干细胞治疗工作流程脐带血临床采集流程干细胞是一种未分化的细胞，具有自我更新、分化、发育再生各种组织 器官和人体的潜在功能。脐带血广泛的应用前景备受关注，脐带血本属于废弃物，但是医学技术 的进步使得它的价值得到了空前的提升。1989年，法国的鲁克罗曼教授用HLA 相合的同胞脐带血干细胞进行移植，成功地治疗了一例遗传性疾病一范可尼 贫血症，之后短短的15年的时间内，医学界利用脐带血干细胞已成功治愈和 改善了多种疾病，包括:血液系统疾病、免疫系统疾病、神经和血管系统疾病、 脑部疾病、肿瘤、糖尿病等。现在在儿童的干细胞移植方面，由于可以存在 1-2个HLA位点的不配型，免疫排斥反应小等原因，脐带血干细胞已成为治 疗一些重大疾病的有效手段。同时，干细胞的进一步开发，还可用于抗衰老、 器官修复、美容等保健领域。干细胞技术和临床应用的飞速发展，给人类的 健康带来了新的希望和保障。但是作为采集脐带血最主要的工作人员，我们 所需要的操作是非常简单的，但是对于术中操作之外，我们还是会遇到以下 的问题。解决这些问题，我们才能放心的采集，存储，备用。但是真正合法, 安全，便捷的让脐带血内的干细胞移植到有需要的患者体内，需要按以下流 程操作：脐带血采集条件：以初产妇、年龄在45岁以内或35岁以内经产妇，身体健康者为宜。脐带血安全流程1、传染病检查：孕妇在产前要做好身体检查。这些检查包括:肝功能是 否正常，有无梅毒螺旋体，艾滋病病毒(HIV )、乙型肝炎病毒(HBV )、丙型肝 炎病毒(HCV)等病原体检测。如果其中有一样是阳性的话，就不要再进行采集 了。2、采集和储存的无菌观念：在自然分娩的情况下，一定要注意消毒。被 厌氧菌和需氧菌污染，检测为阳性时都不能储存和使用。在脐血被采集后，应 该尽快保存在2-8r的恒温箱中，并远离辐射源，不要让X射线照到。这样的 脐带血经科学实验证实，放置24小时或在-23C以下48小时，其中的干细胞 的活性是没有明显影响的，但最长不应该超过72小时。采集流程何种方法采集脐带血更好些呢？ Solves5等证实了剖宫产情况下，以下 两种采集方法体内采集法对得到的脐带血除血细胞比容及血小板外，其他各 项没有明显不同。体内采集法：产妇施行常规的子宫横切术，将胎儿取出后，立即用两把 止血钳夹住脐带，将其与胎儿分离，然后用碘酒和70%酒精消毒脐带，做脐 静脉穿刺后，脐带血通过重力的作用流人内含抗凝剂的无菌采集袋，采集完 将其放入4 C冰箱中保存。体外采集法：同样对产妇行子宫横切术，待胎盘自然或人工剥离后，立 即将其置于采集区，胎盘取出与进行采集之间时间尽可能缩短，将胎盘放在 一个中间有孔的可供脐带自然垂下的采集台上，对脐带进行严格消毒后行脐 静脉穿刺，血液在重力的作用下流人采集袋中，将其放人4C冰箱保存。脐带血贮存因为脐血的采集、运输、储存和应用事实上有别于一般血液，国际上通 行的管理法规都将血液和组织细胞分别管理，而我国目前的法规对脐血干细 胞库只简单归属血液管理，严重阻碍了干细胞产业的发展。首先，来源不一 样，脐带血是产妇和新生儿血循环以外的胎盘和脐带中的血液，一直是医院 产科的废弃物，采集对产妇和新生儿无任何风险，然而其采集作为产妇生产 过程的一部分，只能由产科医护人员进行，不可能由其他人员采集；而其应 用主要是其中的干细胞，不会发生一般血液的公共安全问题。我们所在的手 术室其实是脐带血采集的主要场所，手术室护士以及产科医生也将是脐带血 采集主要人员，因此对于脐带血的采集问题还是需要有必要的认识。1、采集足月妊娠的健康产妇脐血，以肝素抗凝（40u/ml），脐血采集量 50100m 1，采集后2h内进行分离纯化处理。2、胎儿分娩后立即抽取脐血,经抗凝,2-8C冰箱保存。接受干细胞治疗的病人在术前应加强营养，改善体质。签署知情同意书, 干细胞治疗志愿书，手术同意书，及相关法律文书。对病人进行生命体征的 观测，有发热和炎症患者需要待炎症控制后再进行移植治疗，女性病人避开 月经期。全身衰竭，严重肝肾功能损害的病人不宜进行自体骨髓干细胞移植 治疗。此外，根据移植途径的不同给病人做好相应的术前处理。1:术前心理疏导，消除患者紧张情绪。重组人粒细胞刺激因子每天注射一支（皮下注射），打1-2天；病人身体状态 好，可不用做动员。2：术前准备普通骨穿针2个，10ml注射器20个，在采集骨髓前将每个注射 器中加入1ml肝素（抗凝），一次性采血袋或准备一个200ml以上容量的瓶子， 术前消好毒，上盖橡胶盖或者软木盖，以便插针头，方便采集的骨髓往瓶中 注入。术前30min行常规剂量头抱二代抗菌。3：骨髓采集一般为24个点的采集，在两个点不能够采集好的情况下， 采集最大4个点。4：将采集好的骨髓或脐带血用医用纱布包裹，送分离。送病人回病房。5：将分离好的干细胞用生理盐水稀释成4-5ml干细胞悬液备用。6：术后进行48小时体温监测。适应症理论上干细胞能够治疗一切细胞损伤性疾病。目前已经使用宁夏中联达 生物有限公司产品应用技术成熟、疗效可靠、安全性高的疾病主要有：肝炎 肝硬化、溃疡性结肠炎、糖尿病足、闭塞性脉管炎下肢坏死、神经损伤性疾 病、老年痴呆症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森氏病、糖尿病等禁忌症一切非细胞损伤性疾病；血液病；肝肾功能严重不足；发烧病人；有严重 出血倾向病人；孕妇或哺乳期女性；合并大量腹腔、肺部或其他系统严重感 染；心、肺、肾等重要脏器功能不全/衰竭不能配合治疗；过敏体质等其他严 重情况影响治疗等。科室运作流程选择病例f术前准备（术前相关检查、谈话记录、知情同意书，干细胞 来源选择脐带血、骨髓血）f标准收费 脐带血通知妇产科或厂家f治疗前两日通知细胞分离室骨髓血不能在细胞分离室采则通知手术室（术前一日通知）f 需介入的通知介入科（术前一日通知）或再次通知手术室治疗当日；进行骨髓血、脐带血采集f送细胞分离室分离f分离时 间3小时左右结束f干细胞送治疗室（介入科或手术室治疗）f病人送 回病房。神经系统病变适应症脑外伤、脑外伤后遗症脑梗塞、脑出血脊髓损伤性截瘫急性期末（一周） 脑发育不全、脑萎缩老年性痴呆、智力低下、帕金森病 脑瘫、长期昏迷、植物生存状态 肌萎缩侧索硬化症运动神经元病治疗方法经颈内动脉介入干细胞移植1、选择符合适应症患者，排除心、肺、肝、肾等脏器重大疾患。2、行头部磁共振、血、尿常规，凝血功能，输血四项，乙肝三系，生化全套，胸部DR、 心电图等，排除手术禁忌。3、采用骨髓或脐带血分离纯化（负收集混合法）收集干细胞，总数需2X106/L。4、患者转移至介入室，常规经右腹股沟穿刺放置导管鞘，用5F多功能造影管分别行双侧 颈内动脉及椎基底动脉造影，排除脑血管畸形等疾病，并经双侧颈内动脉注入充分稀释后 干细胞悬液4-5ml，续推2ml生理盐水。5、术后配合单唾液酸四己神经节苷脂注射液等营养神经治疗。6、采用美国功能独立性评测评分对患者术前、术后3个月、6个月进行评定。主要评价6 个方面的能力：生活自理能力，括约肌控制能力，活动能力，行动能力，理解交流能力， 社会认识能力。腰穿注射干细胞移植1、术前心理疏导，消除患者紧张情绪。2、患者侧卧，“抱膝凸腰”打开腰椎间隙。3、选择L34间隙为穿刺点，术野消毒铺巾。4、穿刺成功后引出脑脊液2-3ml。5、取干细胞浓度2X 106/L的提取液4ml缓慢推注至蛛网膜下腔，续推2ml生理盐水。6、留针35min观查病人，正常后拔针，无菌纱布覆盖穿刺点，术后去枕平卧6小时。立体定向移植采用立体定向技术定位病变部位，在局麻状态下，颅骨钻孔，插入穿刺针，应用微量 泵将事先准备的干细胞缓慢注入靶点。脑室引流管注入静脉滴注用生理盐水稀释至100ml 一小时内缓慢静脉滴入肝病科适应症：酒精性肝硬化失代偿期 丙肝后肝硬化失代偿期 自身免疫性肝病 急性重型肝炎肝炎后肝硬化合并肝癌肝炎后肝硬化失代偿期原发性胆汁淤积性肝硬化 不明原因性肝硬化失代偿期 药物性肝病慢性重型肝炎重症肝炎合并肝癌治疗方法肝固有动脉介入：在DSA下经股动脉穿刺插管，置管于肝固有动脉进行造影，观察肝内血管情况及有无占位性病变。将待用的细胞悬液10T5ml于10-15分钟内经肝固有动脉或左右肝动脉缓慢注入;术毕拔管,穿刺点加压包 扎后返回病房，穿刺侧下肢制动6h。内分泌科适应症：I型糖尿病II型糖尿病糖尿病足治疗方法I型糖尿病采用环磷酰胺+兔抗胸腺细胞球蛋白方案预处理，两日将分离好的干细 胞稀释至100ml静脉回输或在DSA引导下经股动脉穿刺插管置管于胰背动脉 将干细胞悬液10ml缓慢注入。II型糖尿病在DSA引导下经股动脉穿刺插管置管于胰背动脉将干细胞悬液10ml缓慢 注入。I型、II型观察治疗前后胰岛素注射剂量、HbAlc、平胰岛功能、等变化。 糖尿病足将分离好的干细胞用生理盐水稀释至60ml /腿干细胞悬液备用。消毒、铺巾，双下肢贴皮肤保护膜。将干细胞悬液注射到患者缺血的下 肢。从上向下顺序注射，每个点注射约lml,注射深度在1.52cm之间，相 邻的最大间距离为1一1.5cm。注射完毕后，注射点用无菌敷料包扎。血管外科闭塞性脉管炎治疗方法：将分离好的干细胞用生理盐水稀释至60ml /腿干细胞悬液备 用。消毒、铺巾，双下肢贴皮肤保护膜。将干细胞悬液注射到患者缺血的下 肢。从上向下顺序注射，每个点注射约1ml，注射深度在1.52cm之间，相 邻的最大间距离为1一1.5cm。注射完毕后，注射点用无菌敷料包扎。骨科股骨头坏死干细胞治疗方法：方法一：用脐带血或在局麻下穿刺髂骨，取出自体骨髓150 mL,获得干 细胞悬液约1020 mL，于获得干细胞后12 h内先行股骨头髓芯减压，然 后再行动脉灌注，灌注完成后选择旋股内侧动脉注射入部分干细胞悬液后拔 除导管及鞘管，随后用特制刮勺伸入环锯内搔刮坏死区后，再将剩余干细胞 悬液注射入环锯内，由环锯内填入大粗隆处正常松质骨及少量明胶海绵（或 生物胶）以防止干细胞漏出，拔除环锯，皮肤缝合。方法二：在DSA引导下行股动脉穿刺，将导管超选插入旋股内动脉、旋 股外动脉及闭孔动脉，将获得的干细胞悬液10ml20ml缓慢注入动脉内。术后采用髋关节Harris评分及影像学（主要为MRI）情况评定疗效合骨不连治疗方法：X线透视下将1枚骨穿针准确穿入骨不连部位，并用针尖 轻轻剥离骨不连部位的瘢痕组织及硬化骨质；用注射器抽取已制备并稀 释好的干细胞加压注入骨不连部位的髓腔内、骨折断端之间的纤维瘢痕 中及其表面；每例不少于3个注射点，每点注射610ml，保证干细胞 在骨不连处均匀分布，局部稍加压包扎。注射量根据骨折部位而定，肱 骨及胫骨中上段注射20 ml，胫骨下段骨折注射2030 ml。术后根据内固定 的坚固程度，辅助使用外固定46周。注射1个月后复查x线片，如有硬化边 缘清晰，无新生骨形成，无骨小梁通过骨折缝隙，骨不连间隙无明显缩小， 患处压痛减轻不明显者，再次注射1次。可多次注射，每次注射间隔均为1个 月左右。消化内科适应症：溃疡性结肠炎治疗方法：首先确定溃疡面的位置，溃疡面在肠系膜上动脉以上的，在DSA 经股动脉插管至肠系膜上动脉，缓慢将干细胞悬液注入。溃疡面在肠系膜上 动脉以下的，经股动脉插管至肠系膜下动脉，缓慢将干细胞悬液注入。克罗恩病治疗方法：大剂量化疗两日，第三日将获得的干细胞悬液用生理盐水稀释至 100ml，采用大号针头经静脉回输干细胞。心内科适应症：心肌梗死扩张型心肌病心力衰竭治疗方法：