设计性实验-机械损伤对马铃薯生理性质的影响成员：2009236105郭银炫 2009236107苏彩婉 2009236108钟丽桃 2009236116钟玉娴 2009236117陈毓文 2009236123丁丹丽（一）刀器割伤对马铃薯多酚氧化酶（PPO）活性测定一、实验目的：掌握测定多酚氧化酶活性的方法；了解多酚氧化酶的特性二、实验原理：多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌。醌有颜色，在525nm下有最大光吸收，通过分光光度法测定反应体系颜色变化可测定酶活性。三、器材与试剂1、仪器：低温离心机、分光光度计2、试剂：0.1 molL儿茶酚、pH 7.2磷酸缓冲液3、材料：马铃薯四、实验步骤：1称取马铃薯0.5克，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，少许PVP，研磨匀浆，转移到离心管，再用2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液冲洗研钵，合并提取液。4 4000rpm离心15分钟，上清液即为粗酶液。2在试管中，加入2.5mL pH 7.2磷酸缓冲液，1.5mL 儿茶酚（邻苯二酚）以及1mL 粗酶液，空白调零以1mL磷酸缓冲液代替粗酶液。3A值测定：加入粗酶液后迅速混匀，立刻于525nm下测定反应体系的A值，每隔10秒记录一次，共记录5次。4计算酶活力。按下式计算PPO活性U/min gFW A值增加0.001定义为一个酶活力单位。5.刀割伤后每隔1个小时，按上述步骤重复做三次五、实验报告：时间（h）0123完好马铃薯A值0.3120.4150.5230.326损伤马铃薯A值0.1330.1230.1200.127六实验结果：马铃薯机械损伤后，多酚氧化酶活性降低 随着时间的增长，多酚氧化酶的活性越来越低七实验分析及讨论1.完好马铃薯在放置三个小时后的PPO活性显著变大答：,PPO活力可能与马铃薯的大小有关，马铃薯体积越大，酶量较多，酶活力越大2,刀割放置四个小时后，马铃薯PPO活力微升答：取材部位较前三次深入表皮，而PPO活力与马铃薯的选材部位有关，靠近表皮的PPO易被氧化，所以活力比中间部位的马铃薯的PPO的活力小3，刀割后，促进马铃薯氧化褐变，所以酶活力越来越低（二）失重率与呼吸强度的测定一、 机械损伤对马铃薯失重率的影响（1）各取一个完好和刮伤的马铃薯用电子天平称重，每隔6小时称量一次，记录数据。（2）实验数据：表一：相隔时间（质量（g）样品0h6h12h24h完好的马铃薯89.0288.9688.7788.73损伤的马铃薯68.0367.6766.4464.22表二：相隔时间失重率样品0h6h12h24h完好00.07%0.28%0.32%损伤00.53%2.33%5.6%图一：机械损伤对马铃薯失重率的影响注：纵坐标是失重率(3)结论：机械损伤对增强马铃薯的蒸腾失水，导致马铃薯的质量减少，失重率比完好的大。二、机械损伤对马铃薯呼吸强度的影响（1）本实验以完好的马铃薯和刮伤的马铃薯做对比试验，采用静置法测定它们呼吸强度的变化，每隔6小时测定一次，记下数据，分析机械损伤对呼吸强度的影响。（2）实验材料与试剂0.4mol/L氢氧化钠、0.2mol/L草酸、饱和氯化钡溶液、1%酚酞指示剂、凡士林。干燥器（直径25cm）、滴定管架、25mL酸式滴定管、150ml三角瓶、10cm培养皿、10ml移液管、洗耳球、天平。（3）实验数据与结果：表三：记录数据相隔时间体积（ml）试样0h6h12h18h24h完好的马铃薯8.248.278.288.318.30刮伤的马铃薯8.278.198.248.298.29空白试验8.398.408.398.418.40表四：马铃薯呼吸强度的变化相隔时间呼吸强度（mg/kg.h）样品0h6h12h18h24h完好的马铃薯15.0512.8510.889.919.91刮伤的马铃薯15.0527.1619.5015.6114.31图二：完好和刮伤的马铃薯呼吸强度的变化注：纵坐标是呼吸强度，单位是mg/(kg.h)（4）结论：马铃薯是非跃变型果蔬，其呼吸强度在成熟期间随时间的增长而不断下降，而受到机械损伤的马铃薯刚开始呼吸强度不正常的增加，到达一定的高峰之后，随着时间的增长，其呼吸强度也逐渐降低，到达一定的程度后，变化幅度小，几乎不变。所以在果蔬贮运期间要尽量避免机械损伤，果蔬受到机械损伤，呼吸强度增强，体内有机物质消耗快，降低果蔬的贮藏寿命。（三）马铃薯总可溶性固形物含量的测定（折光仪法）一，实验目的 测定完好的马铃薯与损伤后的马铃薯固形物含量变化情况。二、 药品与器材马铃薯（一个完好的，一个有机械损伤的，蒸馏水； 手持式折光仪、烧杯、滴管、擦镜纸（或棉花）。三、操作步骤1、仪器的校正 打开手持式折光仪盖板，用擦镜纸或棉花小心擦干棱镜玻璃面。在棱镜玻璃面上滴2滴蒸馏水，盖上盖板。朝向光源明亮处，于水平状态，从接眼部处观察，检查视野中明暗交界线是否处在刻度的零线上。若与零线不重合，则旋动刻度调节螺旋，使分界线面刚好落在零线上。 2、打开盖板，将水擦干，在棱镜玻璃面上滴2滴马铃薯汁，朝向光源明亮处观测，读取视野中明暗交界线上的刻度，即为果蔬汁中可溶性固形物含量（%）。 3、每个样品重复测定三次，取其平均值，以百分数计算。 4、连续使用仪器测定不同试样时，在每次测完后，用清水冲洗洁净再用干燥的镜纸擦干净，才可继续进行测试。测试结束后，必须擦净镜身各部分。四 实验数据 时间段马铃薯种类 0时 6小时 12小时 24小时 完好的马铃薯 7.88.18.28.4损伤的马铃薯7.78.18.38.5注：横坐标是时间，纵坐标是固形物含量。五 实验结论马铃薯存放久了固形物含量增加，而对于损伤的马铃薯，增加速度更快，机体要通过增强呼吸强度来加强组织对损伤的保卫反应和促进愈伤组织，固形物增加更快，衰老也更快。 /