饲料公司饲料中总磷的测定1 适用范围1.1本方法规定了用钒钼黄显色光度法测定饲料中总磷量的方法。本方法适用于饲料原料及饲料产品中磷的测定。1.2本方法不适用于磷酸盐 如磷酸氢钙（、） ，磷酸二氢钙 中各种磷的测定。2 原理将试样中的有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的(NH)PONHVO 16MoO3，在波长420 nm 下进行比色测43443定。3 试剂3.1盐酸溶液： 1 1；3.2硝酸，分析纯；3.3高氯酸，分析纯；3.4钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25 g，加水 200 mL加热溶解，冷却后再加入250mL 硝酸，另称取钼酸铵25 g，加水 400 mL 加热溶解，在冷却的条件下，将两种溶液混合，用水定容 1000 mL 。避光保存，若生成沉淀，则不能继续使用；3.5 磷标准液：将磷酸二氢钾在 105干燥 1 h，在干燥器中冷却后称取 0.2195g 溶解于水，定量转入 1000 mL 容量瓶中，加硝酸 3 mL ，用水稀释至刻度，摇匀，即为 50 g/mL 的磷标准液。4 仪器和设备4.1实验室用样品粉碎机或研钵；4.2分样筛：孔径0.45 mm(40 目 )；4.3分析天平：感量.0.0001g；4.4分光光度计：可在420nm 下测定吸光度；4.5比色皿： 1cm；4.6高温炉：可控温度在(550 20)；4.7瓷坩埚： 50mL ；4.8容量瓶： 50、 100、 1000 mL ；4.9移液管： 1.0、 2.0、 3.0、 5.0、 10 mL ；4.10 三角瓶： 250 mL ；4.11 凯氏烧瓶： 125、250 mL ；4.12 可调温电炉： 1000 W。5 测定步骤5.1 试样制备取 代 表 性 样 品 ， 经 四 分 法 制 得 试 样250g ， 粉 碎 过0.42mm(40 目 )孔筛，装入样品瓶内，密封保存备用。5.2 试样的分解干法 (不适用于含磷酸二氢钙Ca(H 2PO4)2 的饲料 )称取试样 13g（配合料称23g，浓缩料 1 2g)于坩埚中，精确至0.0002g，在电炉上小心炭化，再放入高温炉，在 550灼烧3h(或测粗灰分后继续进行) ，取出冷却，加入10mL 盐酸溶液和硝酸数滴，小心煮沸约10min ，冷却后转入100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。湿法称取试样 13g(配合料称23g，浓缩料 12g)于凯氏烧瓶中，精确至0.0002g，加入硝酸（ 3.2）30mL ，小心加热煮沸至黄烟逸尽，稍冷，加入高氯酸（3.3） 10mL ，继续加热至高温冒白烟 (不得蒸干 ) ，溶液基本无色， 冷却，加水 30mL ，加热煮沸， 冷却后，用水转移至100mL 容量瓶中并稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。盐酸溶解法（适用于微量元素预混料）称取试样 0.2 1g( 精确至 0.0002 g)于 100 mL 烧杯中，缓缓加入盐酸（ 3.1）10 mL ，使其全部溶解， 冷却后转入100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。5.3 工作曲线的绘制准确移取磷酸标准液（3.5）0.0、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mL（可根据仪器的实际情况调整磷标液的体积，但标线的点应不少于5 个）于50 mL 容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10.00mL ，用水稀释至刻度，摇匀，常温下放置10 min 以上，以 0.0 mL 溶液为参比， 1cm 比色皿，在 420nm 波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。5.4 试样的测定准确移取试样分解液1.0 mL 10.0mL( 含磷量50g750g，配合料取2.00mL ，浓缩料取1 2mL) 于 50 mL 容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10.00mL ，用水稀释到刻度，摇匀，常温下放置10 min 以上，用 1cm 比色皿在 420 nm 波长下测定试样分解液的吸光度，在工作曲线上查得试样分解液的磷含量。6 测定结果的计算及表述6.1 结果计算测定结果按下式计算：m1Vm1VX10 610010 4m V1m V1式中： X 以质量分数表示的磷含量，%；m 试样的质量， g；m1 由工作曲线查得试样分解液磷含量，g；V 试样分解液的总体积，mL ；V1 试样测定时移取分解液体积，mL 。6.2 结果表示每样试样称取两个平行样进行测定，以其算术平均值为测定结果，所得到的的结果应表示至小数点后两位。7 允许差含磷量 0.5%以下，允许相对偏差 10%；含磷量 0.5%以上，允许相对偏差3% 。8 注意事项8.1 炭化时应在通风柜内操作。8.2 分光光度计的使用方法，吸光度应控制在0.20.7 内，调控方法为：移取试样分解液（或磷标液）的体积。8.3 比色皿的清洗方法：长时间使用（2 周）后，将比色皿放入到 100mL 的烧杯内加硝酸（1+3） 60mL 煮沸 2min ，冷却后取出，用水洗净。8.4 移液管的精度及正确使用对结果的影响极大，务必注意。8.5 干法灰化法不适用含磷酸二氢钙Ca(H 2PO4)2 的饲料，水产料、含磷酸二氢钙Ca(H 2PO4)2 、磷酸氢钙（、）的饲料应用湿法消化法处理样品。9 准确度的保证与评价9.1 准确度的保证按标准操作。样品消化的彻底，溶解样品时无溢出，定容准确，试液移取精确。移液管的精度及正确使用对结果的影响极大，使用合格的移液管（好的厂家，有MC 标志），采用正确的洗涤方法（内用洗液，外用洗衣粉，洗净标志为内壁不挂水珠），规范的移液操作。分光光度计的使用，不应使光电倍增管（硒光电池）疲劳工作，预热时，光路关闭。控制吸光度应控制在0.2 0.7 内，调控方法为：移取试样分解液的体积。正确使用比色色皿，手拿毛糙面， 擦比色色皿时用镜头纸。钒钼酸铵显色剂10.00mL ，必须用移液管加。9.2 准确度的评价加标回收方法（以配合饲料为例）准确移取磷酸标准液（3.5）1.00 2.00mL 于 50mL 容量瓶 中 ， 加 试 样 分 解 液1.00 2.00mL ， 钒 钼 酸 铵 显 色 剂10.00mL ，用水定容到刻度，摇匀，室温放置10min ；另取试样分解液2.00 于容量瓶mL ，加钒钼酸铵显色剂10.00mL ，用水定容到刻度，摇匀，室温放置10min 。试剂空白： 50mL 容量瓶内加钒钼酸铵显色剂10.00mL ，用水定容到刻度，摇匀，室温放置10min ；上机测定吸光度，波长420nm， 1cm 比色皿，试剂空白为参比液。 加磷标的吸光度为A 加标 ,，从工作曲线上得磷的含量为 m 加标 g ，样品试液的吸光度为A 样， 从工作曲线上得磷的含量为m 标 g。计算回收率：加入磷标液中磷的量为：m 标=1.00（ 2.00）mL50g/mL=50（ 100）g回收磷的量为：m 回收=m 标 m 加标 gm回收回收率 %100回收率应为：良好95105%，及格 90110%。若回收率 90%或 110%，说明存在系统误差，需从整个检测过程查找原因，消除系统误差。实验室比对法分公司对饲料中磷含量可疑的样品应送集团质检中心复测。