达诚液基制片操作步骤全自动制片染色机的使用打开染色机电源参数设置保存参数开始一、全自动制片流程1、前期处理1.1标本瓶用旋涡混合器充分振荡 30秒以上，目的是将细胞刷上的细胞震落到保存液中，并且将粘液及血液震散。1.2 给标本编号：准确把离心管、申请单用条码标签对应贴好（或用记号笔注上相应编号）1.3 将过滤器套在12ml离心管里，用3ml软吸管转移样本至离心管中，样本转移量约为8ml（如样本粘液较多，堵塞滤网，可用软吸管轻轻搅动帮助过滤）1.4 样本转移完毕后取出过滤器，离心：1650rpm，5min（注意离心配置平衡）1.5离心完后，倾倒出上清液体，并对细胞量少的离心管做标记（在样本转移时将细胞量少的样本全部倒入染色仓中）。1.6将离心管置于漩涡混合器上，震荡细胞块30秒以上使其打散。2、制片染色2.1将载玻片放置在制片染色室底板上并扣好制片染色舱，按顺序对号放置好样本离心管和吸嘴，在载玻片上注上相应编号（如下图），检查试剂是否足够。2.2开启制片染色机电源，设置参数1.开机后显示画面，按“设置”进行参数设置，按“上”、“下”选择数字，按左右选择参数项目Sample ：样本数（可选择1-12）Settle ：沉降时间选择完后按“设置”进入下一页H2O ：预置缓冲液（1000ml）Shift ：样本转移量（200ml-400ml）选择完后按“设置”进入下一页H2O ：预置缓冲液（1000ml）Shift ：样本转移量（200ml-400ml）选择完后按“设置”进入下一页Drain ：离心功能，选择“ON”表示只执行离心功能，可用于手工制片染色，选择“OFF”表示执行制片和染色功能选择完后按“设置”进入下一页Dye liquor：染液报警功能，当染液量不足时机器报警，选择“ON”选择完后按“设置”进入下一页页面回到参数设置的第一页，表示所有参数设置完毕，按“退出”退出后页面如图显示，按“运行”开始实验，“R_time”显示实验所用时间3、湿式封片3.1 制片结束后，依次拆除制片仓，将完成制片染色的样片插入酒精缸（无水乙醇）中的玻片架上进行脱水，约30秒钟；（注意必须在玻片上液体未干前放入酒精缸）3.2 放入二甲苯内透明约5分钟以上3.3 中性树胶湿式封片。1.放入酒精缸中脱水，再放入二甲苯缸透明2.中性树胶湿式封片 3.样片二、手工制片染色步骤1、前期处理同全自动制片流程的前处理2、制片染色2.1将载玻片放置在染色架上并扣好制片染色舱，放置样本和吸嘴，在载玻片上注上相应编号2.2 打开机器电源设置参数开机后显示画面，按“设置”进行参数设置按“设置”直至跳到此页面将Drain项设置为“ON”，然后按“设置”，再按“退出”参数设置完毕，此时按“运行”机器只执行离心功能，不制片染色置参数电源处理 2.2用软吸管加入次缓冲液1000ml至离心管，抽吸8次（混匀）后转移200ml400ml至制片舱（视细胞量多少确定转移量，细胞量少的全部转移至制片舱），注意转移时要垂直居中转移，使样品均匀分布在玻片上。2.3 静置沉降10分钟，按“运行”将制片舱内液体甩出。2.4 染色（500l /次）无水乙醇1次（起固定作用）缓冲液2次（调节PH值）苏木素1次停留(60-80)秒缓冲液2次无水乙醇2次EA/OG 1次停留(120-180)秒无水乙醇2次 备注：每次加完液后均需要按“运行”将液体排出再进行下一次加液。注意染色过程在注入液体时要沿制片舱壁注入以避免把细胞冲到一起或边缘- 7 -