课时作业18生物技术实践(二)81回答下列关于生物技术实践的问题。(1)果酒制作离不开酵母菌，从野生酵母菌群中分离纯化酵母菌，常用的方法是_和_。(2)在腌制泡菜过程中，需要注意控制腌制的时间、温度和_，还需要测定亚硝酸盐的含量。测定亚硝酸盐含量的原理是在_条件下，亚硝酸盐与_反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成_色物质。(3)固定化酵母多采用_固定化，而固定化酶不宜采用此种方法，原因是_。解析：(1)分离纯化微生物常用的方法是平板划线法和稀释涂布平板法。(2)在泡菜的腌制过程中，需要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量，还需要测定亚硝酸盐的含量。测定亚硝酸盐含量的原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色物质。(3)固定化技术包括包埋法、化学结合法和物理吸附法，细胞多采用包埋法固定化，而酶更适合采用化学结合法和物理吸附法固定化，这是因为细胞体积大，而酶分子较小，体积小的酶容易从包埋材料中漏出。答案：(1)平板划线法稀释涂布平板法(2)食盐的用量盐酸酸化对氨基苯磺酸玫瑰红(3)包埋法酶分子较小，容易从包埋材料中漏出2请回答下列问题。(1)为了从土壤中筛选能有效降解有害有机化合物A的细菌，研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌(目的菌)，从功能看该培养基为_培养基，在对该菌进行分离、纯化、计数过程中，常采用_法接种。实验过程中还需配制空白培养基作为对照，如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如图所示，造成这种结果的原因可能是_。(2)某植物富含果胶、淀粉、蛋白质和纤维素成分。在用该材料提取过果胶和淀粉后的剩渣加工饮料工艺研究中，将剩渣制成的汁液经蛋白酶和纤维素酶彻底酶解处理后，发现仍存在浑浊和沉淀问题，解决这一问题的措施是_。在果汁生产中，为了提高果胶酶的使用效率和产品纯度，一般需要将酶用_法进行固定化处理。(3)用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，用_洗涤红细胞，用_破裂红细胞使血红蛋白得以释放，如果装填的凝胶色谱柱中出现气泡，气泡会_，降低分离效果。解析：(1)由题意“成功地筛选出能高效降解化合物A的细菌(目的菌)”可知：从功能上看，用于筛选该“目的菌”的培养基为选择培养基。纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法常用于对目的菌进行分离、纯化、计数。实验过程中配制空白培养基作为对照的目的是验证培养基灭菌是否彻底或检测培养基平板灭菌是否合格。如果空白培养基中无菌落形成而实验组培养基中形成的菌落如题图所示，则造成这种结果的原因可能是土壤中含有4种能降解有机化合物A的细菌；或者是培养基不纯，含有其他碳源和氮源；或接种过程中被杂菌污染。(2)依题意可知：导致浑浊和沉淀问题出现的原因是其汁液中仍存在少量果胶和淀粉，可见，为了解决这一问题，可在浑浊和有沉淀的汁液中加入果胶酶和淀粉酶。固定化酶是指用物理学或化学的方法将酶与固相载体结合在一起形成的仍具有酶活性的酶复合物。对于溶于水的果胶酶，一般采用化学结合法或物理吸附法将其固定在某种介质上，使之成为不溶于水而又有酶活性的制剂，进而提高果胶酶的使用效率和产品纯度。(3)用凝胶色谱法提取分离血红蛋白时，从采集的血样中分离得到红细胞液体后，再向其中加入五倍体积的生理盐水对红细胞进行洗涤。红细胞释放血红蛋白，需加入蒸馏水和40%的甲苯，再在磁力搅拌器上充分搅拌10 min。装填凝胶色谱柱时，若产生气泡，则气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，从而影响分离效果。答案：(1)选择稀释涂布平板土壤中含有4种能降解有机物A的细菌或培养基不纯含有其他碳源和氮源或接种过程被杂菌感染(2)在浑浊和有沉淀的汁液中加入果胶酶和淀粉酶化学结合法或物理吸附(3)生理盐水蒸馏水和甲苯搅乱蛋白质的洗脱次序3近些年，全国柑橘销售市场陷入低迷，为改变这种状况，并满足不同人的需求，可以将其加工制成果汁、果酒、果醋等。结合下图回答相关问题：(1)过程果酒制作是否成功，可在酸性条件下用_溶液来鉴定。过程制作果醋时需要接种的菌种是_，最适合其生长的温度为_。过程和过程所用微生物在代谢方式上的主要区别是_。(2)橘皮精油的提取之所以不采用水蒸气蒸馏，是因为水中蒸馏会导致原料_和_有效成分等问题，过程最好采用的方法是_法。新鲜的柑橘皮直接压榨，出油率较低，所以应将其干燥去水并用_浸泡。解析：(1)鉴定果酒制作过程中是否产生酒精，可在酸性条件下用重铬酸钾溶液来鉴定。过程制作果醋时需要接种的菌种是醋酸菌，最适合其生长的温度为3035。是酒精发酵，是醋酸发酵，酒精发酵的酵母菌是兼性厌氧微生物，醋酸发酵过程中的菌种醋酸菌是好氧菌。(2)新鲜柑橘果皮芳香油含量较高，因此提取芳香油要使用新鲜柑橘果皮；用柑橘果皮提取芳香油一般用压榨法，实验流程是：石灰水浸泡漂洗压榨过滤静置再次过滤芳香油。橘皮精油的提取之所以不采用水蒸气蒸馏，是因为水中蒸馏会导致原料焦糊和水解有效成分等问题。答案：(1)重铬酸钾醋酸菌3035酵母菌是兼性厌氧型，醋酸菌是好氧型(2)焦糊水解压榨石灰水4某研究性学习小组了解到泡菜中的乳酸菌除了在发酵中产生乳酸，还可以降解亚硝酸盐，该小组利用泡菜液进行了相关的研究。请回答下列问题：(1)乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌_。(2)测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用_法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物_。(3)小组成员用改良的MRS固体培养基分离乳酸菌，该培养基成分如下：蛋白胨牛肉膏酵母膏葡萄糖CaCO3琼脂蒸馏水其他成分10 g10 g10 g20 g20 g20 g1 000 mL略该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于_(填“选择”或“鉴别”)培养基。小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0.1 mL加入到50左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基。在50左右操作的原因是_，加盖一层固体培养基的目的是_。在恒温培养箱中培养72 h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若下图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为_。乳酸菌在20的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的_。解析：(1)乳酸菌属于原核生物，乳酸菌和酵母菌在结构上的主要区别是乳酸菌无以核膜为界限的细胞核。(2)测定泡菜中亚硝酸盐的含量可以用比色法。食物中的亚硝酸盐绝大部分随人体尿液排出，其余的在特定条件下可以转变为致癌物亚硝胺。(3)该培养基因含碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈，该培养基属于鉴别培养基。小组成员将泡菜液进行梯度稀释后，取0.1 mL加入到50C左右的培养基中摇匀，待凝固后，再在其上加盖一层固体培养基。在50C左右操作的原因是此时培养基为液态且不烫手，加盖一层固体培养基的目的是隔绝空气(氧气)，确保无氧环境。在恒温培养箱中培养72 h后，挑取溶钙圈较大的菌落，用平板划线法进行进一步纯化。若题图甲是接种培养后的菌落分布图，对应的平板划线操作示意图为丙。乳酸菌在20C的冷冻箱中长期保存时，需要加入一定量的甘油。答案：(1)无以核膜为界限的细胞核(2)比色亚硝胺(3)鉴别此时培养基为液态且不烫手隔绝空气(氧气)，确保无氧环境丙甘油5如图是从土壤中筛选细菌的过程。请回答下列问题：(1)土壤中存在能分解尿素的细菌，这些细菌之所以能将尿素分解，是因为能合成_。因此，图中选择培养基应以_为唯一氮源。鉴别培养基还需添加_作指示剂。(2)若要从土壤中分离大肠杆菌，培养基中应加入牛肉膏、蛋白胨、NaCl、水和琼脂，其中作为碳源的是_；鉴别培养基中也需添加某些特定物质，根据培养基菌落的颜色变化来判断是否分离得到大肠杆菌，请简述鉴别大肠杆菌的方法：_。(3)土霉素是一种可以治疗人类感染性疾病的抗生素类药物，可从土壤中放线菌的发酵产物中提取，但土壤中放线菌数目较少，可在逐级稀释前使用_(从培养基的物理状态和功能分析)培养基进行选择培养，以增加目的菌的数目。分析可知，土霉素易溶于有机溶剂，且是_(填“挥发性”或“非挥发性”)物质，故可使用萃取法从放线菌中提取。萃取得到的样品可用纸层析法进行鉴定，用显色剂显色后结果如图所示，点样时，A、D点是_。解析：(1)土壤中存在能分解尿素的细菌，这些细菌之所以能将尿素分解，是因为能合成脲酶。要从土壤中筛选能分解尿素的细菌，应该用以尿素为唯一氮源的选择培养基。细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，因此鉴别培养基还需添加酚红作指示剂，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够产生脲酶，并分解尿素。(2)若要从土壤中分离大肠杆菌，培养基中应加入牛肉膏、蛋白胨、NaCl、水和琼脂，其中作为碳源的是牛肉膏、蛋白胨；鉴别大肠杆菌的方法：在培养基中添加伊红美蓝，若再培养基上出现黑色菌落，则说明有大肠杆菌，反之，则没有。(3)土霉素可从土壤中放线菌的发酵产物中提取，但土壤中放线菌数目较少，可在逐级稀释前使用液体培养基和选择培养基进行选择培养，以增加目的菌的数目。分析可知，土霉素易溶于有机溶剂，且是非挥发性物质，故可使用萃取法从放线菌中提取。萃取得到的样品可用纸层析法进行鉴定，用显色剂显色后结果如题图所示，A、B、C、D四点中，A点和D点通过纸层析的结果均只有一个点，属于标准样品的样点，即土霉素标准样品点；B点和C点的结果都有两个点、属于提取样品的点。答案：(1)脲酶尿素酚红(2)牛肉膏、蛋白胨在培养基中添加伊红美蓝，若在培养基上出现黑色菌落，则说明有大肠杆菌，反之，则没有(3)液体、选择非挥发性土霉素标准样品点6科研人员开展海藻酸钠固定化乳酸菌的相关研究，得到如下实验结果。请回答下列问题：表：海藻酸钠浓度对乳酸发酵的影响海藻酸钠浓度/%成珠状况01.0成珠较易，但强度较低1.5成珠容易，强度适中2.0成珠较难，强度较高2.5成珠困难，强度高(1)本研究中固定化细胞的技术属于_法，其优点是_。(2)实验中需要先将溶化的海藻酸钠溶液冷却至_