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银杏叶提取物对大鼠高脂性脂肪肝的实验观察 作者:刘文珍,王永奇,段斐,寇素茹,孙晓芳,马幼敏 【摘要】 目的通过对大鼠高脂酒精脂肪肝的肝组织学观察及血清学检测,为银杏叶提取物防治脂肪肝提供科学的理论依据。 方法用高脂饲料加低浓度酒精喂食SD雄性大鼠复制成脂肪肝模型。分为6组:正常组:普通饲料+生理盐水;模型组:高脂饲料+38%酒精;阳性药物对照组:高脂饲料+38%酒精+绞股蓝总苷胶囊;治疗组:高脂饲料+38%酒精+银杏叶片(高,中,低剂量)。结果6周后观察肝组织病理切片及血清学指标,可见肝组织及胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶等各组治疗后均与模型组有差别(P);银杏叶高、中、低剂量组间比较无差别(P)。结论 通过建立符合人们饮食习惯的脂肪肝模型,说明银杏叶提取物治疗脂肪肝效果好。 【关键词】 高脂血症 脂肪肝 肝组织切片 大鼠模型 银杏叶片 Abstract:ObjectiveTo study the effect of Ginkgo leaf extract on the rats with hyperlipidemia fat liver model was established by feeding SD male rats with hyperlipidemia feed plus low concentration of alcohol. The rats were divided into six groups: normal group, fed with usual feed plus physiological saline, Model group, fed with hyperlipidemia feed plus 38 percent of alcohol. Control group with positive medicine, fed with hyperlipidemia feed plus 38 percent of alcohol and capsule of Jiaogulanzongdai. Treatment groups, fed hyperlipidemia feed plus 38 percent of alcohol and Ginkgo Leaf Tablets (with high, medium and low dosages).ResultsSix weeks after treatment, pathological section of liver tissue and serum indexes were observed in each group. As a result, it was found that there was obvious difference between model group and the other groups in liver tissue, cholesterol, CHO, TG, HDL, ALT, AST, and so on. (p). There was also no difference in the groups with different dosages of Ginkgo Leaf Tablets (p).Conclusion:Ginkgo leaf extract has a protective effect on hyperlipidemia fat liver. Key words:Hyperlipidemia diseases; Fatty liver; Section of liver tissue; Rat modals; Ginkgo Leaf Tablets 脂肪肝是一种常见病,随着人们生活水平的提高,高脂饮食是司空见惯的,并且日常生活中常常饮酒,所以脂肪肝的发病率越来越高。针对这一现象,笔者建立了有效的大鼠脂肪肝模型,研究用银杏叶片防治脂肪肝的效果。 1 器材与方法 材料 动物 60只SD雄性大鼠,体重280 300 g(河北医科大学实验动物中心提供,动物和格证号609068)。 试剂 银杏叶片, 国药准字Z20027949,24片/盒,扬子江药业集团生产,批号05032901。绞股蓝总苷胶囊,国药准字Z10900032, 100/盒,20MG/片,安康正大制药有限公司生产,批号:20170103。丙硫氧嘧啶片,国药准字H31021082,100/盒,50/片,上海复星朝晖药业有限公司生产,批号060806。胆固醇,由北京市庆盛达化工技术有限公司提供,批号20170906。胆酸钠,由北京双旋微生物培养基制品厂提供,批号20170311,企标号02-18。保定王酒由保定酿酒厂生产,38%。 仪器 日本生产OLYMPUS-AU400 全自动生化分析仪。 方法 大鼠分组 将SD雄性大鼠60只随机分为6组,即正常组、模型组、阳性药物对照组(绞股蓝总苷胶囊组);高、中、低剂量治疗组(银杏叶片组)。每组10只,饲养于二级动物房,自由饮水。 模型复制 正常组喂食河北医科大学动物实验中心提供的普通饲料,其余(模型组,阳性对照组,治疗组)均喂食自制高脂饲料(%普通饲料,2%胆固醇,%胆酸钠,%丙硫氧嘧啶片,5%蔗糖,10%猪油)。正常组每天灌服2 ml生理盐水,其余5组每天按 ml/100 g予以38%乙醇2ml灌胃; 2 h后阳性药物组给绞股蓝总苷21 mgkg-1d-1,药物治疗组给银杏叶片20,15,10 mgkg-1d-1等量灌胃,共6周。正常组及模型组每天灌服等量生理盐水。 血脂测定及标本采集于给药或生理盐水第6周最后一天晚上禁食、禁酒(不禁水),次日上午将动物用4%乌拉坦麻醉,自腹主动脉取血2 ml分离血清,测定血脂。断头处死大鼠,取肝脏称重,取同一部位肝组织固定于福尔马林液中,制作石蜡切片,HE染色,光镜下观察。 统计学方法采用SPSS统计软件包进行统计学处理,多组比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 2 结果 病理结果 大体结构正常组为正常肝脏无异常变化,模型组肝脏体积明显增大,重量增加,切面略淡黄色。阳性对照组、治疗组介于正常组、模型组之间。 肝组织病理学变化如图16所示。 正常组(图1):肝组织结构完整,肝细胞呈多边形,排列整齐,以中央静脉为中心呈放射状排列,肝细胞核圆,位居中央;细胞质丰富,核膜清楚。 模型组(图2):肝细胞内出现大小不等的脂滴,大脂滴和中等大小脂滴较多,细胞胞质呈现空泡状。 阳性药物组(图3):肝细胞内出现大小不等的脂滴,可见一些较大的脂滴散在分布,数量较少,较小的脂滴数量较多。 银杏叶片高剂量组(图4):肝细胞内偶见中等大小脂滴和散在的小脂滴,脂滴散在分布于细胞内,数量较少。 银杏叶片中剂量组(图5):肝细胞内偶见中等大小脂滴和散在的小脂滴,小脂滴非常细小。几乎接近于正常组织。 银杏叶片低剂量组(图6):肝细胞内有极细小脂滴散在分布,肝细胞结构几乎接近于正常组织。 从病理结构看,中、低剂量组的银杏叶片剂效果最好。 血清学检测模型组血清胆固醇、甘油三酯均高于正常组,两组间比较差异显著(P)。结果见表1。表1 各项血清学检测指标结果 (略) 3 讨论 与以往冯志强1的大鼠脂肪肝模型比较,本实验采用混合方式复制模型,即高脂饲料加酒精饮用,费用低,时间短,从病理学检查看造模复制较成功,且与人类饮食习惯相适应,为人类防治脂肪肝提供了科学的理论依据。 银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶,性甘、味苦、涩、平,归心、肺经。有敛肺、平喘、活血化淤、止痛之功。中医可用于治疗高脂血症2。银杏叶提取物具有强烈的抗氧自由基,保护肝窦内皮细胞,改善肝脏微循环紊乱3。通过减少酒精所致谷胱甘肽的耗竭,增加抗氧化物质活性或含量抑制脂质过氧化反应,从而预防酒精性肝损伤,其机制可能与诱导血红素氧化酶-1(HO-1)表达有关4。通过本实验证实银杏叶明显降低血清胆固醇、甘油三酯、谷丙转氨酶、谷草转氨酶,表明其具有保护肝细胞功能,促进肝细胞功能的恢复。总之,银杏叶提取物对高脂酒精性脂肪肝具有明显的治疗作用。并且以中、低剂量组的银杏叶片效果最好,临床值得推广。 【参考文献】 1冯志强,沈志祥,谭诗云,等.大鼠急性酒精性脂肪肝造模方法的改进J.世界华人消化杂志,2017,11(8):1189. 2国家药典委员会.中国药典,部S.北京:化学工业出版社,2000:257. 3Zhang C, Zu J, Shi H, et al. The effect of Ginkgo biloba extract(EGB 761)on hepatic sinusoidal endothelial eclls and hepatic microcir culation in CCL4 ratsJ. Am J Chin Med, 2017, 32(1):21. 4宋方方,姚 平,周绍良.银杏叶提取物预防大鼠酒精性肝损伤机制研究J.西南军医,2017,7:1 1 / 1
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