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实验室常用染色液配方1、吕氏(Loeffler)美蓝染色液A液:美蓝(Methyleneblue)0.3克95%酒精毫升B液:氢氧化钾(KOH)0.01克蒸馏水100毫升分别配制A液和B液,然后混合即成。2、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液A液:碱性复红(Basicfuchsin)0.3克95%酒精10.O毫升B液:石炭酸(苯酚)5.0克蒸馏水95毫升将碱性复红溶于95%酒精中,配成A液。将石炭酸溶于蒸馏水中,配成B液。将两者混合即成。3、结晶紫染色液(Huclker改订)A液:结晶紫(Crystaiviolet)2.5克95%酒精25.0毫升B液:草酸铵(NH4)2C2O4H2O1.0克蒸馏水100毫升将结晶紫研细后,加入95%酒精,使之溶解,配成A液。将草酸铵溶于蒸馏水,配成B液。两液混合即成。4、路戈氏(Lugol)碘液(革氏鉴别染色用)碘1.0克碘化钾2.0克蒸馏水300毫升先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,再将碘溶于碘化钾溶液中,溶时可稍加热,最后加足蒸馏水量。5、番红染色液(革氏鉴别染色用)番红O(SafraninO)2.0克蒸馏水100毫升6、孔雀绿染色液(芽孢染色用)孔雀绿(Malachitegreen)5.0克蒸馏水100毫升先将孔雀绿研细,加少许95%酒精溶解,再加蒸馏水。7、Dorner黑素液(英膜染色用)黑素(Nigrosin)10.0克蒸馏水100毫升福尔马林(40%甲醛)0.5毫升将黑素在蒸馏水中煮沸5分钟,加入福尔马林作为防腐剂,用玻璃棉过滤。8、刚果红染色液刚果红(Congored)2.0克蒸馏水100毫升9、稀释结晶紫染液(放线菌染色用)结晶紫染色液(同3)5.0毫升蒸馏水95.010、乳酸石碳酸棉蓝染色液(真菌制片,短期保存)石炭酸10.0克甘油20.0毫升乳酸(比重l.21)10.0毫升棉蓝0.02克蒸馏水10.0毫升将碳酸加在蒸溜水中加热溶化,加入乳酸和甘油,最后加入棉蓝,溶解即成。1. 11动物组织石蜡切片染色方法苏木精-伊红(HE)染色:二甲苯I,n各10min,依次进入无水乙醇、950mL/L,900mL/L,800mL/L及700mL/L的酒精各5min,蒸馏水洗;入苏木精染液10min,盐酸酒精分色4s,自来水洗10min;依次入700mL/L,800mL/L及900mL/L酒精各5min,入伊红染液染色10min;入950mL/L及无水乙醇I,n各5min,以二甲苯透明,中性树脂封片一、常用染色液的配制碘-碘化钾(I2-KI)溶液能将淀粉染成蓝紫色,蛋白质染成黄色,也是植物组织化学测定的重要试剂。配方:碘化钾2g;蒸馏水300ml;碘1g先将碘化钾溶于少量蒸馏水中,待全溶解后再加碘,振荡溶解后稀释至300mL,保存在棕色玻璃瓶内。用时可将其稀释2-10倍,这样染色不致过深,效果更佳。2. 苏丹川(sudan川或W)能使木栓化、角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成红色或淡红色,是著名的脂肪染色剂。配方:(1)苏丹Ill或苏丹W干粉0.1g;95%酒精10ml;过滤后再加入10ml甘油(2)先将0.1g苏丹III或IV溶解在50ml丙酮中,再加入70%酒精50ml。(3)苏丹III70%乙醇的饱和溶液。3. 1%醋酸洋红(acetocarmine)酸性染料,适用于压碎涂抹制片,能使染色体染成深红色,细胞质成浅红色。配方:洋红1g;45醋酸100ml煮沸2h左右,并随时注意补充加入蒸馏水到原含量,然后冷却过滤,加入4%铁明矶溶液12滴(不能多加,否则会发生沉淀),放入棕色瓶中备用。4. 改良苯芬品红染色液(Carbolfuchsine)核染色剂。配制步骤:先配成三种原液,再配成染色液。原液A:3g碱性品红溶于100ml70%酒精中。原液B:取原液A10ml加入到90ml5%石炭酸水溶液中。原液C:取原液B55ml,加入6ml冰醋酸和6ml福尔马林(38%的甲醛)。(原液A和原液C可长期保存,原液B限两周内使用)染色液:取C液1020ml,力口45%冰醋酸8090ml,再加山梨醇11.8g,配成10%20%浓度的石炭酸品红液,放置两周后使用,效果显著(若立即用,则着色能力差)。5. 适用范围:适用于植物组织压片法和涂片法,染色体着色深,保存性好,使用23年不变质。山梨醇为助渗剂,兼有稳定染色液的作用,假如没有山梨醇也能染色,但效果较差。/sell中性红(neutralred)溶液用于染细胞中的液泡,可鉴定细胞死活。配方:中性红0.1g;蒸馏水100ml使用时再稀释10倍左右。6. 曙红Y(伊红,eosinY)酒精溶液常与苏木精对染,能使细胞质染成浅红色,起衬染作用。配方:曙红0.25g;95%酒清100ml也常用于95%酒精脱水时,加入少量曙红溶液,其目的是在包埋、切片、展片、镜检时便于识别材料。7. 钉红(rutheniumred)染液钉红是细胞胞间层专性染料,其配后不易保存,应现用现配。配方:钌红510mg;蒸馏水25-50ml龙胆紫(gentianviolet)为酸性染料,适用于细菌涂抹制片。8. 配方:龙胆紫0.21g;蒸馏水100ml苯胺兰(anilineblue)溶液为酸性染料,对纤维素细胞壁、非染色质的结构、鞭毛等,尤其是染丝状藻类效果好。还多用于与真曙红作双重染色,对于高等植物多用于与番红作双重染色。9. 配方:苯胺兰1g;35%或95%酒精100ml间苯三酚(phloroglucin)溶液用于测定木质素。配方:间苯三酚5g;95%酒精100ml注:此溶液呈黄褐色即失效。橘红G(orangeG)酒精溶液为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用。配方:橘红G1g;95%酒精100ml番红(safraninO)为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色。配方:(1)番红水溶液番红0.1或1g;蒸馏水100ml(2)番红酒精溶液番红0.5或1g;50%(或95%)酒精100ml(3)苯胺番红酒精染色液甲液番红5g+95%酒精50ml乙液苯胺油20ml+蒸馏水450ml将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用。10. 固绿(fastgreen)又称快绿溶液。为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间。配方:(1)固绿酒精液固绿0.1g;95酒精100ml(2)苯胺固绿酒精液固绿1g;无水酒精100ml;苯胺油4ml配后充分摇匀,过滤后使用。现配现用效果好。U苏木精(hematoxylin)染液苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色。配方很多,现举海登汉氏(Heidenhains)苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液。配方:甲液(媒染剂):硫酸铁铵(铁明矾)2-4g;蒸馏水100ml(必须保持新鲜,最好临用之前配制)乙液(染色剂):苏木精0.5-1g;95酒精10ml;蒸馏水90ml配制步骤:(1)将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化(通常在室内放置两个月后方可使用)。(2)加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存。切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。15亚甲基蓝染液常用于细菌、活体细胞等的染色。取0.1g亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成。詹纳斯绿B(JanusgreenB)染液将5.18gJanus绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。硫堇染液取0.25克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用。使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应。黑色素液水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。19墨汁染色液国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。用作荚膜的背景染色。吕氏(Loeffier)美蓝染色液A液:美蓝(methyleneblue,又名甲烯蓝)0.3g,95%乙醇30mL;B液:0.01%K0H100mL。混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液,按1:10或1:100稀释均可。革兰氏染色液(1)结晶紫(cristalviolet)液:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制。芦戈(Lugol)氏碘液:碘1g,KI2g,蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL,即成。配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色能使用。(3)95%乙醇:用于脱色,脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。(4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL)10mL,加蒸馏水90mL。番红溶液:番红O(safranineO,又称沙黄O)2.5g,95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性(G+)或阴性(G-)细菌,前者蓝紫色,后者淡红色。20. 齐氏(Ziehl)石炭酸复红液:碱性复红0.3g溶于95%乙醇10mL中为A液;0.01%KOH溶液100mL为B液。混合A、B液即成。姬姆萨(Giemsa)染液(1)贮存液:称取姬姆萨粉0.5g,甘油33mL,甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56C放置1-24h后即可使用。应用液(临用时配制):取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液:甲醇=1:4的比例配制成染色液。1%瑞氏(Wrights)染色液称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳。二、常用试剂的配制(一)显微镜镜头清洁剂将乙醚和乙醇按7:3混合,装入滴瓶备用。用于擦拭显微镜镜头上油迹和污垢等(注意瓶口必须塞紧,以免挥发)。(二)固定液福尔马林-乙酸-酒精固定液(FAA,又称万能固定剂)福尔马林(38%甲醛)5ml+冰乙酸5ml+70%酒精90ml,可用于固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类。幼嫩材料用50酒精代替70酒精,可防止材料收缩;还可加入5ml甘油(丙三醇)以防蒸发和材料变硬。FAA可兼作保存剂。福尔马林-丙酸-酒精固定液(FPA)福尔马林5ml+丙酸5ml+70%酒精90ml,用于固定一般的植物材料,通常固定24h,效果比FAA好,并可长期保存。1. 福尔马林-丙酸-氯仿固定液(卡诺固定液)配方一:无水酒精3份冰乙酸1份。配方二:无水酒精6份冰乙酸1份氯仿3份。是研究植物细胞分裂和染色的优良固定液,材料固定后,用95%和85%的酒精浸洗,清洗2-3次,也可转入70%酒精中保存备用。甘油-酒精软化剂甘油1份50%或70%酒精1份,适用于木材的软化,将木质化根、茎等材料排除空气后浸入软化液中,时间至少一周或更长一些,也可将材料保存于其中备用。铬酸-乙酸固定液根据固定对象的不同,可分强、中、弱3种不同的配方:弱液配方:10%铬酸2.5m
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