高效液相色谱柱的保护1、最好用预柱。（但要注意，若有时出峰异常，要先看看是不是它有问题了）2、每次做完分析，都要进行冲洗，分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90甲醇冲洗3060min；若分析用流动相中含以上物质，要先用10甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1小时左右，再梯度走到90甲醇冲洗3060min（若用多元泵）。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。若长时间不用该色谱柱，要冲洗好后，用纯甲醇或乙腈封存。3、若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用，不能再做其它物质分析用。因色谱柱填料性质已与原来所不同，在该柱上所摸索的色谱条件，可能在其它同类柱子上得不到重现。4、尽量避免反冲，除非该色谱柱厂家明确说明允许。5、普通C18柱尽量避免在40以上的温度下分析。6、定期测柱效，有下降，可以用10异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善，可以再生，甲醇二氯甲烷甲醇。-1样品要采用0.22或0.45m滤膜过滤，流动相采用0.45m滤膜过滤并脱气。 2大多数反相色谱柱的pH稳定范围是27.5，尽量不超过该色谱柱的pH范围3避免流动相组成及极性的剧烈变化。4. 避免纯水冲洗反相色谱柱。5每次测试完毕，要用20倍柱体积的流动相冲洗色谱柱（分析色谱柱2504.6mm柱体积3.2ml）。如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕后将柱子用纯水冲洗干净，并保存于乙腈中。 6压力升高是需要更换预柱的信号。避免流动相组成及极性的剧烈变化。是不是流动相组成改变时要有个梯度,缓慢升或缓慢降?那要多慢呢,比如说我用水和乙腈做流动相,想从20:80升至100:0,设定多长时间比较合适呢另外,纯水冲反相柱的缺点是什么呀?-说说防止色谱柱堵塞的问题吧：1：溶剂中的不溶物应使用色谱纯溶剂，膜过滤（孔径不超过0.45m）2：样品中的不溶物应对样品进行膜过滤（孔径不超过0.45m）3：泵，进样器等中的不溶物在泵和进样器之间安装内置过滤器，在进样器和柱之间安装预过滤器4：柱内不溶物的形成：由于溶剂的不互溶而产生的沉淀用能溶解沉淀物的溶剂冲洗色谱柱；在不互溶溶剂中由于进样而产生的沉淀检查样品液和流动相是否互溶；由于温度的改变或固定相的干涸而产生的沉淀将色谱柱密封紧，并保持室温恒定！还有就是平衡色谱柱、色谱柱的再生：1 平衡色谱柱：反相色谱柱在经过出厂测试后是保存在乙腈/水中的。请一定确保您所使用的流动相和乙腈/水互溶。由于色谱柱在储存或运输过程中可能会干掉，因此在用流动相分析样品之前，应使用1020倍柱体积的甲醇或乙腈平衡色谱柱；如果您所使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水过渡。硅胶柱或极性色谱柱在经过出厂测试后是保存在正庚烷中的。如果该色谱柱需要使用含水的流动相，请在使用流动相之前用乙醇或异丙醇平衡如何平衡色谱柱？ 平衡过程中，将流速缓慢地提高；用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂浓度如果较低，则需要较长的时间来平衡）2 色谱柱的再生：进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱！-1.对于一些特殊型号的柱子，例如不同型号的手性柱应严格按照柱子的相应说明书所要求的进行维护，并按照其规定的范围选择试剂的种类，比例，PH ，等等；2.尽量避免柱子进气泡的现象出现，如在实验 过程中留心流动相的体积，同时对所需体积进行大概的估计，以免吸空，气泡进柱，尽管有多种排气泡的方法，但毕竟影响柱子的性能，尤其是比较“娇贵”的柱子；-每天用足够的时间来平衡色谱柱，您就会在处理问题方面获得最大的补偿，而且您的色谱柱的寿命也会变得更长！- 一定得做！ 新的色谱柱在使用之前应该在您自己的液相色谱仪上进行性能测试，即使用色谱柱附带的检验报告上测试条件和样品来测定该色谱柱的柱效。并且，在以后的使用中，应时常对色谱柱进行测试。 卡套柱的安装（加预柱）更换色谱柱滤网和玻璃棉过滤片（同时可以修补色谱柱）注意：在取出反相柱芯的滤网和玻璃片之前，应该将色谱柱充分用水和甲醇/乙腈冲洗，而且修补工具的头部也应该蘸取少量的甲醇/乙腈，以避免在取出滤网和玻璃棉滤片时带出柱子内的填料。 色谱柱的再生 进行色谱柱再生时，应使用一个谦价的泵，我们建议最好不使用您的高效液相色谱仪上的泵。 表1建议用来冲洗的溶剂体积色谱柱尺寸 柱体积 所用溶剂的体积 125-4 1.6ml 30ml250-4 3.2ml 60ml 250-10 -20ml 400ml 请根据下表选择您的再生方法：极性固定相（如Si，NH2*，DIOL基色谱填料）的再生：正庚烷氯仿乙酸乙酯丙酮乙醇水*非极性固定相（如反相色谱填料RP18，RP8，CN等）的再生：水乙腈氯仿（或异丙醇）乙腈水0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱注意：在对NH2改性的色谱柱进行再生时，由于NH2可能成铵根离子的形式存在，因此应该在水洗后用0.1M的氨水冲洗，然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。 *如果简单的有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质，用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。1.首先，溶剂、样品要前处理，溶剂要用色谱级别的并用0.45um的滤膜过滤并脱气，样品要用0.22um的滤膜过滤。2.做样前，柱子要平衡一段时间，先用甲醇平衡30-60分钟，再用纯化水平衡30-60分钟，然后用流动相平衡，直到基线走平时，再进样。3.做样结束后，柱子要用甲醇和水冲洗，冲洗顺序与2步相反，最后柱子用甲醇（95%）保存。4.如果柱子里东西太多，可以用甲醇，乙腈，水反复冲洗。-谈谈关于启用新柱子(C18)的注意事项:1、首先应检查一下，看是否为原装产品和外观完好情况。2、保存好供应商随柱提供的“关于柱性能测试报告”，其中包含了新柱子的最佳性能指标，如在某预定色谱条件下的柱压、柱效等。3、重现流动相条件，主要观察柱压的变化（100%甲醇、100%乙腈、50%甲醇-50%水等），并将数据记录在“性能报告上”，以便今后对照。4、启用新柱子时的流动相流速应慢一点，如0.3-0.5ml/min，经过10-15min后可以加快。5、对于25cm柱子，流速一般不超过1.0ml/min，能用慢速流量时尽量使用慢一点，当然要考虑分离效果和分析时间。用离子对色谱法时柱子使用的一个问题.我们知道,一般我们分析样品时,常采用有机相(甲醇,乙腈)-水体系作为流动相,对于大部分的分析工作,这个体系就能胜任了,但是,当我们遇到弱酸碱时,比如生物碱,容易拖尾，这时候我们可以采用离子对色谱法进行分离,常用的离子对试剂有庚烷磺酸肭和十二烷基磺酸钠,这时候,我们常采用pH3-5的缓冲盐体系,我们在 采用离子对色谱进行分离时,该怎么保护色谱柱呢?一个很重要的问题是,当我们冲柱子的时候,应该先采用有机相-水体系冲,再用水冲,然后用有机相冲，比如我们的流动想是甲醇-0.5%的庚烷磺酸钠(pH3.3)(50:50),我们在冲柱子的时候,应该先用50%的甲醇水冲柱子,然后用水冲,然后用甲醇冲,这是为什么呢?我们知道,通常的洗衣粉的主要有效成分是十二烷基硫酸钠(表面活性剂),它可以把一些脂肪油洗下来(烷烃及其衍生物),庚烷磺酸纳也是表面活性剂,如果先用水冲洗,会产生用洗衣粉洗衣服时的效果(ODS的固定相是长链烷烃),会造成固定相的损失,如果我们采用有机相-水体系先冲柱子,由于表面活性剂在有机相中有一定的溶解度,并且流动相的量比较大(相对于固定相,因为流动相是在不停的流动嘛)会使表面活性剂逐渐溶解在流动相中而被冲出,当表面活性剂被冲干净之侯,我们就可以采用水冲,然后采用有机相保存柱子了.-我也说说色谱柱的保护首先要看清楚说明书，是属于何种色谱柱，楼上各位所说都是集中在反相柱上，而正相色谱柱的保护和处理则有很大不同其次，色谱柱优良好坏的指标有柱效、柱压等如果在实验的某一天突然发现柱压升高，或者峰形脱尾等现象，则有必要对色谱柱进行处理。处理方法，反相柱楼上的已经说了很多第三，色谱柱在进样时一定要过滤，最好加上预柱colcare.pdf (100.25k)-我们的液相，既没有在线流动相过滤器，也没有预柱，（可能是经济原因不给配），所以，做样都要万分小心，但是，柱压还是会莫名其妙的升高。从最初的100%甲醇600psi慢慢到最后1800psi，这个时候可能就是柱子堵了，但是出峰时间和柱效（踏板数）几乎没有什么变化。一般情况我们的处理办法是，将柱子用甲醇饱和后，将柱子竖直放置，进口端的方向竖直向上，用两个扳手慢慢将柱子的入口端螺丝拧下，这时，会看到白白的硅胶，有时候会看见一个薄薄的筛板，将拧下的螺丝和筛板进行超声清洗，螺丝只需用100%甲醇或者100%乙醇和水超声即可，筛板需要先用水，再用20%硝酸（15分钟以上），再用异丙醇超声，其他的超声10分钟左右就行。如果筛板和螺丝是一体的，那么就不能用那么高浓度的硝酸了5%既可了。开口的硅胶在空气中放置1个小时以内是没有任何关系的，当超声完毕后，按照原来的样子重新安装上就可以了。然后再用甲醇饱和。我的长柱子25cm和短柱子15cm的我都拆开清洗过筛板，效果非常明显，压力从2200psi（25cm）下降至900psi，1800psi（15cm）下降至700psi。经过全部检查确定压力增大是由柱子引起的可以一试。-只谈反相硅胶柱的一些清洗方法:清洗硅胶键合柱子再生被污染HPLC柱子的关键是知道污染物的性质并且能找到适当的溶剂来去除。如果污染是因为重复进样时强保留物质的累积引起的，利用简单的步骤来除去这些污染物往往能恢复其色谱行为。有时候，经过多次操作以后的色谱柱用90100的溶剂B（双溶剂反相系统中较强的溶剂）冲洗20个体积可以清除污染物。（表2列举了不同规格的HPLC柱子的空体积，因此读者能方便地确定相应柱子冲洗的体积。）例如，柱子中残留的脂质就能用非水溶剂