-邻二氮菲分光光度法测定微量铁一、 实验目的1、学会吸收曲线及标准曲线的绘制，了解分光光度法的根本原理。2、掌握用邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理。3、学会721型分光光度计的正确使用，了解其工作原理。4、学会数据处理的根本方法。5、掌握比色皿的正确使用。二、 实验原理根据朗伯-比耳定律：A=bc，当入射光波长及光程b一定时，在一定浓度围，有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比。只要绘出以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标的标准曲线，测出试液的吸光度，就可以由标准曲线查得对应的浓度值，即未知样的含量。同时，还可应用相关的回归分析软件，将数据输入计算机，得到相应的分析结果。用分光光度法测定试样中的微量铁，可选用显色剂邻二氮菲(又称邻菲罗啉)，邻二氮菲分光光度法是化工产品中测定微量铁的通用方法，在pH值为2-9的溶液中，邻二氮菲和二价铁离子结合生成红色配合物：此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数510 = 1.1104 Lmol-1cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成31配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在参加显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OHHCl)将Fe3+复原为Fe2+，其反响式如下：2Fe3+ + 2NH2OHHCl 2Fe2+ + N2 + H2O + 4H+ + 2Cl-测定时酸度高，反响进展较慢；酸度太低，则离子易水解。本实验采用HAc-NaAc缓冲溶液控制溶液pH5.0，使显色反响进展完全。为判断待测溶液中铁元素含量，需首先绘制标准曲线，根据标准曲线中不同浓度铁离子引起的吸光度的变化，对应实测样品引起的吸光度，计算样品中铁离子浓度。本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-；20倍的Cr3+、Mn2+、VO3-、PO43-；5倍的Co2+、Ni2+、Cu2+-等离子不干扰测定。但Bi3+、Cd2+、Hg2+、Zn2+、Ag+等离子与邻二氮菲作用生成沉淀干扰测定。三、 实验仪器与试剂：721型分光光度计、酸度计、50ml比色管、吸量管1mL、2mL、5mL、10 mL、比色皿、洗耳球。1.110-3molL-1铁标准溶液、100ugml-1铁标准溶液、盐酸、盐酸羟胺、醋酸钠、0.15%邻二氮菲水溶液。四、 实验步骤一准备工作翻开仪器电源开关，预热，调解仪器。二测量工作以通过空白溶液的透射光强度为I0，通过待测液的透射光强度为I,由仪器给出透射比T,再由T值算出吸光度A值 1、吸收曲线的绘制和测量波长的选择用吸量管吸取2.00 mL1.010-3mol.L-1标准溶液，注入50 mL比色管中，参加1.00 mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，参加2.00 mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度。在光度计上用1 cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，在440-560 nm间，每隔10 nm测量一次吸光度，以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的适宜波长。一般选用最大吸收波长ma*为测定波长。2、显色剂条件的选择显色剂用量在6支比色管中，各参加2.00mL 1.010-3molL-1铁标准溶液和1.00mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀。分别参加0.10，0.50，1.00，2.00 ，3.00及4.00mL 0.15%邻二氮菲溶液，5.0 mL NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在光度计上用1cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，测吸光度。以邻二氮菲体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-试剂用量曲线，从而确定最正确显色剂用量。3、溶液pH确实定 取8支50 mL比色管，各参加2mL 1.0010-3mol/L-1的标准铁溶液和1 mL 10%的盐酸羟胺溶液，摇匀。放置2 min,再参加特定体积(2中探究出的最适量0.15% L邻二氮菲，摇匀，分别参加0.0、0.20、0.50、1.00、1.50、2.00、3.0 0 mL 0.15%的NaAc溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 在光度计上，用1cm的比色皿，选择适宜由1所决定的波长，以蒸馏水为参比，分别测其吸光度。在坐标纸上以参加的NaAc溶液体积数为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制ApH曲线，确定测定过程中pH围。4、显色时间及有色溶液的稳定性 用吸量管吸取 2mL 1.0010-3mol/L-1的标准铁溶液于50 mL比色管中，参加1 mL 10%的盐酸羟胺溶液，摇匀原则上每参加一种试剂后都要摇匀。再参加2 mL邻二氮菲溶液，参加特定体积的3中探究出的NaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在光度计上，用1 mL的比色皿，以蒸馏水为参比溶液，放置，每两分钟测一次，在510nm之间测定吸光度。以时间为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制A-t吸收曲线，选择测量的最适时间。5、标准曲线的制作 在6个50 mL的容量瓶中，用10 mL吸量管分别参加0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL 100gmL-1铁标准溶液，各参加1 mL 10%盐酸羟胺，摇匀原则上每参加一种试剂都要摇匀。再参加2 mL 0.15%的邻二氮菲溶液和特定体积 1molL-1NaAc溶液，以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。放置一段时间4中探究出的时间。以试剂空白为参比，在510nm或所波长下，用1cm的比色皿，测定各溶液的吸光度。绘制标准曲线。6、试液含铁量的测定 准确吸取适量试液如水样或工业盐酸、石灰石样品制备液等代替标准溶液，其他步骤同上，平行三次测定其吸光度。记录计算机显示的含铁量，计算试液中铁的含量以mgL-1表示。五、 数据处理1、邻二氮菲-Fe2+吸收曲线的绘制1数据纪录不同波长吸光度波长/nm440445450455460465470475480吸光度A0.3400.3530.3640.3770.3950.4150.4330.4470.454波长/nm485490495500505510515520525吸光度A0.4570.4600.4670.4770.4900.4970.4910.4680.428波长/nm530535540545550555560吸光度A0.3740.3100.2460.1880.1400.1040.0772作吸收曲线图由图可知，最大吸收波长ma*= 510nm2、 显色剂用量的测定1显色剂用量与吸光度的关系邻二氮菲用量曲线：=510 nm邻二氮菲的体积ml0.100.501.002.003.004.00吸光度A0.0480.2820.4970.5000.4910.485据上面数据，作得标准曲线图如下：由图可知，显色剂最正确用量为1.00 mL0.15%邻二氮菲溶液。2溶液pH与吸光度的关系浓度 ug/mlAbs00.0060.20.060.50.23110.421.50.40620.4022.50.395据上面数据，作得标准曲线图如下：由图可知，NaAc最正确用量为1.00 mL。3显色时间及有色溶液的稳定性t min03691215A 0.4800.4770.4780.4790.4800.479结论：放置12分钟后铁离子与邻二氮菲根本完全结合。2、 工业盐酸中铁含量的测定 1标准曲线的制作 试液中铁含量与吸光度的关系V100ug/mL mL0.000.600.801.001.201.40A 0.000.2180.2890.3550.4300.494试液含铁量的测定测试次数123吸光度A0.4820.4830.483铁的浓度/ug/mL1.35451.35741.3574铁水样浓度的平均值/ug/mL1.3564相对偏差0.095%0.05%0.05%数据分析：本次测量的结果的偏离平均值较小，实验测量结果的可信度高。 六、实验考前须知1、不能颠倒各种试剂的参加顺序。2、读数据时要注意A和T所对应的数据。透射比与吸光度的关系为:A=log(I0/I)= log(1/T)；测定条件指：测定波长和参比溶液的选择。3、最正确波长选择好后不要再改变。4、每次测定前要注意调满刻度。七、思考题1、邻二氮菲分光光度法测定微量铁时为何要参加盐酸羟胺溶液.答：工业盐酸中含有Fe2+和Fe3+，其中Fe2+与邻二氮菲(phen)能生成稳定的桔红色配合物Fe(phen)32+此配合物的lgK稳=21.3，摩尔吸光系数510 =1.1104Lmol-1cm-1，而Fe3+能与邻二氮菲生成31配合物，呈淡蓝色，lgK稳=14.1。所以在参加显色剂之前，应用盐酸羟胺(NH2OHHCl)将Fe3+复原为Fe2+，然后，进展铁的总量的测定 。2、参比溶液的作用是什么.在本实验中可否用蒸馏水作参比.答：参比溶液的作用是扣除背景干扰，不能用蒸馏水作参比，因为蒸馏水成分与试液成分相差太远，只有参比和试液成分尽可能相近，测量的误差才会越小。3、邻二氮菲与铁的显色反响，其主要条件有哪些.答：邻二氮菲与铁的显色反响，其主要条件有：酸度一般(pH=56)、温度、 邻二氮菲的用量，显色时间等。八、实验总结通过本实验，学习了确定实验条件的方法，再次熟悉了可见分光光度法的测量原理和实验操作步骤,掌握了邻二氮菲分光光度法测定微量铁的方法原理以及掌握721型分光光度计的使用方法。. z