货号：MS1500规格： 100 管/96 样超氧化物歧化酶试剂盒说明书微量法 正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义：SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子 发生岐化作用，生成HO和0。S0D不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是HO主要生成酶，在2 2 2 2 2 生物抗氧化系统中具有重要作用。测定原理：通过黄嘌吟及黄嘌吟氧化酶反应系统产生超氧阴离子（02-.），02-.可还原氮蓝四唑生成蓝 色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除02-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深， 说明 SOD 活性愈低，反之活性越高。自备实验用品及仪器： 分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色/96 孔板、研钵、冰和 蒸馏水产品内容：提取液：lOOmLX 1瓶，4C保存。试剂一：5 mLX 1瓶，4C保存；试剂二：粉剂XI瓶，4C保存，用时加12mL双蒸水，充分混匀，现配现用。试剂三：液体2001X1支，4C保存； 试剂四：液体4mLX1 瓶，4C保存；操作步骤：一、样品的前处理：（1） 细菌、细胞或组织样品的制备：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液, 超声波破碎（功率20%或200w。超声3秒，间隔10秒。重复30次） 8000g4C离心10分钟， 取上清，置冰上待测。称取约0. 1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4C离心10分钟，取上清，置 冰上待测。（2） 血清（浆） 样品：直接检测二、测定操作表：测定管对照管试剂一（卩L）4545试剂二（卩L）100100试剂三（卩L）22样品（L）18试剂四（U L）3535双蒸水（U L）18充分混匀，室温静置30min后，560nm处测定各管吸光值A。注意事项：1，测定前将试剂一、二和四室温放置，使试剂的温度不低于室温后再测定。2，试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。3，对照管只需要做一管。SOD 活性计算：1、抑制百分率的计算抑制百分率=（A对照管一A测定管）-FA对照管X 100%尽量使样品的抑制百分率在 30-70%范围内。如果计算出来的抑制百分率小于 30% 或大于 70% ，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样 品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。2、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50% 时，反应体 系中的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。3、SOD 酶活性计算：（1）血清（浆）SOD活性（U/ml）二抑制百分率F（ 1抑制百分率）XV反总FV样X 样本稀释倍数=11.11X抑制百分率F（ 1 抑制百分率）X样本稀释倍数（ 2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：a,按样本蛋白浓度计算SOD活性（U/mg prot）二抑制百分率F （ 1抑制百分率）XV反总F （V样XCpr） X样 本稀释倍数=11.11X抑制百分率F（ 1 抑制百分率）FCprX样本稀释倍数。b按样本鲜重计算SOD活性（U/g鲜重）二抑制百分率F（ 1 抑制百分率）XV反总F（wxV样FV样总）X样本稀释倍数=11.11X抑制百分率F（ 1 抑制百分率）FWX样本稀释倍数。c,按细菌或细胞个数计算SOD活力（U/104cell）二抑制百分率F（ 1抑制百分率）XV反总F（500XV样FV样 总）X样本稀释倍数=0.022X抑制百分率F （ 1 抑制百分率）X样本稀释倍数。V 反总：反应总体积, 0.2ml；V 样：加入反应体系中的样品体积, 0.018ml；V 样总：加 入提取液体积1ml； Cpr:蛋白样本浓度，mg/ml; W:样本质量，g； 500:细胞或细菌总数， 500 万。