文件编号前 言 某某省某某医院临床基因扩增检验实验室建于2003年12月。实验室的设置、设备及人员配置均严格按照部、省临床基因诊断实验室规范化标准结合自身条件而建立。各项管理制度、质量保证体系以及基本操作要求和标准操作程序均已制定。某某省某某医院临床基因扩增检验实验室将面向全省卫生系统，开展临床基因诊断实验和相关知识的培训工作，使被培训人员掌握临床基因诊断基础理论知识、实验室管理和质量保证措施、规范化操作方法以及了解基因诊断领域的进展。同时还将开展基因（主要是遗传基因方面）的临床检测及科学研究工作，为我省临床基因诊断事业的发展做出一份贡献。质 量 方 针 临床基因扩增检验实验室是严格按照部、省临床基因扩增实验室规范化标准进行管理与操作，始终遵循：以病人为中心以质量为核心以科学为依据编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 岗 位 职 责1实验室负责人岗位职责（1） 确定质量方针，编制质量手册，并组织人员学习，统一思想。（2） 负责实验室全面质量，包括试剂盒的质量检验；操作的质量检查；质量控制（室内室间质评）的结果检查；实验结果的核对、质检和签发报告；确定人员培训计划；安排日常工作，确保及时发出质量合格的报告。（3） 定期审核和评审质量手册的运行情况。（4） 对实验室对内外发出的报告负责，并以签名签字形式表示。2技术人员岗位职责（1） 按时消毒、清洁实验室，并记录签字。（2） 检查仪器设备的维护状况，记录使用情况并签字。（3） 按质量手册规定的标准操作程序（SOP）操作试验，并填写报告签字。（4） 按规定进行实验的自主质控工作（每次试验必须有室内质控措施），并做好记录签字。编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 人 员 培 训 及 成 果1 人员组成及技术档案本室有工作人员2人，其中1名中级，1名初级。2 培训记录及专业文章发表情况编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 实验室设施环境及规章制度1、实验室分区管理平面图：见图示1。2、实验室基本设施：分隔和面积：实验室严格按照标准，分隔为三个独立的工作室：试剂准备室、样品处理室、基因扩增室。工作流程：从试剂准备样品处理基因扩增，工作人员只能单向流动。进入下一区域，必须更换工作服、手套。通风：各室空气流通性良好。照明：室内有良好的照明度。环境：洁净、无菌；各室均配有紫外消毒设备。各室的仪器、实验和文具用具以及清洁物品均属于各室专用。3、实验室消毒隔离及污物处理：见实验室废弃物处理的标准操作程序。4、实验室规章制度：4.1 总则4.1.1 进入基因诊断实验室的任何工作人员都必须遵守实验室规则；非工作人员未经允许不得入内，尤其不得为找人而逆向误入PCR实验室，以免造成不应有的污染。4.1.2 临床基因诊断实验室分试剂准备、样品处理、基因扩增室三个室，各室拥有专用的仪器设备及实验物品（含加样器、试管架、吸头、记录纸、笔、甚至清洁用品等），不得混用，须贴上不同颜色标签予以区别；试剂准备室为白色标识、样品制备室为蓝色标识、扩增室为绿色标识。4.1.3 临床基因诊断实验室工作人员应具备医学检验、微生物学检验基本知识、大中专以上学历、并受过PCR实验的基本知识和技能培训。4.2.1 进入实验室的工作人员必须遵守实验室的唯一流向的规定，严禁反向流动。4.2.2 进入实验室，必须更换本室有颜色标识的工作服（含帽和鞋）。勤换洗工作服。4.2.3 接收样品时应检查样品是否符合要求、贴上标签并做好登记。4.2.4 实验室技术人员必须严格按照PCR实验标准操作程序进行，包括实验室擦洗、台面消毒，离心管、吸头的无菌灭活准备，仪器使用和废弃物处理等。4.2.5 进入PCR实验室后区的物品不许带进PCR实验室前区。4.2.6 任何实验操作包括仪器使用等情况均须做好记录。4.2.7 检测结果报告应完整（包括：检验项目、靶核酸类型及结果等），并经专业负责人审核签字后方可发出。4.2.8 每天实验开始前，结束后均应按要求清洁、消毒地面和实验台面。4.2.9 保持临床基因诊断实验室内空气唯一流向和空气流通。4.2.10定期校准和维修PCR仪、离心机、水浴箱、冰箱等仪器、设备。4.2.11实验室内不得从事与实验无关事宜如聊天、饮食、吸烟等；室内禁用电风扇。4.2.12每天下班前处理好废弃物品，关好水、电和门窗。4.3试剂准备室4.3.1实验人员进入该室须穿本室专用白色工作服。实验中须戴手套。4.3.2每天实验开始前，清洁实验台并应打开紫外线灯消毒30分钟。4.3.3取出当天实验需配制和使用的试剂，其余试剂要立即收好，放回冰箱内。4.3.4试验中使用的离心管、吸头等应经过灭活无菌处理，（应在消毒的有效期内）。4.3.5其它室的用品不得带入本室。4.3.6每次试验均有记录；且使用本室专用的、带有本室标识的记录本、纸笔。4.3.7实验完毕后要整理、清洁工作台面。4.4样品准备室4.4.1实验人员进入该室须穿本室专用兰色工作服。实验中须戴手套，手套需常更换。4.4.2每天实验开始前，清洁实验室和实验台，并应打开紫外灯消毒30分钟。4.4.3样品的接受，登记，保存和提取按标准操作程序及试剂盒要求进行。4.4.4使用本室专用的，经灭菌处理的加样器和带滤心的吸头。4.4.5做好实验记录，并使用本室专用的记录本和笔。4.4.6 PCR扩增后区的物品不得带入本室。4.4.7实验完毕清洁实验室和实验台，并打开紫外灯消毒。4.5基因扩增室4.5.1实验人员进入该室须穿本室专用绿色工作服实验中须戴手套，手套需常更换。4.5.2 每天实验开始前，清洁实验室和实验台，并应打开紫外灯消毒30分钟。4.5.3 使用本室专用的，经灭菌处理的加样器和带滤心的吸头。4.5.4需在此进行操作的，如巢式扩增，第一次扩增的模板必须在本室内从反应管中取出，并加入另一只反应管中，此操作不可返回扩增前区进行。4.5.5 非全封闭操作（即须开启反应管），应打开排风扇24小时排气，保持室内负压状态。4.5.6 做好实验记录，且使用本室专用的记录本和笔。4.5.7 PCR扩增室的物品不得带入扩增前区。4.5.8 实验完毕清洁实验室和实验台，并打开紫外灯消毒。编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 仪 器 设 备 和 标 准 物 质1 仪器设备的配置1.1试剂准备室内配置的设备：紫外灯、普通高速台式离心机、旋涡振荡器、一套连续可调式移液枪和无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、各种规格的无菌备用的离心管、PCR反应管和玻璃器皿、实验台及本室专用的文具、纸张；本室专用的白色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。1.2样品制备室内配置的设备：紫外灯、台式高速冷冻离心机、旋涡振荡器、恒温水浴锅、二套连续可调式移液枪、无菌过滤咀型移液器枪头、冰箱、各种规格的无菌备用的离心管和玻璃器皿、实验台及本室专用的样品登记本、文具、纸张；本室专用的蓝色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。1.3 基因扩增室内配置的设备：紫外灯、PCR扩增仪、实验台及本室专用的文具、纸张；本室专用的绿色隔离服、一次性手套、污物桶及清洁用品。2 仪器设备的使用、维护及校准见仪器使用、维护及校准标准操作程序。3 仪器设备的记录和标识所有有关基因诊断实验室仪器使用、维护及校准的操作均记录备案。校准后的仪器贴上标识，说明校准日期和状态。4 标准物质阳性、阴性对照：来源于相应的检测试剂盒。室内质控物、室间质评物：来源于卫生部和省临检中心。编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 校 准1 移液器、扩增仪、离心机等对检测结果有效性、准确性有影响的检验设备，投入使用前必须进行校准，并每年校准1次。2 参加卫生部组织的室间质评。编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 检 验 方 法1 检验项目及方法项目：乙型肝炎病毒DNA定量检测、丙型肝炎病毒RNA定量检测方法：TaqMan荧光定量PCR法乙型肝炎病毒DNA定量检测TaqMan荧光定量PCR法丙型肝炎病毒RNA定量检测2 操作手册仪器使用、维护及校准标准操作程序样品采集、保存及运输标准操作程序实验过程标准操作程序（包括：试剂准备、样品制备、基因扩增和产物检测SOP）各检测项目标准操作程序实验室消毒及污物处理标准操作程序3 质量保证措施室内质控31核酸提取质控 在核酸提取中，带一份弱阳性质控样本和一份阴性质控样本（基质与待测样本相同），分别判定核酸提取的有效性和核酸提取过程中是否发生污染。32核酸扩增质控 靶核酸为DNA：带一份弱阳性靶DNA质控和一份阴性质控，以判定DNA扩增的有效性；靶核酸为RNA：一份弱阳性cDNA质控、一份弱阳性RNA质控和一份阴性对照以判定转录和DNA扩增的有效性33产物检测质控 一份靶DNA或已稀释的扩增靶DNA阳性质控、一份阴性质控以及一份试剂空白质控与待测的扩增样本同步检测，以判定产物检测中核酸杂交及显色测定的有效性。室间质控参加由卫生部临床检验中心组织的全国临床基因扩增项目的室间质量评价。编制： 日期： 审批： 日期： 文件编号 版 本第二版 样 品 处 置1样本的标识：标识由三部分构成-标本采集日期、该检测批次的标本序号和标本类型，三部分间无间隔符号，例如：02 08 01 01 B分别表示年、 月、 日、 序号和血液标本，序号（01-99），整个标识为8-11位；2样本的采集、保存和运输：见样品采集、保存及运输标准操作程序。3样本的接收、记录：样品接收后，立即贴上本室设计的样品标识，并在接收标本记录表上按要求进行登记。无签、迟送的样品、样品量不足、溶血的样品及其它未按规定采集的样品，拒绝接收并记录于