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紫外吸收光度法鉴别和测定维生素B12 注射液【实验内容】1. 对照品溶液和样品溶液的配制准确称取维生素 B12 对照品适量,加水溶解稀释成25g/mL 的溶液。精密吸取维生素 B12 注射液0.5 ml 于10 ml 容量瓶中,用水稀释至刻度摇匀,得到待测样品溶液(按标示含量稀释成25g/ml 的溶液)。2. 吸收光谱的绘制与注射液的鉴别取对照品溶液进行光谱扫描(250 600 nm),得到维生素B12 的吸收曲线,寻找吸收峰,扫描后可得到在278nm,361 nm 和550 nm 波长处出现的3 个吸收峰,然后在以上3 个吸收峰处测量维生素B12 注射液的吸光度,并计算A361/A278 和A361/A550 的比值。3. 维生素B12 的定量测定根据吸收曲线选择最大吸收波长(在 361 nm 或附近)作为测量波长,测量维生素B12【注意事项】1. 注意石英比色皿的操作使用;2. 使用5 联池时要注意比色皿在样品池中的位置,不可混淆;3. 测定时不要打开仪器的样品池盖。【数据记录】WLABS550.50.142550.00.141361.00.450278.00.248277.50.249【数据处理】 1、定性分析E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm277.5nm)=A(361.0nm)/A(277.5nm)=1.81E(1%1cm361.0nm)/E(1%1cm550.5nm)=A(361.0nm)/A(550.5nm)=3.172、定量分析因为,A(361nm)=E(1%1cm)cl,g/100ml=106g/100ml=104g/ml所以,cB12=A(361nm)/E(1%cm)l=A(361nm)/207*104=0.450/207*104=21.74g/ml VitB12(%)=(cB12*n)/(500g/ml)*100%=(21.74*20)/500*100%=87.0%(n为稀释倍数)【思考题】1 采用吸光系数法直接测定样品含量有何要求?2利用其他组同学的实验结果,比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同,试作解释。利用邻组同学的实验结果,比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度有无不同,试作解释。答:不同仪器得到的吸收曲线形状基本一致,能反映出同一物质的基本特征,但吸收曲线的吸光度和吸收峰位置波长略有差异。这是因为不同的仪器由于其性能的差异,导致吸光度和波长等参数不同,因此必须对仪器进行定期的校正。3比较用吸光系数和校正曲线定量方法,你认为哪种方法好?为什么?吸光系数法可根据测量得到的吸光度直接计算浓度,简便易行,但仪器性能差异会导致结果误差较大,因此必须对仪器的吸光度和波长进行校正后方能采用此法,且浓度要在复合Beer定律的线性范围内。校正曲线法是配制一系列标准溶液作为基础进行测量,即使有偏离Beer定律线性关系,也可以应用于测定。因为是在相同条件下测量,有标准溶液的校正,可抵消仪器性能、操作等所带来的系统误差,与前一种方法相比,虽然操作步骤要繁琐些,但准确、可靠,是测定最常用的方法。
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