流式细胞仪分析DNA （细胞周期）通过核酸染料标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期 的分布状态，计算出G0/G1%, S%及G2/M/%，借此可以了解细胞的增殖能力， 在肿瘤病理学研究中，通常以S期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。正常细胞具有较恒定的DNA含量，而细胞癌变过程中结构和/或染色体的异 常是很常见的。这种变化在流式分析中以DNA倍体指数的形式表现出来，这一 指数对于肿瘤的早期诊断，交界瘤、间叶组织肿瘤的良恶性判断提供了重要的辅 助指标。细胞周期操作步骤：1收获细胞于流式管中，加入3-4ml的PBS清洗细胞。2. lOOOrpm离心10分钟，弃上清。3. 逐滴加入5ml或更多预冷的70-80%的乙醇，涡旋混匀细胞,4C避光过夜（18小时）。4. 1000-1500rpm离心细胞10分钟，弃上清。之后清洗细胞2次以去除所有的乙醇。 注：第一次用1x PBS，第二次用染色液（货号：554656）。5. 细胞染色：每管样本需10A6细胞。具体操作如下：1）对于PI/RNase染色，将细胞重悬于0.5 mL PI/RNase染色液（货号：550825）。2）对于7-AAD染色,将细胞重悬于0.1 mL染色液（货号：554656），同时加入20 “LAAD染色液（货号：559925）6. 室温避光孵育15分钟。7.分析前4C避光保存样本。1小时之内上流式细胞仪检测。生正常细胞周期分析DebrisAggregate Apoptosis ip GlDip G2 DipsDiploid: 100.00 %DipG1: 54一38 % at 46.90DipG2: 15 91 % at 91 61DipS: 29.71 % G2/G1: 1.95%CV: 5.2311 IT | 11 ji fp 1111 p h iyfi il 1110204060 SO 100 120Channels (FL2-A-FL2-Area)细胞周期检测所需产品:全称简称货号BD Pharmingen PI/RNase staining buffer (forPl/Rnase staining)PI/RNase染色液550825使用说明：DNA染料，尤其是PI,具有较强的粘性。样本上机检测之后，应遵照仪器说明书仔细清 洗流式细胞仪，以免对下一位操作者结果造成影响。固定好的细胞可保存长达12个月（储 存于70-80%的乙醇，置于-20C保存）.