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药物分析设计性实验维生素C及其制剂的分析药学(临床药学方向)2005级(1)班第一组:黄鹏浩(0703503151) 陈燕泓(0703503152)指导教师: 李康 高晓霞 2010 年 4 月摘要:维生素C,在化学结构上和糖类十分相似,在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起到重要的作用。但过量摄取会产生多尿、下痢、皮肤发疹等副作用;滥用维生素C会削弱人体免疫力。因此,在生产维生素C药物过程中要做好其质量控制研究和生产后的含量测定。中国药典收载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂。维生素C的含量测定方法有碘量法,2,6二氯靛酚滴定法,高效液相色谱法,紫外分光光度法,2,4-二硝基苯肼法,原子吸收法等。关键词:维生素C;制剂;质量控制;含量测定维生素C又叫L-抗坏血酸,是一种水溶性维生素,无色晶体。在化学结构上和糖类十分相似,酸性,具有较强的还原性,加热或在溶液中易氧化分解,在碱性条件下更易被氧化。本品在水中极易溶,在乙醇中略溶,在三氯甲烷或乙醚中不溶。熔点为9192。C,熔融时同分解。比旋度为+20.5。至+21.5。一个维生素分子由六个碳原子、八个氢原子和六个氧原子构成。维生素C在体内参与多种反应,如参与氧化还原过程,在生物氧化和还原作用以及细胞呼吸中起重要作用。从组织水平看,维生素C的主要作用是与细胞间质的合成有关。包括胶原,牙和骨的基质,以及毛细血管内皮细胞间的接合物。用于增强机体抵抗力,预防和治疗各种急、慢性疾病、坏血病或其他疾病,用于病后恢复期创伤愈合期及过敏性疾病的辅助治疗。因此,当维生素C缺乏所引起的坏血病时,伴有胶原合成缺陷,表现为创伤难以愈合,牙齿形成障碍和毛细血管破损引起大量瘀血点,瘀血点融合形成瘀斑。按中国药典记载有维生素C原料及其片剂、泡腾片、颗粒剂和注射剂1。维生素C的含量测定大多是基于其具有强的还原性,可被不同氧化剂定量氧化。因容量分析法简便快速、结果准确,被各国药典所采用,如碘量法,2,6-二氯靛酚法等。又相继发展了紫外分光光度法和高效液相色谱法等。1维生素C原料1.1据中国药典2005版记载1.1.1维生素C性状、熔点及比旋度维生素C原料为白色晶体或结晶性粉末;无臭,味酸;久置色渐变黄;水溶液显酸性反应。本品在水中极易溶,在乙醇中略溶,在三氯甲烷或乙醚中不溶。熔点为190192。C,熔融时同分解。比旋度为+20.5。至+21.5。1.1.2维生素C鉴别方法一:去本品0.2g,加水10ml溶解后,分成二等份,在一份加硝酸银试液0.5ml即生成银的黑色沉淀。在另一份中,加二氯靛酚钠12滴,试液的颜色即消失。方法二:本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱(光谱集450图一致)。1.1.3检查 溶液的澄清度与颜色 取本品3.0g,加水15ml,振摇使溶解,溶液应澄清无色;如显色,将溶液经4号垂熔玻璃漏斗滤过,取滤液,照紫外-可见分光光度法(附录IVA),在420nm的波长处测定吸光度,不得过0.03。1.1.4含量测定取本品约0.02g,精密称定,加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解,加淀粉指示液1ml,立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显示蓝色并在30秒中内不褪。没1ml碘滴定,至溶液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。1.1.4制剂 维生素C制剂包括:维生素C片,维生素C泡腾片,维生素C泡腾颗粒,维生素C注射液和维生素C颗粒2。2维生素C的含量测定方法2.1碘量法2.1.1原理 维生素C在醋酸酸性条件下,可被碘定量氧化。根据消耗碘滴定液的体积,即可计算维生素C的含量。2.1.2方法取本品20片(具体制剂具体分析),精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素C0.2g),置100ml量瓶中,加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml的混合液适量,振摇使维生素C溶解并稀释至刻度,摇匀,经干燥滤纸迅速过滤,精密量取续滤液50ml,加淀粉指示液1ml,用碘滴定液(0.05mol/L)滴定,至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。该方法适用于维生素C原料,片剂,泡腾片,颗粒剂和注射液的含量测定。中国药典2005版对维生素C的含量测定,采取该法。2.22,6二氯靛酚滴定法2,6二氯靛酚为一染料,其氧化型在酸性溶液中显红色,碱性溶液中为蓝色。当与维生素C反应后,即转变为无色的酚亚胺(还原型)。因此,维生素C在酸性溶液中,可用2,6二氯靛酚标准滴定至溶液显玫瑰红色为终点,无需另加指示剂。维生素C具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型,根据它具有还原性测定其含量。还原型抗坏血酸能还原料26二氯酚靛酚,本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中26二氯酚靛酚呈红色,还原后变为无色。因此,当此染料滴定含有VC的酸性溶液时,VC尚未全部被氧化前,则滴下的染好临用前配制;0126二氯酚靛酚溶液:称取250mg26二氯酚靛酚溶于150ml含有52mgNaHCO3的热水中,冷却后加水稀释至250ml,滤去不溶物,贮于棕色瓶中冷藏(4摄氏度)约可保存一周。每次临用时,以标准抗坏血酸溶液标定。本法多用于含维生素C 的制剂和食品的分析的含量测定。2.3薄层扫描法扫描条件确定 在制备的染料试纸上定量点维生素C对照品进行扫描,维生素C在290nm处有最大吸收,420nm处无吸收,故选择1=290nm,2=420nm双渡长反射式锯齿扫描。测定用5l定量毛细管,分别吸取对照品溶液各5ul,点于试纸上。点样后晾干,并将试纸固定在20cm20cm玻璃板上,放入Cs一93O薄层扫描仪。测定A的积分值y(峰面积)为纵坐标,样量为横坐标x,得一直线方程。样品的含量测定取维生素C片1O片,研细,精密称取平均片重一片的粉末,放zkl00m容量瓶中,加缓冲液至刻度,振摇,使维生素C溶解,放置、澄清,用吸液管取3ml移至10m容量瓶中,用缓冲液稀释至刻度。用5l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上,然后扫描测定峰面积,由工作曲线法计算维生素c片中的维生素C含量3。2.4 用线性电位滴定法2.4.1方法原理抗坏血酸pKa=417,pKa=1156,一般表现为一元酸m线性滴定法测定一元酸依据的Ingman公式如下:VeV=VKHHAH一OH)(1+ KHHAH) (1)式中为达到化学计量点时耗用的标准碱液体积;V、Cb为加人的标准碱液体积与浓度;V。为待测酸液初始体积;H、H、OH分别为氢离子活度、氢离子浓度、氢氧根离子浓度,本文H与OH用氢离子活度H与氢氧根离子活度OH代替。用实验值V、pH代人(1)式求VeV,将VeV对进行线性回归,由回归方程的截距m与斜率k可得Ve=一mk。式(1)中KHHA为一元弱酸的条件稳定常数,要求实测。2.4.2方法抗坏血酸的分析:精确称取01g抗坏血酸,分别加入一定体积的离子强度调节缓冲液,稀释至5000mI,使离子强度分别为0.2、0.3、0.4,分别用No1N03标准碱液等量(050m1)分步滴定,记录V与pH、上机输入V与pH,由程序判断化学计量点所在范围,由化学计量点前的数据计算KHHA将实验值V、pH与计算值代入(1)式计算VV,用VeV对v进行线性回归,回归直线方程VeV=0处对应的V即为Ve,由Ve计算出抗坏血酸的回收率。样品分析:首先取维生素C片20片精确称重后计算每片平均重量;然后将其研细混匀后精确称取粉样0.1g,溶解后加入定量离子强度调节缓冲液稀释至5000m1,使离子强度为03,用No2标准碱液等量分步滴定,记录与pH-由计算机程序计算后求得,进而求得每片维生素C片抗坏血酸的平均含量,用此含量除以标示量得相当标示量4。滴定前必须用缓冲溶液仔细校正酸度计,称量好的样品应立即进行测定5。线性电位滴定法测定维生素C片抗坏血酸含量快速简便,仅使用常用药品,耗用药品量少,测量结果可满足半微量分析要求。2.5高效液相色谱法本法选择色谱柱为ODS(4.6nm*20cm,5um);流动相为5mmol/LnaH2PO4溶液(磷酸调pH至2.5);流速为1.0mol/min;检测波长245nml;柱温20摄氏度。测定时进样20uL,采用外标法,以峰高计算含量。理论板数按维生素C计应大于2000,各峰分离度应大于2。取本品10片,精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生cl00mg),置100 ml量瓶中,用流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,滤过再精密量取续滤液5 ml,置50 ml量瓶中,用流动相稀释至刻度摇匀,取20斗l注入液相色谱仪,记录色谱图;另取维生素c对照品适量,同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中C6H8O6。的含量6。2.62,4-二硝基苯肼法可测总抗坏血酸,总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸型。此法是将样品的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,然后与2,4-二硝基苯肼作用,生成红色的脎。脎的量与总抗坏血酸含量成正比,将红色脎溶于硫酸后进行比色,由标准曲线计算样品中总VC。原理:用酸处理过的活性碳把还原型的抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸,在继续氧化为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2,4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎,其成色的强度与二酮古乐糖酸浓度呈正比,可以比色定量。2.7原子吸收法维生素C的结构中含有烯二醇基团而具有还原性,在酸性介质中可将Cu2+ 定量地还原为Cu+ ,并与SCN-反应生成CuSCN沉淀,在高速离心机下有效地分离出沉淀,小心洗涤后再经浓硝酸溶解,用原子吸收法测定含铜量,即可推知样品中维生素c的含量7。2.8 旋光法根据维生素C具有旋光性的特点:精密称取105干燥恒重的维生素C对照品0 4931g,07995g,10184g,12503g,15551g,20261g,分别置50ml量瓶中,用5碳酸氢钠溶液稀释至刻度,以5碳酸氢钠溶液为空白,依法“测定它们的旋光度,以旋光度对浓度作线性回归。样品测定取125维生素c注射液适量,用5碳酸氢钠溶液将样品稀释成浓度为25mgml,按上述方法进行测定,每个批号样品测定3次,代入直线回归方程,计算出含量。本法具有操作简便、快速等优点,适用于药厂中间体的含量控制与快速分析8。2.9紫外分光光度法在PH510范围内维生素C在波长267nm处有最大吸收峰,可在这个条件下测定供试液的吸收度,用对照品比较法求出样品含量。此法的专属性较好,多种还原性物质以及多种药物辅料存在时,对维生素c的测定均无干扰,但此法需要对照品,对仪器设备的要求高。2.9.1方法(以维生素含片为例)溶液制备:对照品溶液取对照品25mg,精密称定,置100ml量瓶中,加0005molL硫酸液适量使溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。供试品溶液取本品20片精密称定,研细,精密称取适量(约相当于维生素C005g),置100ml量瓶中,加0005molL硫酸液适量,振摇使维生素C溶解,加0005molL硫酸液至刻度,摇匀,滤过,弃去初滤液;精密量取续滤液5ml置250ml量瓶中,用0005molL硫酸液稀释至刻度,摇匀,即得。测定波长的选择取供试品溶液置1cm吸收池内,在200300nm波长范围内进行扫描。2.10快速比色法根据资料显示维生素C与Fe()一邻菲罗啉复合物反应生成F
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