单核细胞增生李斯特氏菌检验原始记录（第二法平板计数法）检验单位检验员检验日期至环境条件温度,相对湿度%检验依据GB4789.30-2016食品安全国家标准食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验样品名称产品批号仪罂设备及耗材：电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、移液器、涂布棒培养基及试剂：缓冲葡萄糖蛋白陈水：m1.配制日期：李氏增菌肉汤1.B：m1.配制日期：李斯特氏菌显色培养基：m1.配制日期：实验过程：1 .样品稀释：根据样品状态，无菌操作，称取25g吸取25m1.样品，加入到装有225m1.缓冲葡萄糖蛋白陈水或无添加剂的1.B肉汤的无菌均质袋中均质，制成1:10样品匀液。用Im1.无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液Im1.,沿管壁缓慢注于盛有9m1.缓冲葡萄糖蛋白陈水或无添加剂的1.B肉汤的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支In1.I无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。按以上操作步骤，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次ImI无菌吸管或吸头。2 .样品的接种根据对样品污染状况的估计，选择2个-3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），每个稀释度的样品匀液分别吸取Im1.以0.3m1.、0.3m1.、0.4m1.的接种量分别加入3块李斯特氏菌显色平板，然后用无菌1.涂布棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如琼脂平板表面有水珠，可放在25C-50的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。3 .培养在通常情况下，涂布后，将平板静置10min,如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36C土IC培养Ih;等样品匀液吸收后翻转平板，倒置后于36IC培养24-48hJ_/_/时_/_/时）典型菌落计数和确认：注：“一”表示在选择性平板中无可疑菌落生长。样品编号菌落特征以产品说明为准第一稀释度：第二稀释S：学三稀释度：0.3m1.0.3m1.0.4m1.0.3m1.0.3m1.0.4m1.0.3m1.0.3m1.0.4m1.样品1样品2样品3样品4样品54.选择有典型单核细胞增生李斯特氏菌菌落的平彳之间的平板，计数典型菌落数。如果：a）只有一个稀释度的平板菌落数在15CFIn5（b）所有稀释度的平板菌落数均小于15CFU且有c）某-稀释度的平板菌落数大于150CFU且有度平板上的典型菌落；d）所有稀释度的平板菌落数大于150CFU且有e）所有稀释度的平板菌落数均不在15CFU150CF时，应计数最接近15CFU或150CFU的稀释度平标收，且同一稀释度3个平板所有菌落数合计在15CFU150CFU）CFU之间且有典型菌落，计数该稀释度平板上的典型菌落；典型菌落，应计数最低稀释度平板上的典型菌落；咫型菌落，但下一稀释度平板上没有典型菌落，应计数该稀释N型菌落，应计数最高稀释度平板上的典型菌落；U之间且有典型菌落,其中一部分小于15CFU或大于150CFUt上的典型菌落。以上按式（1）计算。f）2个连续稀释度的平板菌落数均在15CFU-150CFU之间，按式计算。5.从典型菌落中任选5个菌落（小于5个全选），分别进行鉴定。计算公式式:T二空Cd式中：T一一样品中单核细胞增生李斯特氏菌菌落数；A一一某一稀释度典型菌落的总数；B一一某一稀释度确证为单核细胞增生李斯特氏菌的菌落数：C一一某一稀释度用于单核细胞增生李斯特氏菌确证试验的菌落数；a稀释因子。式（2）：T_ABC+A2B2/C21.1.d式中：样品中单核细胞增生李斯特氏菌菌落数：A1.一一第一稀释度（低稀释倍数）典型菌落的总数；B1.一一第稀释度（低稀释倍数）确证为单核细胞增生李斯特氏菌的菌落数；C1.第稀释度（低稀释倍数）用于单核细胞增生李斯特氏菌确证试验的菌落数；A2一一第二稀释度（高稀释倍数）典型菌落的总数；B2一一第二稀释度（高稀释倍数）确证为单核细胞增生李斯特氏菌的菌落数；C2第二稀释度（高稀释倍数）用于单核细胞增生李斯特氏菌确证试验的菌落数：1.1计算系数；d一稀释因子（第一稀释度）。结果报告（根据公式计算结果,报告每g（m1.）样品中单核细胞增生李斯特氏菌菌数，以CFUg（m1.）表示；如T值为0,则以小于I乘以最低稀释倍数报告。）报告人报告日期复核人复核日期