AW24.7细胞株的有关信息TCC： 美国模式培养物集存库(Amrican ypeclurecollecton）的简写收到冷冻管细胞的解决方式1. 收到细胞株包裹时,请检查细胞株冷冻管与否有解冻情形， 若有请立即告知。细胞株请尽速开始培养，或立即冷冻保存(置于0，隔夜后,移到液氮）。2 收到T25 las细胞的解决方式于寄送过程中，为避免起泡导致细胞脱落死亡，T25flsk 均加满培养基。.1.检查flas 外观,并于显微镜下观测细胞生长状况和有无污染现象，若有任何问题，不要打开盖子，请立即告知细胞实验室。2.2.将原封之T25las 静置于37， 5% 2 培养箱中,使细胞回温至37,并让运送过程中少数脱落的细胞可再附着生长。2.3.隔天后,于无菌操作箱内取出flask内之培养基,(取出之培养基可以再使用）,仅留约5-10ml 培养基于fask 内，依一般培养方式再将细胞置入培养箱中，或细胞已长满盘,则将细胞做传代培养。RAW6.7细胞株的Cell Culture一、RA264.7细胞培养的特点1、RW264.7细胞一般为圆形或椭圆形，功能活跃时,可呈多突形。细胞核为圆形或椭圆形,染色较深。贴壁特别牢固。、AW7具有很强的吞噬能力，当吞噬抗原后,细胞会释放趋化因子,进一步增进细胞伸出伪足，增强粘附攀爬能力。细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣都会增进该细胞呈现梭形、长梭形，镜下会看到具有细长伪足的小细胞被类似上皮的梭形大细胞取代。3、每次传代都很难消化下来。用力过大则对细胞损伤较大,这种细胞传代时接种密度要大,否则容易使巨噬细胞向终末细胞分化，细胞变成长形,并且不能答复，这是培养这种细胞时最需要注意的问题。4、对于RAW264.7细胞她的声场时喜欢结伴。正常生长状态应当是一小片一小片的生长,片片之间不连接，等到长到更多更密的时候会连成大片,并且会叠加成层。因此，要较好地控制好细胞的生长速度，不要等到叠加成层的时候再传代。5、RW64.7细胞传代后贴壁时间较短,半小时就能贴诸多，刚贴壁是细胞呈圆形,折光度较好,镜下观测如小珍珠状一种个地散落于瓶底面。生长一段时间后,部分细胞会变成类似四角形，伸出伪足之类的。这个时候就是提示你注意传代了，这部分细胞如再不传代，很容易就老化掉。二、RA24.细胞传代) 将培养瓶内旧的培养液弃掉， 然后用DHanks液洗两次,(一定要洗干净,以免影响胰酶的消化作用） 2)加入05%胰酶-EDA消化，5cm培养瓶加0.l, 3度消化5m，镜下看到细胞变圆，间隙增大。（值得注意的是该细胞对机械损伤比较敏感)3)立即加含10FCS的培养液终结消化,用细胞刮刀轻刮,注意，这时候用吸管吹不下来,但是刮刀却很容易刮下来,并且对细胞的损伤极小)离心，弃上清，加新的培养液(10FC），小心吹匀,分装入新的培养瓶三、RW264.7细胞冻存及复苏(一）细胞冻存. 配制冻存培养液;（通用的为培养基：血清：DM=7:：1,但其中的血清可进行调节，如上面的仁兄用的4:,比例过高). 取对数生长期的细胞（冻存前一天换液),用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中;3. 离心100m,i;4 清除胰蛋白酶及旧的培养液，加入适量配制好的冻存培养液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最后密度为506ml1107/l；5.将细胞分装入冻存管中,每管1.5 ml（不超过冻存管容量的80%)；6. 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者；7. 冻存：原则的冻存程序为降温速率-12/ min；当温度达2如下时,可增至-5-10/min;到-100时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20冰箱2 ，然后放入-7冰箱中过夜,取出冻存管，移入液氮容器内。(具体操作为4 2min,-2030mi,-7过夜,转入液氮中)（二) 细胞复苏1. 从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37温水中，并不时摇动令其尽快融化。（1mi以内溶解完毕，不能将口进入水面下)2. 从37水浴中取出冻存管,打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管并滴加10倍以上培养液，混匀;3. 离心,100rpm，5i；4.弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数，调节细胞密度，接种培养瓶，37培养箱静置培养；(复苏时细胞密度稍大，可提高复苏效率)5 次日更换一次培养液,继续培养。（可更换一半培养液,避免跨度太大,影响细胞状态)（三)接种四、W24.7细胞形态不好时的解决措施1倒掉旧的培养基，加入3l新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入3l的培养基,进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。 2把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,准时间点观测细胞贴壁状况。10分钟观测一次,2分钟,30分钟观测一次。选择一种时间点,已有部分细胞贴壁的状况下,重新置于干净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入3ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观测细胞生长状况以及形态。我称之为“二传”。3.如果一次效果还不抱负,可反复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意,结合细胞喜欢的生长状况。喜欢多一点数量长得好的细胞就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。不明之处:培养之前，一切与细胞接触的玻璃器皿和器具都要进行过去热源解决。（00-50烘烤4-6h）?RAW264.7细胞株Cll Cultue的材料(一）仪器1 净化工作台2. 离心机. 恒温水浴箱.冰箱(4、-20、-70)5.倒置相差显微镜. 培养箱 液氮冰箱(二）玻璃器皿1 吸管（弯头、直头)2. 培养瓶3. 玻璃瓶(250l、100l). 废液缸（三）塑料器皿1吸头.枪头. 胶塞4. 移液管(10ml)5l离心管6 冻存管（12ml）(四）其她物品1. 微量加样枪2. 红血球计数板3记号笔. 医用橡皮膏. 移液枪(五)试剂1. DHanks液2.胎牛血清3. 培养液4.双抗（青霉素、链霉素）5. 胰蛋白酶（0.25%)6.7.4%NaC37.SO（分析纯）或无色新鲜甘油附. 胎牛血清品牌整顿第一类，最高档别,是专门用于干细胞的特级胎牛血清、Hclon的特级胎牛血清目前，性能最佳的血清，还是要说说Hclone的特级胎牛血清，货号是SH00.3，它是ylone的“招牌菜”。Hone特级胎牛血清（DefinedFS)，货号SH0070，是世界上唯一通过4纳米过滤的顶级胎牛血清,极佳的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量0Em,血红蛋白含量10mg/dl。此血清可以广泛用于多种细胞培养,涉及任何干细胞系的培养。2、Gic的特级胎牛血清稍次一点的是Gibco公司在美国原装生产的特级胎牛血清，这款血清，货号是16000-044,是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与ycloe的S7.03相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。同样是美国来源，因此渠道特殊。3T的特级胎牛血清TB（Tssuelture oloials)公司作为一家生物行业类的出名供应商，成立于19年,大部分血清的采集和加工都在加利福尼亚。每一批的原材料都通过严格筛选,所有的产品都在FDA认证的cP车间进行！. ioid特优级胎牛血清血源来自北美和澳大利亚BioInd公司的生产完全符合GMP的规定，并通过IO900:和IS 13485:质量认证。以安全,稳定,高效为原则的BioInd公司,所有的产品质量均完全符合国际原则。ologalIndustrs主营细胞培养类产品，Bond工厂加工的胎牛血清均符合US原则及欧洲原则血清。根据美国农业部原则,原始血清均采自未发生疯牛病（BS）和口蹄疫(MD）疫情的国家。Blogcal Industries三步滤菌解决法,最后的过滤环节为持续通过三个10纳米的滤膜。血清生产的干净级别为10级。所有分装工作台都通过高效微粒空气过滤器过滤，并保持正压分装环境要对总微粒、悬浮微粒数和压力进行监控。分装之后,终产品迅速-20度冻存,并隔离,直到所有的质量控制检测完毕。第二类,优等胎牛血清1.Hclon的加拿大优等胎牛血清性价比最高的是ycone加拿大优等胎牛血清（CaracteizndFBS）SH30396.0 血清采自加拿大，由hycloe公司总部的员工采集加工，采集措施，加工过程,检定原则与美国原产优等胎牛血清完全一致,市场价格低于美国原产的。通过3次100nm过滤,内毒素含量25U/m,血红蛋白含量25mg/dl2、yclone的南美优级胎牛血清大体与加拿大的优等血清是同样的，级别也非常相似,货号是sv30087.02，该胎牛血清来源于南美洲,以封闭的心脏穿刺方式采集,产品经3次10n 过滤，经严格检测保证无支原体，细菌病毒检测根据美国药典(USP）和美国联邦法规第九篇(9CFR）,内毒素含量0EU/l,血红蛋白含量2 mgl，完全符合美国 HyClone&e；优等胎牛血清的检测原则。3、Gco的澳大利亚胎牛血清状况和Hycloe的澳大利亚胎牛血清差不多，市场价也是200元/500ml左右。这一级别的血清,也能用于干细胞培养，可是,不象特级胎牛血清那么优秀。由于，此胎牛血清属于澳大利亚生产的，不在疫区,可以正常报关进口,目前没有受到任何影响,因此，就目前而言,算是最佳的胎牛血清了,有不少客户都此血清来培养干细胞,效果还是比较不错。4、CB的优级胎牛血清状况和Hyclne的澳大利亚胎牛血清差不多,市场价也是300元/00m左右。这一级别的血清,也能用于干细胞培养，可是，不象特级胎牛血清那么优秀。第三类,一般级别的进口胎牛血清、Hcoe的南美胎牛血清目前，市场上用的最多的Hycon血清是南美胎牛血清(FBS）SV30087 ,此血清采自南美，在国内（兰州)过滤并测试检查,经三次100纳米过滤，根据中国商标法的规定标贴中文标签,内毒素含量10E/m，血红蛋白含量20mg/d。此血清广泛用于多种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载可以用于干细胞，也据说有少数人用于干细胞培养的，但是，由于自身血红素比较高,因此，最佳不要用于干细胞，2、Gibco的南美胎牛血清这款血清,是Gibc针对Hycloe南美胎牛血清做的,价格比较贵,仿佛是1780元/0。3、Gemini的胎牛血清4、的胎牛血清、PA的胎牛血清6、JRH澳洲胎牛血清第四类，国产的多种系列胎牛血清国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清自身是需要穿刺取血的,而国内都是剖腹产出胎牛,8小时左右取血，然后，进行过滤分装。因此,国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。价格便宜但是遇到的问题非常多。