资源预览内容
第1页 / 共18页
第2页 / 共18页
第3页 / 共18页
第4页 / 共18页
第5页 / 共18页
第6页 / 共18页
第7页 / 共18页
第8页 / 共18页
第9页 / 共18页
第10页 / 共18页
亲,该文档总共18页,到这儿已超出免费预览范围,如果喜欢就下载吧!
资源描述
申报国家自然科学基金项目申请书样板各位申请人: 院科教部从我院申报国家自然科学基金项目中选择了一份严格依据报告正文撰写提纲要求撰写,并在撰写的整体布局、写作方法上比较相宜的申请书作为样板申请书,供应应其他申请人在撰写申请书时参考。注:考虑到本项目也将申请国家自然科学基金,从技术保密方面考虑,涉及核心技术和关键问题之处将以“XXXXXXX”代替。报告正文(一)立项依据与探讨内容1立项依据肝纤维化是严峻威逼人类健康的重要疾病之一,迄今没有满足的治疗方法。目前国内外绝大多数学者认为,肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)激活是肝纤维化的关键,抑制HSC的激活对肝纤维化的防治有重要价值1。粉防己碱(tetrandrine,又名汉防己甲素)是中药粉防己(Stephania tetrandra S Moore)的主要有效生物碱成分,具有广泛的药理作用。抗肝纤维化是Tet的重要应用领域之一。我们探讨室在过去的十几年中,对Tet抗肝纤维化作用及机制进行了系统探讨,证明Tet是抗肝纤维化有效药物。然而,由于Tet的剂量平安范围较小,以往探讨发觉的抗肝纤维化有效剂量与中毒剂量比较接近,故成为限制其临床应用的重要因素。近年国内Tet抗肝纤维化探讨也由此渐渐走向低谷。为削减毒副反应,拓展该药物的临床应用,我们近四年从降低Tet的单药剂量、联合用药及改造药物毒性基团等方面进行试验性探究。新近,我们在国内外首次发觉,低浓度Tet能上调转化生长因子(transforming growth factor factor ,TGF-)抑制性信号分子Smad 7表达,调控TGF-Smad信号通路,抑制体外培育静止期HSC活化,阻断TGF-1促静止期HSC活化效应,Tet还诱导活化HSC活化逆转。部分最新探讨成果已经整理成文发表在本事域有肯定影响力的SCI索引源期刊上,并被SCI收录(收录号 IDS Number: 963XN )2(相关文章参详见申请人简历及附件二、三)。这些全新探讨成果进一步增加了我们开发这一传统中药的信念。TGF-1是目前相识的最重要的促肝纤维化因子。抑制TGF-1对HSC的作用始终以来均是抗肝纤维化重要着眼点3。Smad 7是HSC TGF-信号通路的最主要负反馈调整信号分子,上调Smad 7是抑制TGF-对HSC不良生物效应的有措施之一4。在肝纤维化过程中,TGF-信号通路还与整合素信号通路存在亲密联系。这表现在三个方面:XXXXXX。XXXXXX。XXXXXXXXX。综上所述,XXXXXXX,如能XXXXXX,可进一步实现XXXXX治疗。基于以上探讨结果,我们探讨室在国家自然科学基金资助下,过去三年中应用化学方法合成了RGD和M6P,并将RGD与M6P结合成一新型复合分子RGD-M6P,探讨比较了它们对HSC靶向性及在抑制其功能中的作用(项目名称:RGD修饰细胞生物信息调控分子和缀合基因的功能探讨,编号:30170412)。我们的探讨发觉,RGD和RGD-M6P均可抑制HSC活化。RGD在抑制TGF-激活同时,还可阻挡HSC与ECM结合,阻断整合素信号转导。探讨还发觉,M6P能提高RGD作用于HSC的靶向性,增加其局部浓度,使RGD-M6P显示出较RGD更强的抑制作用14。我们首次证明,新型复合分子RGD-M6P用于抗肝纤维化治疗,无论在对HSC靶向的特异性,还是多位点联合作用方面,都优于单一的含RGD序列的肽段或M6P(参见基金结题摘要,相关文章参见申请人简历及附件四)。RGD-M6P新型复合分子的研制胜利及其对HSC靶向与抑制功能的发觉,有助于我们去探讨更多的HSC靶向选择性高、局部作用强、系统毒性小的新型药物和(或)制剂,从而提高药物的疗效、减轻毒性反应。结合我们对Tet药理作用的分子机制的探讨结果,不难发觉,XXXXXXXX。基于以上系列探讨基础与设想,紧跟国内外在制剂学方面的进展,我们拟设计XXXXXXXXXXX。当前,受体调整药物靶向(receptor-mediated drug targeting)作为一种新型的给药系统受到人们的重视16。XXXXXXXXXXXXXXXXX。迄今为止,尚未见到XXXXXXXXXXX。结合国内外同行的探讨报道与我们的探讨基础,不难推断,XXXXXXXXXXXXXXXXX。综上所述,我们拟在XXXXXXXXXX。本探讨将为XXXXXXXX等供应理论与实践基础。XXXXXXXXXX可以设想,如能取得预期效果,经过良好设计的基础探讨后,这一XXXXXX应用于临床的时间不会太久,前景广袤。参考文献1 Friedman SL. Mechanisms of disease: Mechanisms of hepatic fibrosis and therapeutic implications. Nat Clin Pract Gastroenterol Hepatol 2004;1(2):98-105.2 Chen YW, Li DG, Wu JX, et al. Tetrandrine inhibits activation of rat hepatic stellate cells stimulated by transforming growth factor-beta in vitro via up-regulation of Smad 7. J Ethnopharmacol 2005;100(3):299-305.3 Breitkopf K, Haas S, Wiercinska E, et al. Anti-TGF-beta strategies for the treatment of chronic liver disease. Alcohol Clin Exp Res 2005;29(11 Suppl):121S-131S.4 Dooley S, Hamzavi J, Breitkopf K, et al. Smad7 prevents activation of hepatic stellate cells and liver fibrosis in rats. Gastroenterology 2003;125(1):178-91.5 Ludbrook SB, Barry ST, Delves CJ, et al. The integrin alphavbeta3 is a receptor for the latency-associated peptides of transforming growth factors beta1 and beta3. Biochem J 2003;369(Pt 2):311-8.6 Annes JP, Chen Y, Munger JS, et al. Integrin alphaVbeta6-mediated activation of latent TGF-beta requires the latent TGF-beta binding protein-1. J Cell Biol 2004;165(5):723-34.7 XXXXXXXXXXXXXXXXX.2 项目的探讨内容、探讨目标,以及拟解决的关键问题2.1探讨内容:2.2.1 XXXXX化学合成与鉴定,二硬脂酸磷酯酰胺XXXXXXXXXX 合成与鉴定。 2.2.2 不同类型脂质体的制备、技术参数优化、物理性质鉴定和脂质体药物包封率、载药量、配体结合率鉴定与提高。2.2.3 大鼠HSC分别培育,XXXXXXX 修饰脂质体与肝星状细胞体外结合活性探讨。2.2.4 XXXXX 修饰XXXXXXXXX 对肝星状细胞活化、增殖、XXXXXXX 信号通路影响。2.2.5 XXXXXXXXX 的药代动力学特征、组织分布特征和XXXXXXX 探讨。2.2.6 XXXXXXXX 对胆总管结扎和CCl4大鼠肝纤维化防治作用。2.2探讨目标:2.2.1 探讨构建XXXXXXXX,为抗肝纤维化药物新剂型开发供应新型靶向载体。2.2.2 探讨XXXXXX 对HSC生物活性影响及机制,为中西药结合肝纤维化双靶向、多靶点、协同治疗供应理论基础。2.2.3 探讨XXXXXXXX 体内HSC靶向性及防治试验性肝纤维化的有效性,为开发中药新剂型、提高药物在靶组织浓度、降低有效剂量、减轻副作用和提高疗效供应实践基础。2.3 拟解决的关键问题:2.3.1 高药物包封率、高配体修饰率的稳定XXXXXXXX 制备。2.3.2 放射性计数法测定XXXXXX 与HSC结合活性,有效抑制HSC活化的剂量、时间参数等。2.3.3 XXXXXX 体内HSC靶向性、抗肝纤维化效果比较与评价。3 拟实行的探讨方案及可行性分析3.1 探讨方案:第一部分XXXXX 及XXXXX 合成(1) XXXXXX 合成及鉴定采纳我们探讨室建立的方法,化学合成XXXXXX。应用XXXXXXXXXX。合成反应图示如下。高效液相(HPLC)、质谱等方法鉴定合成产物纯度及分子量。反应图(略)(2) XXXXXXXXXXX采纳一步法合成。XXXXXXXXXXXX。合成反应图示如下。高效液相(HPLC)和质谱分析法进物产物纯化与鉴定。反应图(略)其次部分长循环脂质体制备、鉴定与技术条件优化 (1) 脂质体制备采纳经我们改良的逆相蒸发法制备。详细方法如下:XXXXXXXXXX。(2) 性质鉴定 XXXXXXXXXXXXXXXX。(3) 匀称设计优化处方 依据试验结果及文献,确定影响包封率的主要因素。以包封率为评价指标,采纳二项逐步回来计算回来方程,并进行方差分析,优化条件。第三部分 XXXXX修饰长循环脂质体与HSC体外结合活性采纳两步胶原酶灌注和密度梯度离心法分别大鼠HSC,选择静止态和激活态的HSC,接种于6孔板上(细胞密度为5.0105/mL)。待贴壁后,1%胎牛血清DMEM培育过夜,细胞同步化。(1)配体结合的浓度-效应关系XXXXXXXXXXX。(2) 配体结合的时间-效应关系 XXXXXXXXXXXX。(3) 竞争抑制XXXXXXXXXX。(4) 细胞荧光定位、配体表面结合率与内吞率测定XXXXXXXXXX。(5) 平衡解离常数(Kd )和细胞最大结合位点数(Bmax)XXXXXXXXXXX。第四部分 XXXXXXX对HSC生物学特性影响与机制采纳酶法分别大鼠HSC。簇新分别的HSC,体外培育48 h后,作为静止期HSC用于下游试验,或培育1 w后消化传代,接着培育24 h后,作为活化的HSC用于下游试验。(1) XXXXXXX对HSC活化状态影响XXXXXXXXX。(2)XXXXXX对TGF-1效应影响XXXXXXXXXXXX。(3)XXXXXXXX 大鼠HSC TGF-受体XXXXXXX 信号通路影响XXXXXXXXXXXXXX。第五部分 XXXXXXXXXXXX(1) XXXXXXXX 在肝纤维化大鼠体内的器官分布XXXXXXXXXX。(2) XXXXXXX 大鼠体内药代动力学采纳XXXXXXXX。(3)XXXXXXX 在肝纤维化大鼠肝脏内分布采纳XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX。第六部分 XXXXXXX防治大鼠肝纤维化(1)造模采纳胆总管结扎和CCl4肝纤维化两种动物模型。(2)分组及处理XXXXXXXXXXXXXX。(3)治疗效果检测主要比较以下指标:XXXXXXXXXXXXXXX。3.2技术路途技术路途图(略)。3.3可行
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号