加味益气聪明汤对VD大鼠行为学及海马区胆碱能神经递质的影响白 雪 彭 艳 （四川医科大学附属中医医院 四川泸州 646000） 摘要目的：观察加味益气聪明汤对血管性痴呆(VD)大鼠行为学及大脑皮层单胺类递质5-羟色胺（5-HT）、多巴胺（DA）、去甲肾上腺素（NE）的影响。方法：60只实验大鼠随机分为假手术组、模型组、尼莫地平组（简称“对照1组”）、复方苁蓉益智胶囊组（简称“对照2组”）、加味益气聪明汤组（简称“实验组”）。采用一次性永久性结扎双侧颈总动脉(2-VO)法制备VD模型; 选用Morris水迷宫实验检测大鼠的行为学变化，选择荧光分光光度法测定大脑皮层区5-HT、DA、NE的含量。结果：与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期（EL）明显延长 (P0.01)，经过有效区及平台的次数显著减少，平台及有效区停留时间明显缩短(P0.01)，模型组、对照1组、对照2组以及实验组大鼠皮层区NE、DA、5-HT含量减低 (P0.01)；与模型组比较，对照1组、对照2组、实验组EL明显缩短 (P0.05或P0.01)，经过平台及有效区次数明显增多，平台及有效区停留时间明显延长(P0.05或P0.01)，对照1组、对照2组、实验组大鼠皮层区NE、DA、5-HT明显增多 (P0.01)。结论：加味益气聪明汤能提高大脑皮层区NE、DA、5-HT的含量，调节传递效能，从而改善大鼠学习记忆能力。关键词：加味益气聪明汤;血管性痴呆;行为学; 神经递质The effect of Jiawei Yiqi Congming Decoction on synaptic plasticity of hippocampal neurons in Rats with Vascular DementiaAbstractObjective: investigating the influence of Jiawei Yiqi Congming Decoction on behavior of VD rats and surveying the impact on the monoamine neurotransmitters in the cerebral cortexs 5一HT,DA,NE. Methods : dividing randomly the 60 male SD rats into sham operation group ,model group, Nimodipine group(The control group1) , Cistanche compound yizhicapsule group(The control group 2), Jia wei Yiqicongming Decoction group(Experimental group). The operation group with an operation has left and right carotid artery ligation (CCA) for preparing for VD model (CCA). Sham operation group without ligation just Separated and exposed bilateral carotid artery in the process of operation. Detecting each group behavior mainly through the watermaze experiment ; Detecting the determination of cerebral cortex content of 5 -HT, DA, NE throgh the fluorescence spectrophoto metery. Results: To Compare with the sham operation group, the rats in the model group whose escaping latency(EL) were prolonged(P0.01), the platform and effective regional time shortened obviously,and the number of striding across the platform and effective area were significantly reduced(P0.01); the content of cortex NE、DA、5-HT in the model group、the control group 1、the control group 2 and the experimental group were decreased distinctly (P0.01). To Compare with the model group, the rats in the control group 1、the control group 2 and the experimental group,whose EL were obviously shortened(P0.05 or P0.01), Crossing the number of platform and effective area were increased significantly and the time of staying on the platform and the effective residence were significantly prolonged(P0.05 or P0.01),and the content of cortex NE、DA、5-HT were increased visibly(P0.01). Conclusion: Jia wei Yiqicongming Decoction can improve the content of the cerebral cortex NE、DA、5-HT , Adjust the transfer efficiency to improve learning and memory functionKey Words: Jiawei Yiqi Cong ming Decoction; vascular dementia ; synaptic plasticity; protection mechanism 血管性痴呆（Vascular Dementia，VD）是因脑血管意外导致脑组织缺血缺氧性损伤无法纠正，从而致使智力脑区受损，最终促使认知功能发生障碍的一系列临床综合征。VD逐渐成为当前威胁老年人群健康及生存质量的主要疾病之一1，目前尚缺乏特殊疗法及药物。前期实验已证实 2：复方制剂中重用风药可增加VD大鼠海马CA1区锥体细胞数目，以及对额叶皮层神经元MIT的形态具有改善作用，可以增强SOD活性、降低MDA的含量和改善VD大鼠的学习记忆能力。本实验在前期实验的基础上加用益气补肾的药物研究加味益气聪明汤对VD大鼠行为学及单胺类神经递质的影响，从而探讨其改善记忆能力的可能作用机制。1 材料与方法1.1 实验动物 健康雄性SD大鼠，普通级，2月大，体重（24040）g，由泸州医学院动物房提供。1.2 主要实验药品及仪器 加味益气聪明汤（黄芪、人参、葛根、石菖蒲、远志、水蛭、地龙、菟丝子、女贞子、杜仲等），由泸州医学院附属中医院制剂室制备中药汤剂浓缩液, 1ml浓缩液里含有约2.2g的生药量。尼莫地平片：20mg/片,山西亚宝药业,批号：20140328。复方苁蓉益智胶囊：0.3g/粒，辽源誉隆亚东药业，批号20141008。Morris水迷宫系统，5-HT标准品 (Sigma 美国)，DA标准品(Sigma 美国)， NE标准品(Sigma 美国)1.3 制备模型 一次性永久性结扎双侧颈总动脉(2-VO)法制备VD模型，大鼠术前禁食12h、禁水6h，1%戊巴比妥钠以3ml/kg腹腔麻醉，固定，剪毛，酒精消毒，铺手术洞巾，于颈部正中做切口，钝性分离出双侧颈总动脉（CCA），0号丝线双重结扎双侧颈总动脉，术后3d碘伏消毒伤口及周围皮肤。假手术组行颈正中切开，仅分离CCA但不结扎,随即缝合。筛选标准：最后一天假手术组大鼠逃避潜伏期（EL）的平均数为参考值，手术组各只大鼠与假手术组比较，P0.05者纳入实验。1.4 动物分组与给药 通过水迷宫实验选择学习记忆相近的大鼠60只，随机分为假手术组12只，手术组48只，采用双血管阻断法制备VD模型。术后一周进行Morris水迷宫实验，筛选出造模成功的VD大鼠，随机分为模型组、尼莫地平组（简称“对照1组”）、复方苁蓉益智胶囊组（简称“对照2组”）、加味益气聪明汤组（简称“实验组”）。尼莫地平组予以6.25mg/kg/d，复方苁蓉益智胶囊组予以0.375g/kg/d，加味益气聪明汤组予以14.58g/kg/d，均按所需剂量配制成2ml/d进行给药，模型组、假手术组予2ml/d蒸溜水灌胃,一共持续给药30天，1次/天。1.5 皮层组织的采集断头处死大鼠后,迅速在冰浴上剥离大脑皮层，用4预冷的生理盐水洗尽血液,水分吸干后称重并记录,锡箔纸包裹后放入冻存管,放于-80的冰箱内保存待测。1.6 检测指标 在大脑皮层冰浴上按1:9(W/V)加入4oC PBS液, 用手工匀浆器将标本匀浆化，制备组织匀浆，以2000转/分冷冻离心10min，收集上清液待测。严格按照试剂盒上的操作说明进行DA、NE、5-HT含量的测定。1.7 统计学方法最终数据采用SPSS 17.0软件进行分析,采用均数士标准差（S）描述计量统计资料,方差分析选用单因素分析方法(one-way ANOVA),方差齐的采用两两比较用LSD-t法，方差不齐的采用Tamhanes T2 选项。检验水准=0.05，P0.05以及=0.01，P0.01为差异有统计学意义。2 结 果2.1 行为学变化 定位航行试验：与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期（EL）明显延长，差异有统计学意义(P0.01)，对照1组、对照2组及实验组EL有所延长，但差异无统计学意义（P0.05）；与模型组比较，对照1组、对照2组、实验组的EL明显缩短,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；与对照1组比较, 对照2组、实验组大鼠EL稍延长，差异无统计学意义(P0.05）；与对照2组比较，实验组EL稍变短，差异无统计学意义(P0.05，见表1）。空间探索实验结果：与假手术组比较，模型组大鼠在平台及有效区停留时间缩短明显,经过平台次数、有效区次数明显减少,差异有统计学意义(P0.01)；与假手术组比较，对照1组、对照2组及实验组大鼠平台停留时间明显缩短，经过有效区的次数减少，差异有统计学意义(P0.05或P0.01),在有效区停留时间稍有缩短，经过平台次数稍有减少,差异无统计学意义(P0.05)；与模型组比较, 对照1组、对照2组及实验组大鼠平台及有效区停留时间延长,经过平台及有效区次数增加显著,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)；对照1组、对照2组、实验组两两比较，平台停留时间、有效区停留时间及经过平台与有效区次数均有变化,但差异无统计学意义(P0.05见表2)。表1治疗后各组大鼠逃避潜伏期时间变化（n=12，S）Table1 the changes of escape latency of rats after posttreatment（n=12，S） 分组例数