ABTS测抗氧化性原理及其具体操作（以椴树昔为例）李熙灿 曾婧媛【原理】A盯S法是一种被广泛用于检测物质体外抗氧化能力的方法。ABTS与匕08反2 2 8应可以生成稳定的自由基A盯S+，此自由基在734nm下有最大吸收且会显蓝绿色，当自 由基被清除，数量减少其溶液颜色会变浅，从而导致734nm下吸光度降低。由此可以来判 断样品清除ABTS+的能力。【仪器与试剂】1.仪器可见分光光度计；SB3200D超声波清洗机；电子天平（BS110S） ； BIOHIT单道手动可 调移液器（10-100山、100-1000山、1000-5000）；微量比色皿；pH计。2.试剂椴树苷（AR）、BHA 和 Trolox （AR）；甲醇（AR）；无水乙醇（AR） ； ABTS （AR）；K2S2O8（AR）试验操作】清除ABTS+自由基检测实验采用文献i啲方法，并根据实际情况改动。操作如下：1 配制溶液1取7.4mmol/L ABTS储备液和2.6mmol/L K2S2O8储备液各1mL等体积混合，于室温、避光2 2 8条件下放置12小时，即得A盯S+自由基储备液。先用无水乙醇稀释A盯S+工作液，使其在734nm波长下的A （吸光度）至0.701 （A=0.70.02,温度30C。）。2 实验操作及测定1用移液器精确移取A盯S+工作液800山、加椴树苷（1mg/mL,无水乙醇溶解）x|jL（x=40、70、100、130、160）、无水乙醇（200-x）|J_于洁净的试管中，反应体系总体积1000山，振摇10s、充分混合，静置6min,测定A734值。实验平行检测三次。加样情 734nm况如表1所示。实验设试剂空白组和样品实验组,平行测定3次取平均值。3 数据处理计算清除率公式：清除率二（A-A）/A*100% （其中A。为样品加样量为0山时体系的A734nm值；A为加样量为xU时体系的A734nm值）以清除率鮒为纵坐标，浓度（|jg/mL）为横坐标，绘制量效曲线，计算各样品IC50值表1清除ABTS+自由基加样表Tili roside/L无水乙醇/LABTS+工作液/L总体积/U02008001000401608001000701308001000100100800100013017080010001601408001000表2椴树苷样品浓度：1.0mg/mL反应液总体积：l.OmL体积/yL最终浓度yg/mLA0 平均值A值清除率123123MeanSD40400.5180.3470.3360.34232.8835.0133.8533.911.0770700.5180.3050.3180.30241.0138.4941.5940.361.651001000.5180.3000.2970.29341.9742.5543.3342.620.681301300.5180.2100.2210.20859.3857.2559.7758.801.351601600.5180.1560.1470.16269.8371.5768.6770.021.46IC50 （卩g/mL）103.22103.33101.92102.830.790 -r1I1I1I -0 50 100 150 椴树苷浓度Mg/mL00000007654321 ）%（率除清均平对相图 5.量效曲线参考文献】1 Xican Li, Tingting Wang, Jingjing Liu, Yulong Liu, Jun Zhang, Jian Lin, Zhongxiang Zhao,Dongfeng Chen. Effect and mechanism of wedelolactone as antioxidant-coumestan on OH- treated mesenchymal stem cells. Arabian Journal of Chemistry, 2020,13: 184-192.