资源预览内容
第1页 / 共26页
第2页 / 共26页
第3页 / 共26页
第4页 / 共26页
第5页 / 共26页
第6页 / 共26页
第7页 / 共26页
第8页 / 共26页
第9页 / 共26页
第10页 / 共26页
亲,该文档总共26页,到这儿已超出免费预览范围,如果喜欢就下载吧!
资源描述
实验一:细胞的形态观测及其大小测量一、实验目的:1、通过对原核和真核各种形态细胞的光学显微镜观测,了解细胞的形态及其显微结构;2、学习显微测量的方法,对细胞的大小有一直观结识。二、实验材料和仪器:小白鼠肝细胞切片;鸡血红细胞;蚕豆叶片横切片;普通光学显微镜;目镜测微尺;镜台测微尺;载玻片;盖玻片。三、实验环节:(一)细胞形态观测l、动物细胞的观测(1)人肝细胞切片:在显微镜下仔细观测肝细胞的形态构造。(2)鸡血细胞涂片的观测:观测血细胞的组成;红细胞、白细胞、血小板的形态特点。2、植物细胞的观测(1)取蚕豆叶片横切片的观测:注意表皮细胞和叶肉细胞的基本结构。(二)细胞的大小和测量1、卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上,再旋上目镜的上透镜。2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好,使测微尺分度位于视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊,可转动目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的一直线重合,然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。4、记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少m:镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数= 10 目镜测微尺的格数四、实验结果:1、目镜校正:40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.242、细胞大小的测量: 测量次数 细胞种类一/um二/um三/um平均/um人肝细胞(1040)19.4421.3618.0018.9616.3219.6817.9220.00血红细胞(1040)7.207.687.687.52血白细胞(1040)9.129.609.849.52血小板(1010)1.441.441.441.44栅栏组织(1040)9.1279.2010.0881.1210.5680.649.9280.32五、作业与思考:1、血细胞按含量高低,重要具有:红细胞,白细胞,血小板。白细胞最大,红细胞次之,血小板最小。红细胞:重要的功能是运送氧。 白细胞:重要扮演了免疫的角色,当病菌侵入人体时,白细胞能穿过毛细血管壁,集中到病菌入侵部位,将病菌包围,吞噬。血小板:止血过程中起着重要作用。细胞形态见下图。2、植物细胞一般比动物细胞大一些。形态图见下。3、在不同放大倍数下,测定的细胞大小基本一致,但有一些偏差。放大倍数越大,在视野中同等实际距离下的两点视野距离更大,而更容易测量准确。实验二:PAS(Periodic Acid Schiff)反映显示糖原和其它多糖物质一、实验目的1、熟悉PAS法原理及操作环节;2、观测PAS反映的染色结果,并观测多糖在组织细胞中的分布。二、实验原理多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。一些不溶性的多糖构成植物和动物的骨架,如植物的纤维素和动物的甲壳素,一般称为结构多糖。另一些多糖在生物体内作为能量贮存,如淀粉(植物)和糖元(动物),在需要时可以通过生物体内酶系统的作用分解,释放出单糖。三、实验用品:过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯(1:1)。梯度乙醇溶液:100,95,90,80,70,50各两份,一份用于脱腊复水,一份用于脱水。载玻片 、盖玻片、染色缸、显微镜 、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆;小鼠肝细胞石蜡切片。四、实验环节:(一)土豆切片的观测制作土豆徒手切片过碘酸解决1530min70%乙醇1min schiff 试剂15min 亚硫酸水漂洗23次 蒸馏水漂洗 镜检(二)小鼠肝细胞切片的观测取鼠肝石蜡切片 二甲苯脱蜡约 10min 二甲苯+100%乙醇(3 min)梯度乙醇脱二甲苯,在各浓度乙醇(100,95,90,80,70,50)中约 23 min 过碘酸 氧化 1530 min 蒸馏水漂洗 Schiff 试剂 1530 min 亚硫酸水漂洗 23 次 蒸馏水漂洗 苏木精染色 10 min 流水冲洗梯度乙醇脱水(50,70,80,90,95,100),在各乙醇浓度中约 23 min 100%乙醇+二甲苯 23 min二甲苯适度透明 指甲油封片 镜检五、实验结果:鼠肝切片观测土豆切片观测六、作业与思考:1、描述土豆切片和鼠肝切片中糖原分布特点。土豆切片中,多糖多在细胞质液泡中。鼠肝切片中,多糖多在靠近核的区域。2、影响 PAS 反映染色效果的关键环节是什么?Camey固定液固定;Schiff 染色液染色;对分色的控制。3、如何制作徒手切片?应注意什么才干得到薄而均匀的切片?应注意需要连续快速地切下多片薄片,并从中选出较好的切片。实验三:叶绿体的分离与荧光观测一、实验目的:1、通过植物细胞叶绿体的分离,了解细胞器分离的一般原理和方法。2、观测叶绿体的自发荧光和次生荧光,并熟悉荧光显微镜的使用方法。二、实验原理:将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。将匀浆液1000r/min的条件下离心2min, 以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后,在3000r/min的条件下离心5min,即可获得沉淀的叶绿体(混有部分细胞核)。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸取光能进入激发态,从激发态回到基态时,就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光,这种光就称为荧光。若停止供能,荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后,可直接发出荧光(称为自发荧光)。有的生物材料自身不发荧光,但它吸取荧光染料后同样也能发出荧光(称为间接荧光)。三、实验材料和仪器:普通离心机,粗天平,荧光显微镜,剪刀,研钵,移液管,漏斗,滴管, 10ml刻度离心管,纱布若干, 无荧光载玻片和盖玻片,新鲜菠菜,0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)、四、实验环节:1、叶绿体的分离(1)选取新鲜的菠菜嫩叶,洗净擦干后,去除叶梗及粗脉并剪碎,称取2g左右,置于预冷的研钵;(2)加10ml的0.35molL-1 NaCl溶液研磨匀浆;(3)用6层纱布过滤,滤液盛于烧杯中;(4)取滤液4ml于1000rpm离心2min,弃去沉淀;(5)将上清液3000rpm离心5min,弃去上清液,沉淀即为叶绿体(混有部分细胞核);(6)沉淀用0.35molL-1NaCl溶液悬浮。2、叶绿体的观测(1)滴叶绿体悬浮液一滴于载片上,加盖片;在普通光镜下观测,注意观测所分离的叶绿体的形态以及其是否完整。(2)滴叶绿体悬浮液一滴于无荧光载片上,加无荧光盖片;在荧光显微镜下观测叶绿体有无自发荧光,其颜色如何。(3)滴叶绿体悬浮液一滴在无荧光载片上,再滴加一滴0.01吖啶橙荧光染料,加无荧光盖片后即可在荧光显微镜下观测另一方面生荧光。3、完整细胞中的叶绿体观测(1)用镊子撕取一片菠菜叶子表皮,平铺于载玻片上,滴加一滴提取缓冲液,加盖片后轻压,备用。(2)用镊子撕去菠菜叶子的表皮,用刀片刮下一些叶肉细胞,放于载玻片上,滴加一滴提取缓冲液,加盖片后轻压,备用。(3)将以上两种制片进行一下三种方式的观测:a、通光镜下观测。b、光显微镜下观测。c、加一滴0.01吖啶橙荧光染料,加无荧光盖片后,在荧光显微镜下观测。五、实验结果: 叶绿体次生荧光叶绿体自发荧光表皮细胞(普镜)木质素表皮细胞(荧光)表皮细胞(光镜)木质素(荧光)六、作业与思考:1、描述你所观测到的实验现象,自发荧光和次生荧光的区别?自发荧光:有些生物体内的物质受激发光照射后,直接发出的荧光称为自发荧光,如叶绿素的火红色荧光。间接荧光:有的生物材料自身不发荧光,但它吸取荧光染料后同样也能发出荧光,则称为间接荧光,如叶绿体吸附吖啶橙后可发橘红色荧光。2、叶绿体分离的原理是什么?操作过程中应注意什么?通过研磨绿色植物叶片使叶肉细胞破损,叶绿体被释放到提取液中,再通过等渗介质中差速离心去除杂质, 再次离心,则可分离出叶绿体沉淀。应注意须在低温下迅速提取,且须注意等渗液溶度,离心速度和时间的把握,避免叶绿体破裂。实验四:吖啶橙(acridine orange)染色观测口腔上皮荧光一、实验目的1、熟悉荧光显微镜的原理及使用方法。2、观测荧光染料染色后结合物发出的荧光。二、实验原理吖啶橙荧光染料可与细胞内DNA和RNA结合。其吸取光谱405nm,发射的荧光光谱是530640nm,因此,吖啶橙和不同的细胞成分结合后,可发射红橙黄绿蓝各色荧光。 三、实验用品荧光显徽镜、载玻片、盖玻片、染色缸、牙签;口腔黏膜上皮细胞临时制片;0.1mol/L pH7、0 PBS液。0.1吖啶橙原液、95乙醇 四、实验环节1、用牙签刮取口腔上皮细胞涂在干净载玻片上; 2、95乙醇溶液固定5min; 3、滴加0.01吖啶橙染液染色5min; 4、用PBS缓冲液缓慢冲洗; 5、加盖玻片镜检。 五、实验结果口腔上皮细胞(荧光)实验五:植物细胞骨架的光学显微镜观测一、实验目的掌握植物细胞骨架的制备方法,并用光镜观测洋葱内皮细胞的骨架网络结构。二、实验原理细胞骨架(cytoskeleton),是细胞内以蛋白质纤维为重要成分的网络结构,根据蛋白质纤维的直径、组成成分和组装结构的不同可分为微丝、微管和中档纤维。本实验采用去垢剂TritonX-100的缓冲液解决植物材料时,可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉,但细胞骨架系统的蛋白却被保存下来,后者用考马斯亮蓝R250染色,在光学显微镜下可见一种网状结构。三、实验用品1、器材:显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、擦镜纸、50ml烧杯; 2、实验材料:洋葱鳞茎;3、试剂: pH6.8的磷酸缓冲液、M-缓冲液、1%TritonX-100、3%戊二醛、0.2%考马斯亮蓝R250 染液、50,70,95乙醇、)叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶。四、实验环节1、 取材:撕取洋葱鳞茎内表皮0.51cm2,浸入装有磷酸缓冲液(PH6.8)的小烧杯中,解决510分钟。2、 去垢解决:弃去PBS缓冲液,用吸水纸吸净剩余的PBS,加适量1%Triton X-100,使液体充足浸泡材料,并立即放入37恒温箱或水浴锅中解决30分钟。3、 冲洗:吸去1%Triton X-100,立即加入M缓冲液轻轻冲洗3次,每次35分钟。4、 固定:用吸管将M缓冲液吸尽,加入3%戊二醛,固定1020分钟。5、 冲洗:吸去3%戊二醛固定液,用磷酸缓冲液(pH6.8)冲洗3次,每次35分钟。6、 染色:吸去PBS缓冲液,加入适量0.2%考马斯亮蓝R250染料,染色1020分钟。7、 制片:吸去染料,用水冲洗(注意不要将材料丢失)。将洋葱表皮伸展铺平于载玻片上,加盖盖玻片。8、 镜检五、实验结果
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号