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人肌钙蛋白(Tn-)酶联免疫分析试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂仅供研究使用 目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中肌钙蛋白(Tn-)的含量。实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人肌钙蛋白(Tn-)水平。用纯化的人肌钙蛋白(Tn-)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入肌钙蛋白(Tn-),再与HRP标记的肌钙蛋白(Tn-)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肌钙蛋白(Tn-)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人肌钙蛋白(Tn-)浓度。试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1481962-8保存标准品:45g/L0.5ml1瓶0.5ml1瓶2-8保存标准品稀释液1.5ml1瓶1.5ml1瓶2-8保存酶标试剂3 ml1瓶6 ml1瓶2-8保存样品稀释液3 ml1瓶6 ml1瓶2-8保存显色剂A液3 ml1瓶6 ml1瓶2-8保存显色剂B液3 ml1瓶6 ml1瓶2-8保存终止液3ml1瓶6ml1瓶2-8保存浓缩洗涤液(20ml20倍)1瓶(20ml30倍)1瓶2-8保存样本处理及要求:1. 血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。2. 血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3. 尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20保存,但应避免反复冻融.7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤:1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100l,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉,再各取50l分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50l分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50l,混匀后从第七、第八孔中分别取50l加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l,混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉。(稀释后各孔加样量都为50l,浓度分别为30g/L,20g/L ,10g/L,5g/L,2.5 g/L)。2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l,然后再加待测样品10l(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。3. 温育:用封板膜封板后置37温育30分钟。4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。6. 加酶:每孔加入酶标试剂50l,空白孔除外。7. 温育:操作同3。8. 洗涤:操作同5。9. 显色:每孔先加入显色剂A50l,再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀,37避光显色15分钟. 10. 终止:每孔加终止液50l,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。注意事项:1 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。2 浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。3 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。4 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(n5)。5 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。6 底物请避光保存。7 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。计算:以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释 倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值 代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释 倍数,即为样品的实际浓度。 试剂盒性能:1.样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.95以上。2.批内与批见应分别小于9%和11%检测范围:46.88 pg/ml-3000 pg/ml灵敏度:11.72 pg/ml反应时间:1-5h所需样本体积:50-100ul检测波长:450 nm 保存条件及有效期:1.试剂盒保存:;2-8。2有效期:6个月4
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