产妇安软胶囊中阿魏酸的定性定量研究 作者：吴春蕾，张志锋*，吴莉莉，朱刚 【摘要】 目的建立产妇安软胶囊定性定量分析方法。方法采用薄层色谱法(TLC)对当归、川芎中的阿魏酸进行定性鉴别;采用HPLC法测定制剂中阿魏酸的含量，选用Shim-pack VP-ODS( mm150 mm，5 m)C18色谱柱，流动相为甲醇-乙腈-%冰醋酸溶液(24472);流速 ml/min;检测波长为321 nm。结果薄层色谱鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰;阿魏酸在进样量为 g范围内线性关系良好(r= 9);平均回收率为%，RSD为%。结论所建立的分析方法简便可行，专属性强，可用于产妇安软胶囊的质量控制。 【关键词】 产妇安软胶囊; 薄层色谱; 高效液相色谱; 阿魏酸 产妇安软胶囊为中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂产妇安颗粒(标准编号：WS3-B-2693-97)经改变剂型研制而成。主要由当归、川芎、红花、益母草等7味中药材提取制成，具有祛瘀生新、活血化瘀、引血归经、促进子宫恢复之功效，临床上用于治疗产后血瘀腹痛，恶露不尽等症1，2。当归、川芎为本方中的君药，其主要有效成分为阿魏酸。产妇安颗粒原标准中未收载鉴别及含量测定项，药品质量难以得到有效控制。为此本实验对方中当归、川芎中的阿魏酸进行了薄层色谱鉴别研究，采用HPLC法对阿魏酸的含量进行测定，为建立产妇安软胶囊的质量标准，保证其在临床上安全使用提供基础研究。 1 仪器与试药 仪器ZF-90型电暗箱式紫外线灯投射仪; BP211D电子天平;Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪，Shim-pack VP-ODS( mm150 mm，5 m)C18色谱柱，SPD-10Avp检测器，N2017工作站。 试药甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯;产妇安软胶囊(四川禾邦制药有限责任公司);阿魏酸对照品(批号110773-9910)购自北京中国药品生物制品检定所。 2 方法与结果 当归、川芎的定性鉴别3取本品内容物3 g，加硅藻土3 g，拌匀，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流至提取液近无色，回收甲醇，残渣加水30 ml，加热使溶解，放冷，转移至分液漏斗中，用乙醚提取3次，20 ml/次，合并醚液，用2%碳酸钠溶液提取3次，20 ml/次，合并碱液，用醋酸乙酯洗涤3次，15 ml/次，弃去醋酸乙酯液，碱液加稀盐酸调节pH为23，用苯洗涤3次，15 ml/次，弃去苯液，水液再用乙醚提取3次，20 ml/次，合并醚液，挥干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。再根据处方组成，按产妇安软胶囊的处方比例制备不含当归、川芎的软胶囊，按供试品溶液的制备方法，制备成阴性对照溶液。吸取上述对照品溶液5 l，供试品及阴性对照溶液各20 l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-二氯甲烷-醋酸(90254)为展开剂展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。结果3批样品(071101，071102，071103)的供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的深蓝色荧光斑点，缺当归、川芎的双阴性样品无干扰。见图1。 1.缺当归、川芎阴性样品 2.样品(071101) 3.样品(071102) 4.样品(071103) 5.阿魏酸对照品 图1 产妇安软胶囊中阿魏酸的TLC图谱 阿魏酸的含量测定 色谱条件采用Shim-pack VP-ODS( mm150 mm，5 m)C18色谱柱;以甲醇-乙腈-%冰醋酸溶液(24472)为流动相;检测波长为321 nm;柱温30;流速 ml/min。 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品适量，置棕色量瓶中，精密加入含%冰醋酸的90%甲醇溶液制成每毫升含30 g的溶液，即得。 供试品溶液的制备取本品10粒的内容物，混匀，取约 g，精密称定，加硅藻土3 g，拌匀，精密加入含%冰醋酸的90%甲醇溶液25 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)20 min，放冷，再称定重量，用含%冰醋酸的90%甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，即得。 阴性对照溶液的制备按缺当归、川芎的处方进行配制，然后同“”项下的供试品溶液的制备方法进行制备，即得。 系统适应性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 l注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行试验，阿魏酸与其它组分均能达到完全分离，缺当归、川芎的双阴性对照无干扰，理论塔板数按阿魏酸峰计算大于2 000。见图2。 图2 a-阿魏酸对照品 b-产妇安软胶囊 c-阴性样品的HPLC图谱 线性关系的考察精密称取阿魏酸对照品适量，置棕色量瓶中，精密加入含%冰醋酸的90%甲醇溶液分别配制成 3， 6， 2，与 mg/ml的对照品溶液，分别精密取10 l注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标,进行线性回归，其回归方程为：Y = 1106X +103 ，r= 9(n=6)。结果表明阿魏酸进样量在 g 范围内与峰面积线性关系良好。 精密度实验精密吸取对照品溶液，重复进样5次，按上述色谱条件测定，记录阿魏酸的峰面积，RSD=%，结果表明精密度良好。 稳定性实验精密吸取上述同一批号供试品溶液10 l，避光放置，分别于0，2，6，8，12 h后进样，按上述色谱条件测定，记录阿魏酸的峰面积， RSD= %(n=5)，结果表明样品溶液避光放置，供试品溶液在12 h内稳定性良好。 重复性实验取同一批的产妇安软胶囊样品(批号071101)，按“”项下方法制备供试品溶液及上述色谱条件重复测定6次，测得阿魏酸的平均含量为%，RSD=%(n=6)，结果表明方法的重复性好。 加样回收实验取同一批供试品(批号071101)约 g，各6份，精密称定，分别加入阿魏酸对照品溶液( 2 mg/ml)10 ml，按上述含量测定方法制备供试品溶液，依法测定，结果阿魏酸平均回收率为%，RSD为%，结果表明方法的回收率良好。结果见表1。表1 阿魏酸加样回收实验结果 样品的测定取10批样品，按上述方法制备供试品溶液，依法测定阿魏酸的含量。结果见表2。表2 10 批产妇安软胶囊中阿魏酸含量测定结果 3 讨论 当归、川芎是产妇安软胶囊处方中君药，均含有相同成分阿魏酸。故选用阿魏酸为对照品，对当归、川芎进行薄层鉴别研究，先后以苯-醋酸乙酯-甲酸(61)和苯-二氯甲烷-醋酸(90254)作为展开剂，结果后者的展开效果更好，斑点清晰。 阿魏酸对光和热不稳定，参考文献4最终确定提取方法采用%冰醋酸的90%甲醇超声提取。采用超声处理，对提取时间进行了考察，提取时间分别设计为10，20 min 和 30，结果20 min 和 30 min测定变化不大，故提取时间选为20 min。 检测波长的选择 取阿魏酸对照品溶液，于200400 nm进行紫外光谱扫描，在 nm， nm， nm有最大吸收波长，其中以 nm吸收系数最大，峰形较宽，对称性好，与文献57报道一致，故选择测定波长为 nm。 【参考文献】 1 中华人民共和国卫生部药品标准.中药成方制剂第14册S.1994：48. 2 唐移忠，莫可良.产妇安胶囊治疗人工流产后阴道流血临床观察J. 右江民族医学院学报，2017，3：434. 3 国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2017：131. 4 孙 忠，彭 康.HPLC法测定补阳还五汤中阿魏酸的含量研究J.中医药学刊，2017，22(5)：833. 5 杨秀丽，赵 慧，陈 涛.HPLC法测定产妇安颗粒中阿魏酸的含量J.天津药学，2017，18(4)：16. 6 阮 群，冯 绮，甘业梅.草香胃康胶囊质量标准研究J. 中成药，2017，29(9)：1328. 7 希尔艾力吐尔逊，斯拉甫艾白，凯撒苏来曼.阿魏质量标准的研究J.中成药，2017，29(9)：1388. 1 / 1