常用培养基配方目 录：01糖发酵管02 ONPG培养基03西蒙氏柠檬酸盐培养基04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)05克氏柠檬酸盐培养基06丙二酸钠培养基07葡葡糖铵培养基08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)09 马尿酸钠培养基10营养明胶11苯丙氨酸培养基12 氨基酸脱羧酶试验培养基13蛋白胨水(靛基质试验用)14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)15 尿素琼脂16 氰化钾(KCN)培养基17 氧化酶试验18 硝酸盐培养基19 细胞色素氧化酶试验20 过氧化氢酶试验21 过氧化物酶试验22 磷酸盐缓冲液23明胶磷酸盐缓冲液24 乳酸-苯酚溶液25 肉浸液肉汤26肉浸液琼脂27牛肉(或牛心)消化汤28血消化汤29豆粉琼脂30血琼脂31营养琼脂32营养肉汤33 乳糖胆盐发酵管34乳糖发酵管35 EC肉汤36 缓冲蛋白胨水(BP)37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)41 GN增菌液42 肠道菌增菌肉汤43 亚硫酸铋琼脂(BS)44 DHL琼脂45 HE琼脂46 SS琼脂47 WS琼脂48 麦康凯琼脂49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管55 5%乳糖发酵管56 CAYE培养基57 Honda氏产毒肉汤58 Elek氏培养基(毒素测定用)59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基60 胰蛋白胨水61 Rustigian氏尿素培养液62 氯化钠结晶紫增菌液63 氯化钠蔗糖琼脂64 嗜盐菌选择性琼脂65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂66 氯化钠血琼脂67 3.5%氯化钠生化试验培养基68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN-1培养基70 嗜盐性试验培养基 01 糖发酵管成分:牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 3g磷酸氢二钠(Na2HPO412H2O) 2g0.2%滇麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.4制法:1葡萄糖发酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分装于有一个倒置小管的小试管内,121高压灭菌15min.2其他各种糖发酵管可按上述成分配好后,分装每瓶100mL,121高压灭菌15min.另将各种糖类分别配好10%溶液,同时高压灭菌.将5mL糖溶液加入于100mL培养基内,以无菌操作分装小试管. 注:蔗糖不纯,加热后会自行水解者,应采用过滤法除菌.试验方法:从琼脂斜面上挑取小量培养物接种,于361培养,一般观察23d.迟缓反应需观察1430d.02 ONPG培养基成分:邻硝基酚-D-半乳糖昔(ONPG) 60mg(O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside)0.01mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5) 10mL1%蛋白胨水(PH7.5) 30mL制法:将ONPG溶于缓冲液内,加入蛋白胨水,以过滤法除菌,分装于10mm75mm试管,每管0.5mL,用橡皮塞塞紧.试验方法:自琼脂斜面上挑取培养物1满环接种,于361培养13h和24h观察结果.如果-半乳糖苷酶产生,则于13h变黄色,如无此酶则24h不变色.03 西蒙氏柠檬酸盐培养基成分:氯化钠 5g 硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g柠檬酸钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化.然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:挑取少量琼脂培养物接种,于361培养4d,每天观察结果.阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色. 04 缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用)成分:磷酸氢二钾 5g多胨 7g葡萄糖 5g蒸馏水 1000mLpH7.0制法:溶化后校正pH,分装试管,每管1mL,121高压灭菌15min.甲基红(MR)试验:自琼脂斜面挑取少量培养物接种本培养基中,于361培养25d,哈夫尼亚菌则应在2225培养.滴加甲基红试剂一滴,立即观察结果.鲜红色为阳性,黄色为阴性.甲基红试剂配法:10mg甲基红溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸馏水.V-P试验:用琼脂培养物接种本培养基中,于361培养24d.哈夫尼亚菌则应在2225培养.加入6%-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氢氧化钾溶液0.2mL,充分振摇试管,观察结果.阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在361下培养4h再进行观察.05克氏柠檬酸盐培养基成分:柠檬酸钠 3g葡萄糖 0.2g酵母浸膏 0.5g单盐酸半胱氨酸 0.1g磷酸二氢钾 1g氯化钠 5g0.2%酚红溶液 6mL琼脂 15g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解,分装试管,121高压灭菌15min.放成斜面.试验方法:用琼脂培养物接种整个斜面,在361培养7d,每天观察结果.阳性者培养基变为红色.06 丙二酸钠培养基成分:酵母浸膏 1g硫酸铵 2g磷酸氢二钾 0.6g磷酸二氢钾 0.4g氯化钠 2g丙二酸钠 3g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH6.8制法:先将酵母浸膏和盐类溶解于水,校正pH后再加入指示剂,分装试管,121高压灭菌15min. 试验方法:用新鲜的琼脂培养物接种,于361培养48h,观察结果.阳性者由绿色变为蓝色.07 葡葡糖铵培养基成分:氯化钠 5g硫酸镁(MgSO47H2O) 0.2g磷酸二氢铵 1g磷酸氢二钾 1g葡萄糖 2g琼脂 20g蒸馏水 1000mL0.2%溴麝香草酚蓝溶液 40mLpH6.8制法:先将盐类和糖溶解于水内,校正pH,再加琼脂,加热溶化,然后加入指示剂,混合均匀后分装试管,121高压灭菌15min,放成斜面.试验方法:用接种针轻轻触及培养物的表面,在盐水管内做成极稀的悬液,肉眼观察不见混浊,以每一接种环内含菌数在20100之间为宜.将接种环灭菌后挑取菌液接种,同时再以同法接种普通斜面一支作为对照.于361培养24h.阳性者葡萄糖铵斜面上有正常大小的菌落生长;阴性者不生长,但在对照培养基上生长良好.如在葡萄糖铵斜面生长极微小的菌落可视为阴性结果.注:容器使用前应用清洁液浸泡.再用清水,蒸馏水冲洗干净,并用新棉花做成棉塞,干热灭菌后使用.如果操作时不注意,有杂质污染时,易造成假阳性的结果.08 Hugh-Leifson培养基(O/F试验用)成分:蛋白胨 2g氯化钠 5g磷酸氢二钾 0.3g琼脂 4g葡萄糖 10g0.2%溴麝香草酚蓝溶液 12mL蒸馏水 1000mLpH7.2制法:将蛋白胨和盐类加水溶解后,校正pH至7.2.加入葡萄糖,琼脂煮沸,溶化琼脂,然后加入指示剂.混匀后,分装试管,121高压灭菌15min,直立凝固备用.试验方法:从斜面上挑取小量培养物作穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂液于表面,高度约1cm,于361培养.09 马尿酸钠培养基成分:马尿酸钠 1g肉浸液 100mL制法:将马尿酸钠溶解于肉浸液内,分装于小试管内,并于管壁画一横线.以标志管内液面高度,高压灭菌12120min.试剂:三氯化铁(FeCl36H2O)12g,溶于2%盐酸溶液100mL中即成.试验方法:用纯培养物接种,于42培养48h,观察培养液是否到达试管壁上记号处,如不足时,用蒸馏水补足至原量.经离心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化铁试剂0.2mL,立即混合均匀,经1015min,观察结果.结果:出现恒久之沉淀物为阳性.10营养明胶成分:蛋白胨 5g牛肉膏 3g明胶 120g蒸馏水 1000mLpH6.87.0制法:加热溶解,校正至pH7.47.6,分装小管,121高压灭菌10min,取出后迅速冷却,使其凝固.复查最终pH应为6.87.0.试验方法:用琼脂培养物穿刺接种,放在2225培养,每天观察结果,记录液化时间.或放在36士1培养,每天取出,放冰箱内30min后再观察结果. 11苯丙氨酸培养基成分:酵母浸膏 3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g) 2g磷酸氢二钠 1g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mL制法:加热溶解后分装试管,121高压灭菌15min,使成斜面.试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在361培养4h或1824h.滴加10%三氯化铁溶液23滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色.12 氨基酸脱羧酶试验培养基成分:蛋白胨 5g酵母浸膏 3g葡萄糖 1g蒸馏水 1000mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液 1mLL-氨基酸或DL-氨基酸 0.5或1g/100mLpH6.8制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100mL,分别加入各种氨基酸:赖氨酸,精氨酸和鸟氨酸.L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入.再行校正pH至6.8.对照培养基不加氨基酸.分装于灭菌的小试管内,每管0.5mL,上面滴加一层液体石蜡,115高压灭菌10min.试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于361培养1824h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色.阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色.对照管应为黄色. 13蛋白胨水(靛基质试验用)成分:蛋白胨(或胰蛋白胨) 20g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分装小试管,121高压灭菌15min.靛基质试剂柯凡克试剂:将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后缓慢加入浓盐酸25mL.欧-波试剂:将1g对二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇内.然后缓慢加入浓盐酸20mL.试验方法:挑取小量培养物接种,在361培养12d,必要时可培养45d.加入柯凡克试剂约0.5mL,轻摇试管,阳性者于试剂层呈深红色;或加入欧-波试剂约0.5mL,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色.注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用. 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用)成分:牛肉膏 3g酵母浸膏 3g蛋白胨 10g硫酸亚铁 0.2g硫代硫酸钠 0.3g氯化钠 5g琼脂 12g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115高压灭菌15min,取出直立候其凝固.试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于361培养12d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色.注:肠杆菌科细菌测定