软琼脂集落形成实验/fI1/V集团标准化办公室：VV986T-J682P28-JP266L8-6、目的：确定已转化肿瘤细胞的性质并对其进行定量。二、原理：肿瘤细胞能无限繁殖形成细胞集落，而成熟分化的细胞 则不能形成集落。CHO-EGFP和CH0-ECRT39/272细胞在体外无需加 刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落，其他细胞则丧失了软琼 脂中形成集落的能力。三、操作 1收集对数生长期的细胞（如何鉴定），先测定细胞活力并进行活 细胞计数，然后调整细胞浓度，用含20%FBS的DMEM制成1000活细 胞/ml的细胞悬液。2用蒸馏水制备 1.2%、0.7%两个浓度的低熔点琼脂糖，高压灭菌后，维持在40C不会凝固；31.2%琼脂糖和 2xDMEM 等体积混合，6 孔板中加入 1.4ml，RT 凝固作为底层琼脂，置 CO2 温箱中备用；40.7%琼脂糖和 2xDMEM 等体积混合，再加入细胞悬液充分混 匀，RT凝固作为上层琼脂，勿有气泡，将实验组和对照组分两组加 好，盖上盖并作好标记。在室温放置20 分钟使细胞琼脂悬液凝固。 以上各步骤均在无菌条件下进行。5. 然后移培养板或平皿于CO2培养箱中37C进行培养。26. 培养710天，肉眼观察并计数细胞集落。四、结果：以肉眼可见的细胞团（含 500 个以上细胞）作为计数集落 的标准。集落的计数和计算：集落数二n孔中细胞集落数总和/n孑L,集落形成率二集落数/接种培养细胞总数X100%