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手性柱应用介绍1 Daicel手性柱使用溶剂的限制众所周知,手性柱固定相对溶剂很敏感,使用时稍有不慎,即可对固定相造成不可修复的损伤。一般情况下,要避免使用的溶剂有丙酮、氯仿、二氯甲烷、THF和DMSO等,即使少量上述溶剂残留在管路、进样阀中也是色谱柱的潜在威胁,所以事先必须清洗干净。2 为什么柱效会降低?有没有再生方法?所有大赛璐柱子在出厂前均已检测柱效合格。造成柱效降低的原因有:1) 柱效急速下降绝大多数情况是色谱柱固定相被损伤(溶解/水解脱落),造成固定相损伤的物质可能来源于样品,溶剂,也可能来源于上一次进样残留于管路、进样阀中的杂质。这种情况对柱子冲洗或再生已无效。2) 柱效逐渐下降原因:有强保留物质逐渐聚集在柱头筛板甚至是固定相上解决办法:用强溶剂冲洗或更换筛板3) 旧柱子能分开的化合物换上新柱子就分不开了原因:“记忆效应”(有时,也有批次间的差异),一些强保留物质(如additive)保留在固定相上对手性诱导环境有一定的影响。解决办法:如果之前用过添加剂,就在流动相中继续添加此类添加剂,并对柱子平衡数小时再进样,但此方法有时仍然解决不了问题,这时应该可虑更换其它的分离条件。3 如果样品不溶于正己烷/醇体系,怎么办?一般情况下,分析用时,0.5-1mg/mL的浓度就可以满足检测,所以不用加大样品浓度对于酸、碱化合物,在流动相中适当的加入少量的强酸或强碱(如TFA/DEA)有助于样品的溶解,推荐添加浓度在0.1-0.2%,大于此浓度会损坏固定相。4 几种常用手性柱的使用(以5和10填料为例)1)Chiralpak AD IPA:0-100% in alkane(n-hexane or iso-hexane, or n-heptane) EtOH: 0-15% in alkane or 60-100% in alkane(n-hexane or iso-hexane, or n-heptane) MeOH: (1)0-100% EtOH or IPA in MeOH or 0-15% ACN in MeOH Ideal starting conditions: MeOH/EtOH 50:50(v/v) when alcohol mixtures are required (2)0-15% in alkane or 60-100% in alkane(n-hexane or iso-hexane, or n-heptane) 【注意:使用纯极性溶剂做流动相后,此色谱柱应做到专柱专用】 ACN:not compatible with alkane 0-100% IPA in ACN or 0-15% MeOH or EtOH in CAN 【注意:使用纯极性溶剂做流动相后,此色谱柱应做到专柱专用】 MTBE: Not allowed Acid: TFA or CH3COOH, 0.5%, Typically 0.1%Base: DEA or Butyl amine or Ethanol amine, 0.5%, Typically 0.1% Column-Temp: below 40DEG2)Chiralpak AD-H 同Chiralpak AD,不同之处在于,当使用正己烷/乙醇(甲醇)体系时,醇比例范围可以是0-100%3) Chiralpak OD-H同AD-H,不同之处在于,OD-H可以使用MTBE/alkane(或Alkane/EtOH),MTBE50%, 当使用MTBE后,色谱柱平衡时间要加长4) Chiralpak OD 同OD-H,不同之处在于,OD不能使用ACN体系CYCLOBOND I 2000 CYCLOBOND I 2000 是-环糊精化学键合固定相,CYCLOBOND I 2000及其衍生物CYCLOBOND I 2000 AC,SP和RSP可以运行于反相或极性有机相模式。极性有机相是无水的极性系统,适合快速分离和制备。CYCLOBOND I 2000 DM-环糊精甲基化产物,甲基化产物CYCLOBOND I 2000 固定相的羟基基团甲基化的产物,会产生以下三种情况。最通常的影响尤其是这种衍生物在极性有机相模式中,将损失分辨率。其次,较少的情况,有些化合物在天然环糊精上不能溶解,而在甲基化固定相溶解很好。第三种,也是最重要的,许多化合物在两种固定相中都可以溶解,但是显示出相反洗脱顺序。主要是由于庞大的甲氧基在空穴口造成空间影响的结果。在CYCLOBOND I 2000 DM 固定相上,冠醚,邻苯二甲酸,芴和一些农药,在反相模式即可以分离,而用CYCLOBOND I 2000 固定相是不可能的。CYCLOBOND I 2000 SP,RSP-环糊精,S- 羟丙基酯和R,S- 羟丙基酯-环糊精表面的羟基不是与“S”,就是与外消旋“RS” 环氧丙烷反应。扩展了氢键结合性能,能适应从芳香环到手性中心更大位距,或在咪康唑中当氢键结合基团被屏蔽时。对于某些像美沙酮这样的物质的分离,有时“S” 型显示出更高选择性和效率。CYCLOBOND I 2000 RSP 能被认为是通用手性固定相,另外还有分离非芳香结构额外特性,例如:t-boc 氨基酸和环状酯。没有芳香基团外消旋物在CYCLOBOND I 2000 RSP 柱子上经常成功分离。另外,CYCLOBONDI 2000 RSP 分离同系列物质比其它手性固定相效率更高。在制药工业手性分离中,它是最有用和应用较广衍生物之一。CYCLOBOND I 2000 SN, CYCLOBOND I 2000 RN,CYCLOBOND I 2000 DMP-环糊精,的氨基甲酸盐衍生物是CYCLOBOND I 2000 系列中最有用的工具。这些柱子是少数多种模式手性固定相之一,并能够在三种截然不同流动相中使用。每一种溶剂模式在不同机理下起作用,经常有新方法,和不同的机遇。CYCLOBOND I 2000 SN 和CYCLOBOND I 2000 RN 性能更强,适用化合物范围更宽。由于亚萘基衍生物加入额外手性到环糊精结构上,在正相溶剂中,用“R” 与“S” 对比洗脱顺序相反是可能的。偶而,从反相变为正相流动相,出峰顺序颠倒。在正相模式中,为了更有效的分离,在分析物中必须存在丌- 酸性的一半或通过衍生化引入。这里有许多在反相模式中,用这些亚萘基氨基甲酸盐实际应用的例子。无论怎样,在后来的研究中发现,这些例子中的大部分在极性有机溶剂中更有效。在许多情况像吡啶苯乙哌啶酮,在分析物中存在的官能团,在反相模式中,能防止包含络合,极性有机模式很成功。CYCLOBOND I 2000 ACCYCLOBOND I 2000 AC 是天然-环糊精过乙酰化的产物。它是在2000 系列中显示选择性和分辨率增加的产品之一 。起初,它 仅仅用于含-或-手性中心的芳香醇或胺,它也能用于两种不同溶剂模式,反相是最普通的,在有些情况下,极性有机模式。在反相应用中,pH 的最佳范围是4-6。
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