乙型肝炎病毒检测分析论文论文关键词：前S2抗原；HBV-DNA；乙型肝炎病毒标志物论文摘要：目的：探讨乙肝病毒前S2抗原(pre-S2Ag)的检测及其临床意义。方法：对188例标本采用ELISA法进行乙型肝炎病毒标志物fHBVM1及pre-S2Ag检测, 并对其中162例标本应用荧光定量PCR法检测HBV-DNA。结果：162例血清标本同时检测HBV-DNA和pre-S2Ag, 两者检出率差异无统计学意义(X2=2.78, P0.05)。HBeAg(+)与HBeAb(+)组之间pre-S2Ag阳性率的差异有统计学意义(X2=28.03, P0.005)。HBeAg(+)组、HBclgM(+)组pre-S2Ag阳性率为100, HBSAg(+)的肝癌组pre-S2Ag阳性率达95.0, 结果明显高于HBV-DNA(-)组18.4, P值均0.005。结论：pre-S2Ag是反映病毒感染与复制的指标, 与临床病情活动有关, 可作为疗效和预后的观察指标, 能完善和补充乙肝病毒血清标志物的检测。我国是乙型肝炎病毒(HepatitiSBViruS,HBV)感染的流行区, 乙型肝炎病毒是引起病毒性肝炎最常见的溶血性病毒, 不仅人群感染率高。而且有些HBV感染可能由于外周耐受, T细胞反应低下、抗原呈递抑制、选择性免疫抑制、病毒基因表达下调或基因变异等导致T细胞识别障碍, 容易转为慢性感染。部分患者可演变为肝硬化甚至原发性肝癌。不同的HBV血清免疫标志物模式提示不同的临床意义, HBV-DNA是判定HBV感染者病毒是否复制和当前有无传染性的主要指标, 了解免疫学和分子生物学标志物间的关系对临床诊断和治疗很有价值。据估计无症状的乙肝病毒携带者达1.2亿, 乙肝患者3000多万, 其中1525的患者将死于慢性肝病(肝癌、肝硬化), 给人类健康带来极大危害。为了能及时、准确地诊断, 以指导治疗及判断预后, 乙肝病毒的检测指标日益增多。文献资料显示, pre-S2Ag在乙肝HBSAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)模式中阳性检出率最高, 抗HBSAg(+)、抗HBe(+)、抗HBe+模式中次之, 其他模式较低。本文就pre-S2Ag阳性率与HBV-DNA、HBVM检测结果进行比较分析, 旨在探讨pre-S2Ag检测的临床意义, 现总结分析报道如下：1资料与方法11标本来源搜集本院2006年312月门诊和入院患者188例, 其中同时检测HBVM及HBV-DNA共162例：另外急性乙肝患者6例, 乙肝表面抗原阳性并临床诊断为肝癌患者20例。12g试剂HBVM、HBcIgM试剂由某有限公司提供；pre-S2Ag试剂由某市肝病试剂研究中心提供, 以上均采用ELISA法检测；HBV-DNA试剂购自某有限公司, 结果以500拷贝ml为阳性。以上操作严格按照试剂盒说明书进行。13检测仪器意大利希亚克(SEAC)公司的全自动免疫分析仪一爱丽丝及HBV-DNA测定由我市人民医院用国外罗氏公司的全自动荧光PCR扩增仪。14统计学方法分析计量资料、计数资料比较分别使用t检验和x2检验, 所有数据用SPSS10.0forWindowS统计软件包处理。2结果21pre-S2Ag与HBV-DNA及乙型肝炎病毒标志4h(HBVM)之间的结果比较3讨论慢性HBV感染常对部分肝细胞有长期持续性损伤, 但损伤程度与HBV-DNA水平无明显正相关, 机体对HBV的免疫应答是造成肝组织破坏及肝功能异常的主要机制。pre-S2Ag是乙肝病毒外壳中蛋白的一部分, 是HBSAg肽链N末端前附加的55个氨基酸序列, 其暴露于HBV囊膜外层, 也是病毒的表面抗原。HBV-DNA是衡量乙肝病毒复制最灵敏、最精确的证据, 是判断患者有无传染性最直接的指标。表2中, HBV-DNA与pre-S2Ag检测结果采用配对资料x2检验, 差异无统计学意义(x2=2.78, P0.05), 与文献报道相同。pre-S2Ag具有多聚人血清白蛋白受体(PHSA-R), 能与PHSA结合, 由于肝细胞表面也有PHSA-R, HBV能通过血循环中存在的PHSA的介导, 吸附到肝细胞表面, 最后由胞饮作用进入肝细胞内, 因此, 病人血清检出pre-S2Ag表示HBV在肝细胞中复制。乙肝患者血清中存在HBeAg是经典的HBV复制及评估其传染性的标志物。本组资料HBeAg(+)的标本中的pre-S2Ag阳性率为100, 同时HBclgM(+)的急性乙肝患者pre-S2Ag检出率为100, 同样表明pre-S2Ag的存在和病毒复制及临床病情活动有关。表3中, HBeAg(+1组与HBeAbf+1组与pre-S2Ag检出率比较(x2=28.03, P0.005), 说明两组pre-S2Ag检出率的差异有统计学意义。HBeAb(+)组pre-S2Ag阳性率低于HBeAg(+)组, HBeAg向HBeAb转换表示病毒复制减少, 传染性变弱, 表明pre-S2Ag转阴是病情好转、传染性减弱的指标。随着HBV-DNA(+)到HBV-DNA(-).HBeAg向HBeAb转换的过程, 其pre-S2Ag阳性标本吸光度(A值1均值由1.5351.0870.734逐渐降低(P0.05), 同时在肝癌组pre-S2Ag阳性标本A均值为1.362, HBcIgM(+)组pre-S2AS阳性标本A均值为1.305, 两疾病组proS2Ag阳性标本A均值也很高, 表明高滴度的pre-S2Ag与病情活动有关, 而低滴度的pre-S2Ag预示HBeAg的消失或病情好转。有资料表明, 在HBV无症状携带者中。如果同时查出pre-S2Ag为阳性, 说明病毒在体内还比较活跃, 并没有被清除, 肝脏还有潜在的病理损伤可能, 此类患者更易演变为肝硬化或肝癌。本次实验中HBSAg(+)的肝癌患者组, 其pre-S2Ag阳性率达95, 与文献报道相符。在HBV-DNA(-)的标本中, pre-S2Ag阳性率为18.4, 主要原因是pre-S2Ag不仅存在于病毒颗粒表面, 也出现在非传染性的球形颗粒表面, 具有调节对S蛋白的免疫应答反应及控制病毒装配等功能。也可能在病情好转、传染性减弱时存在低滴度的pre-S2Ag, 而HBV-DNA水平低而未能检出。同时也发现HBSAg(-)的标本, pre-S2Ag有5.9的阳性率, 对此类似报道极少, 可能由于S基因和前S基因尽管位于同一开放阅读框内(ORF), 但它们的启动信号不同, 彼此可以独立表达, 导致S蛋白和前S蛋白速率和含量不相同。综上所述, 本次资料显示, pre-S2Ag的表达是反映病毒感染与复制的指标, pre-S2Ag在反映病情活动和预后转归方面优于HBSAg。血清pre-S2抗原滴度的改变常先于疾病临床过程和ALT的改变, 并且其检出率和血清水平均随疾病的活动度增加而增加, 且在不同的随访时间其阴转率均高于HBSAg。急性乙型肝炎患者pre-S2抗原阴转越早。预后越好, 是病毒清除的最早迹象, 反之, pre-S2持续阳性, 将发展至慢性肝炎。有人认为, 对于基层受实验条件限制无法开展PCR的医院, 直接开展pre-S2Ag检测来代替HBV-DNA, 我们认为不妥, 两者检测的内容不同, 它们之间存在互补。pre-S2Ag可作为乙肝病毒标志物的补充, 并完善乙肝病毒血清标志物的检测。