还原型谷胱甘肽（reducedglutathione,GSH ）试剂盒说明书货号：QS1200规格：50管/48样还原型谷胱甘肽（reduced glutathione, GSH ）试剂盒说明书可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义：GSH 是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基 保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG）是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此，测定细 胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞 所处的氧化还原状态。测定原理：DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其 吸光度与GSH含量成正比。自备实验用品及仪器：可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、 1 mL 玻 璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制：试剂一：液体x1瓶，4弋保存。试剂二：液体x1瓶，4弋保存。试剂三：液体x1瓶，4弋避光保存。粗酶液提取：1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积（mL）为1 : 510的比 例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g ,4弋离心10min，取上 清置冰上待测。2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL ）为 5001000 ： 1的比例（建议500万细胞加入 1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w， 超声3秒，间隔7秒，总时间3min ）;然后8000g ,4弋，离心10min，取上清置于冰上待测。3. 血清等液体：直接测定。GSH测定操作：1. 分光光度计预热30min，调节波长到412 nm,蒸馏水调零。2. 试剂二置于25弋(一般物种)或者37弋(哺乳动物)水浴中保 温 30m in。3. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100pL蒸馏水,700pL 试剂二，2002试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A1。4. 测定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入100pL上清液,700pL 试剂二，2002试剂三，混匀静置2min后测定412 nm吸光度A2。注意：空白管只需要测定一次。GSH含量计算公式：第1页，共2页GSH标准曲线公式：y=1.5 x(x为GSH浓度，u mol /mL; y为 吸光值)GSH计算：(1)按蛋白浓度计算GSH (u mol/ mg prot) =(A2 -A1) 4-1.5xV样三(V 样xCpr ) =0.667x(A2-A1) mCpr ( 2 )按样本鲜重计算GSH (u mol/g 鲜重)=(A2-A1)三1.5xV 样三(V 样mV 样总 xW)=0.667x(A2-A1) mW (3)按细胞数量计算GSH (u mol /104 cell) =(A2 -A1) m1.5x V 样m(V 样mV 样总x 细胞数量)=0.667x(A2-A1) m细胞数量(4)按液体体积计算GSH (u mol/ mL) =(A2 -A1) m1.5xV样mV样=0.667x(A2 - A1)V 样总：上清液总体积，1 mL;V 样：加入反应体系中上清液体 积,100uL=0.1 mL; W :样品质量，g ;Cpr:上清液蛋白质浓度， mg/mL;注意事项：定。1.试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测2.最低检出限为 0.01mmol/L。第 2 页，共 2 页