PCR实验室管理制度1.0 目的建立PCF实验室的工作规范，确保分子诊断室正常工作。2.0 范围PCR实验室，包括试剂准备间、标本制备间、扩增间的使用及管理。3.0 职责PCR实验室的工作人员必须遵守本文件的规定。4.0 内容4.1 在进入实验室前，在隔离台戴好头套口罩，穿上鞋套与实验服。4.2 试剂准备间4.2.1 配电房先打开风机（先开送风机，再开排风机），再把空调系统打开。关闭时的顺序相反。422 其它室的用品不得带入本室。423 从PCR实验室1号入口门进入实验室，到达试剂准备间的缓冲间，脱下白色工作服，挂在缓冲 间的左侧，在缓冲间的右侧更换试剂准备间的专用工作服（蓝色），进入试剂准备间，实验中 须戴一次性手套，手套常更换。4.2.4 打开已灭菌的超净台，通风一段时间，排走臭氧。取出当次实验需配制和使用的试剂，其余试 剂要立即收好放回冰箱内。4.2.5 操作应在冰上进行。Taq酶尽量在配液的最后一步加入。应减少dNTP反复冻融的次数。每次实验后将枪调至最大量程。加模板前打开废液缸盖，加完模板后务必盖上废液缸的盖子。4.2.6 实验作业完成时，应及时清理工作台，做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。使用过的离心管、吸头须置于3%勺HCI溶液中浸泡、消毒后方可弃之。4.2.7 打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。4.2.8 在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。4.3 标本制备间4.3.1 在标本制备间的缓冲间，脱下白色工作服，换上标本制备间专用的工作服（粉红色），进入标 本制备间。4.3.2 打开传递窗的门，取出配好的试剂，使用本区专用的加样器和带滤芯枪头。4.3.3 实验作业完成时，应及时清理工作台，使用过的离心管、带滤芯枪头须置于3%勺HCl溶液中浸泡、消毒后方可弃之。4.3.4 做好实验登记，应使用本室专用的记录本和笔，打开超净台的紫外灯旋钮到20分钟处。435 打开传递窗门，垫上一次性手套，将配好的试剂放到传递窗里，关上传递窗门。436 提取基因组模板，提取过程中丢弃的枪头、离心管和废液请丢弃在此垃圾袋并于实验结束后立 即将垃圾袋扎口丢弃。提取质粒可先提取野生型质粒再提取突变型质粒。每次提取工作完成后 擦拭台面。4.3.7 在试剂缓冲间脱下工作服，穿上白色工作服。4.4 扩增间4.4.1 在扩增间的缓冲间，脱下白色工作服，换上扩增间专用工作服（绿色）。4.4.2 打开传递窗门，取出配好的试剂，关上传递窗门。4.4.3 打开PCF仪预热20min。4.4.4 将反应管放入PCF仪中，关好门。4.4.5 脱掉手套，设定程序，并命名。4.4.6 结束后需待仪器冷却后方可取出PCR仪里的试剂，取出时用镊子将试剂条夹出，注意勿要使管盖打开，用三个 PE手套包好方可弃之。机器上不允许存放PCR扩增产物，每次实验后请自行及时清理PCR扩增产物。4.4.7 结束实验后，到配电房先把空调系统关掉，再关掉排风机，之后关掉送风机。4.4.8 文件的处理：当天所做的实验结果，当天拷到部门电脑上处理，复制一份将文件名改为记录本上的命名。可将试验结果导到PPT上，并标记。4.5 传递窗的使用4.5.1 传递窗每天早上灭菌20分钟一次。当天使用可不用再次灭菌。将试剂放到传递窗时，在底下垫上一层手套。4.6 压力监控4.6.1 每天早上空调运行半小时后，记录各PCR实验室的压力差：试剂准备间：510;标本制备间:-5-10 ;扩增间：V -10。各缓冲间的压力为+5.4.7 超净台的摆放4.8 实验室卫生管理4.8.1 禁止非工作人员进入实验室；参观实验室等特殊情况须在实验室管理员协助下进行。4.8.2 实验室内各工作人员应有个人防护意识，进入实验室时应更换工作服和鞋子，穿着整洁，不留长 指甲，不佩戴首饰，长发应束于脑后；禁止在工作区饮食、吸烟、处理隐形眼镜、化妆及储存食 物；禁止将个人物品带入实验室；实验室内应避免手T口，手T眼，手T鼻接触，以防止间接感 染。4.8.3 实验结束后仍需保留使用的物质，应移入具塞的容器中，并做好标识标签，并写清楚名称、浓度、 配制日期、储存温度、有效期和配制人，并放置于相应保存条件下；勿置室温过夜。4.8.4 每天配制使用浓度的消毒液，放于固定地点，用于污染时消毒用，应定期更换消毒液品种。4.8.5 每天上班 8 点 45 分先关实验室紫外灯，然后开启风扇，打开实验室走廊窗户。每天9 点前每间负责人填写冰箱温湿度记录表。4.8.6 下午 4点 45 分每间负责人填写实验室及冰箱温湿度记录表，清理实验室卫生，检查实验室垃圾 及废液缸枪尖，生物垃圾放置于生物安全垃圾桶内，通知专门的垃圾转运车进行清除。在生物 安全垃圾桶周边喷洒 84 消毒液（按 1:9 或者 1:10 比例配制）。4.8.7 每日卫生打扫完后，在实验室内喷洒 84 消毒液，喷洒完，待 20 分钟过后，对实验室仪器表面及实验台面要用干布擦拭一遍，再用清水清洗一遍，防止仪器被腐蚀。MX3000P仪器反应孔用75%酒精棉球擦拭，擦拭完后用清水擦拭。4.8.8 关闭风扇，开启紫外灯，过夜。关闭实验室走廊窗户，喷洒84 消毒液。4.8.9 第一、二间实验室的 3%盐酸在实验室内配制，由当周值日人员负责。4.8.10 实验服的清洗时间为每月的 1、2、3、15、16、17日， 1、15 日洗第一间实验服， 2、16 日洗第 二间实验服， 3、17 日洗第三间实验服，遇节假日顺延。4.8.11 每周对回风口过滤网进行清洗，由当周值日人员负责。4.8.12 如遇加班，以上由加班人员负责；若有请假，请假人员需与其他人员协商调整，否则视为未执 行。4.8.13 以上执行情况每天都应填写记录表，并由专人检查确认签字。5.0 注意事项5.1.1 PCR实验室各室使用、进入及单一流向制度，请各位技术员不要贪方便，严格按照规程操作，以 免造成严重后果。5.1.2 dNTP的使用：dNTP每周更换一次，每周一做实验时，取已分装好的，周五时丢弃。5.1.3 每位技术员使用自己独立的配液盒。5.1.4 进入各室时请关好门。5.1.5 废液缸中的枪头满到 3/4 时，要及时倒到自封袋中。5.1.6 缓冲间的内外两个门不能同时开启。5.1.76.0 （此文档部分内容来源于网络，如有侵权请告知删除，文档可自行编辑修改内容，供参 考，感谢您的支持）6.1.1