵母菌皆以出芽增殖，不生长真菌丝 ，革兰氏染色呈阳性，丝状真菌分菌丝及孢子两部分，形态多种多样 ，分述如下 。1菌丝 （Hypha ） 真菌在合适的环境中 ，由孢子生出嫩芽 ，称为芽管 。芽管逐渐延长呈丝状 ，称菌丝。 菌丝继续生长并生长分枝，增殖的菌丝交织组成菌丝体 。其中一部分菌丝深入被寄生的物体或培养基中吸取养料，称为营养菌丝体。 另一部分菌丝向空间生长，称为气生菌丝体 。 气生菌丝体能产生孢子者称为生殖菌丝体 。菌丝中各个细胞间有明显分隔者，称为有隔菌丝 。主要见于病原性真菌 。 很多非病原真菌的菌丝无明显分隔，称为无隔菌丝 。 有些菌丝可呈各种特殊形式 ，如球拍状 、破梳状、螺旋状、结节状、关节状、鹿角状、假菌丝。2孢子 生成孢子是真菌扩大繁殖的一种方式。真菌孢子的抵抗力 、形态及作用等均与细菌芽胞不同，分为无性孢子及有性孢子两大类。不经过两性细胞的结合而形成的孢子叫无性孢子，这一繁殖过程称为无性繁殖。常见的无性孢子有 5 种：关节孢子 、厚壁孢子 、孢子囊孢子 、芽孢和分生孢子 。 病原真菌属于不完全菌纲 ，很少产生有性孢子 ，大多数是无性孢子 。（1）厚壁孢子 ：当真菌在不利环境中 ，由菌丝内胞浆缩浓和胞壁增厚而成，呈圆形。当环境好转时可生成芽管成长为菌丝。（2）关节孢子 ：菌丝断裂形成长方形两端略钝圆的孢子叫关节孢子。如白地霉和粗球孢子菌 。.专业 .专注.（3）孢子囊孢子 ：为鞭毛菌和接合菌的无性生殖形式。孢子囊中所含的孢子来源于分枝菌丝或胞囊梗顶端膨大形成孢子囊，囊内原生质浓缩集聚 ，割裂而成，一般数目较多 ，孢子囊形态多样 ，因种而异 。（4）芽生孢子 ：由菌细胞出芽生成 ，见于念珠菌及隐球菌 ，前者（类酵母菌）出芽后孢子伸长呈丝状 ，但不见与母细胞分离 ，称为假菌丝 ，在假菌丝上的收缩点也可出芽成芽生孢子。（5）分生孢子 ：是子囊菌和半知菌的无性孢子，也是半知菌分类的主要依据，单细胞的分生孢子称小分生孢子，有蒂或无蒂 ，侧生或游离 ，分散或成群，圆形、梨形、卵圆形或其它形状 ，表面粗糙或光滑 ，或有或无各种纹饰 。多细胞的分生孢子称大分生孢子，有纺锤形 、棒形、球棍形、镰刀形及其它形状，两端尖或圆或一端圆 ，厚壁或薄壁 ，壁光滑或粗糙 ，有色或无色 ，分隔有多有少。（二）培养特性及繁殖方式1培养特性大多数真菌对营养要求不高，只需要水 、盐，简单的氮源及碳水化合物就可生长 ，一般常用沙堡氏琼脂基（主要成分葡萄糖 4%、蛋白胨1%、琼脂 2%）培养都能生长 。 但需要弱酸性 （pH 4 6）、较低孵育温度（ 2228 ）， 充分温度和氧气供应才能生长良好。侵害内脏的某些真菌在37含血的培养基中生长良好。真菌生长都比较缓慢 ，大多需孵育数天后才成明显菌落 ，菌落有下列三种类型 ：.专业 .专注.（1）酵母型菌落 ：外观湿润稠软致密 ，类似一般细菌菌落 ，镜检只见有圆形或椭圆形生芽细胞 （例如隐球菌的菌落 ）。（2）类酵母型菌落 ：外观性状似酵母型菌落，镜检除见有出芽的细胞外，尚可见到假菌丝 （例如念珠菌的菌落 ）。（3）丝状型菌落 ：由多数分枝的菌丝体向上生长组成疏松的绒球状，表面有很多孢子 ，显示各种色泽 ，菌落可呈棉絮状绒球状粉末状或石膏样 ，其正面和背面可显示各种不同色素，常作为鉴定菌种的参考 。镜检可见有纵横交织的菌丝及各种孢子 （例如各种癣菌的菌落 ）。2繁殖方式有多样性 ，包括出芽增殖 ，菌丝增长 ，菌丝分枝和断裂 ，产生无性孢子及有性孢子进行繁殖，因此它繁殖力很强 ，但生长速度较慢 。（三）变异性和抵抗力真菌很容易发生变异 ，在人工培养基中多次移种或孵育过久，就可出现形态结构、菌落性状 、色素以及各种生理性状 （包括毒力 ）的改变，用不同的培养基和温度培养真菌 ，其性状也有改变 ，真菌对干燥阳光紫外线及一般化学消毒剂耐受性却较强 。但对热的抵抗力却不强 。 60以上 1 小时即可杀死孢子及其菌丝，在 1%3%石炭酸、2.5%碘酊、0.1%升汞及 10% 甲醛中可被灭活 。用甲醛气体熏蒸被真菌污染的衣物用具，可杀灭真菌菌丝及其孢子。但真菌对一般抗菌素及磺胺药均不敏感。只对二性霉素 、酮康唑、制霉菌素等非常敏感 ，治疗真菌感染常用此药 。.专业 .专注.（四）致病性与免疫性1致病性病原真菌的致病机制还是一个未完全解决的问题；根据其侵害部位，主要分为下列两类 ：（1）浅部真菌病 ：主要由癣菌引起 ，大多为外源感染 ，常易侵害皮肤 、指（趾）甲及须发等含角质的组织，引起癣症 。（2）深部真菌病 ：可由各种真菌引起 ，包括类酵母菌 、二相真菌及丝状菌。侵害粘膜 、皮下组织 、内脏及脑膜等处 ，有时扩散全身 ，主要是内源性感染，也可由外源传染 ；前者是因机体抵抗力降低，如患重病 ，长期使用免疫抑制剂，广谱抗菌素或放射治疗 ，患恶性病 ，严重烧伤等时 ，造成体内菌群失调，以致常居在体内的某些真菌（如白念珠菌 ），甚至平时不致病的环境中的真菌（如曲霉、毛霉）等也会乘机侵害 ，一些传染性较强的内脏真菌病是内外源感染。2免疫性浅部真菌病一般在血中不产生特异性抗体，病后无免疫保护力，只是儿童头癣等青春期后头皮皮脂增多时可以自愈，以后不再感染 ，其他部位癣症治愈后仍可再感染。深部真菌病虽可产生抗体，但无明显免疫保护作用。临床常见的病原性真菌一、 浅部真菌（）皮肤癣菌.专业 .专注.皮肤癣菌又称皮肤丝状真菌，有下列三属 （见表 1），都只侵犯体表角化组织（皮肤，毛发及指甲和趾甲 ）。不侵害深部组织 ，或内脏，皆属外源性传染，由接触患癣病人 、动物（狗、猫、鼠、牛、马等）或染菌物体而感染 。1毛癣菌属红色毛癣菌（1）直接镜检 ：皮屑及甲屑 ，分枝分隔的菌丝有时可断裂或关节孢子状，毛发：发外型感染表现为发外孢子排列成串。少数为发内型感染孢子在发内排列成链状 ；毛发穿孔试验阴性 。（2）培养特征 ：在葡萄糖蛋白胨琼脂 ，25， 生长比较快 ，菌落形态有多种表现，镜检也不完全一样 ，常见有下列四种 ：I 型：羊毛状：白色羊毛状菌丝充满斜面 ，典型的卷成筒状 ，边缘贴牢管壁 ，呈鲜红色 ，背面开始在中心有一红色小点 ，以后形成深红色环 ，最后成片为葡萄酒色 ，色素边缘划界非常明显 。少数 I 型菌株表现无红色色素 ，正面白色 ，背面呈淡黄色类似石膏I 型，亦有正面白色而背面呈灰黑色。II 型：绒毛状：粉红色绒毛状菌丝生长 ，占斜面3/5 ，菌丝稀疏 ，透过菌丝可见粉红色的基底，背面颜色同 I 型相同。 III 型：粉未状：菌落表面稍有凸起 ，呈粉末状 ，粉红色，约占斜面的 1/2 2/3 ，背面同 I型 。IV 型：沟纹状：菌落生长相对较慢 ，比以上三种类型为小 ，占斜面的1/3 1/2 ，菌落中央凸起 ，从中央向四周有排列比较整齐的放射状沟纹，边缘整齐，表面菌丝甚少 。开始微带黄色 ，以后变粉红 ，背面同 I 型 。.专业 .专注.（3）菌种鉴定 ： 菌落特征及色素 ； 大小分生孢子的形态 ； 玉米粉吐温琼脂上产生红色色素 ； 毛发穿孔试验阴性 ； 尿素酶试验阴性 。须癣毛癣菌（1）直接镜检 ：皮屑内见分枝分隔的菌丝，甲屑内为关节状菌丝 。 毛发感染为发外型 ，发内有时有菌丝 。（2）培养特性 ：在沙氏上生长较快 ，菌落形态可分为两大类：毛型和粉型；下列 I、II 型为毛型 ，III、IV、 V 型属粉型 。自炎症明显的皮损中所分离出的菌株多属粉型 。 毛型菌落外观均似红毛 ，应注意鉴别 。 具体分型 羊毛状 （ I型），又称趾间毛癣菌 ，菌落生长快 ，白色