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实验步骤以洋葱为实验材料:1、称取 30 克已切碎的洋葱,放入研钵中,加入少量石英砂助研,倒入 10mL 2mol/L 的氯化钠溶液,充分研磨。洋葱含有挥发性刺激物,有效减少刺激,才能使实验顺利进行。上课前,教师可先将洋 葱放入冰箱冷冻一会儿,使其凉透但又不能结冰;或将洋葱切成几大块,放入清水泡一会儿, 让其挥发性刺激物溶于水,可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱 细胞破裂,使 DNA 溶于 2mol/L 的氯化钠溶液,没必要将洋葱研成粥糊状,后者既浪费时 间又影响实验效果。研磨时,切忌使用搅拌器(榨汁机)。使用搅拌器虽可以提高研磨效率, 但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒,无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤 液中,许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来,DNA藏在其中,无法分辨。学生看不到白色纤 维状粘稠物的 DNA。2、研磨后,用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中,得到滤液。3、向滤液中加入95%的酒精溶液20mL,沿烧杯壁缓缓倒入,不要震动或搅拌。此时,烧杯中的液体分为上、下两层,下层较浑浊,上层澄清,很快上层溶液中就会有 白色纤维状粘稠物析出,用玻璃棒可将其轻轻卷起。实例: 用鸡血细胞液粗提取 DNA 并鉴定步骤1、提取鸡血细将制备好的鸡血细胞液(已在课前配好)510mL,注入到50ml烧杯中。 向烧杯中加入蒸馏水 20mL, 同时用玻璃棒沿一个方向快速搅拌 5min, 然后, 用放有纱 布的漏斗将血细胞过滤至 1000mL 的烧杯中, 取其滤液。 图示 胞的细胞核物质2、溶解细胞核内的DNA将物质的量浓度为2mol/ L的NaCl溶液40 mL加入到滤 液中,并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min,使其混合均匀,这时DNA在溶液中呈溶解状 态。3、析出含 DNA 的粘稠物 沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水, 同时用玻璃棒沿一个方向不 停地轻轻搅拌, 这时烧杯中有丝状物出现。 继续加入蒸馏水, 溶液中出现的黏稠物会越 来越多。 当黏稠物不再增加时停止加入蒸馏水。4、滤取含DNA的粘稠物用放多层纱布的漏斗,过滤溶液至1000 mL的烧杯中。取 纱布上的黏稠物。5、将 DNA 的粘稠物再溶解 取一个 50 mL 烧杯, 向烧杯内注入物质的量浓度为 2mol/ L的NaCl溶液20 mL。用钝头镊子将纱布上的黏稠物夹至NaCl溶液中,用玻璃 棒沿一个方向不停地搅拌 3min, 使黏稠物尽可能多地溶解于溶液中。6、过滤含DNA的氯化钠溶液取一个100 mL烧杯,用放有两层纱布的漏斗过滤以 上溶液。取其滤液(DNA溶于滤液中)。7、提取含杂质较少的DNA在上述滤过的溶液中,加入冷却的、体积分数为95%的酒 精溶液50 mL(加入时动作要慢),并用玻璃棒沿一个方向搅拌,溶液中会出现含杂质较少 的丝状物。当玻璃棒上出现丝状物缠绕时,继续慢慢搅拌,至不再增加时,用玻璃棒将 丝状物卷起,并用滤纸吸取上面的水分。取两支20 mL的试管,各加入物质的量浓度 为0.015mol/ L的NaCl溶液5mL,将丝状物放入其中一支试管中,用玻璃棒搅拌,使 丝状物溶解。然后,向两支试管中各加入4 mL的二苯胺试剂。混合均匀后,将试管置 于沸水中加热5min,等试管冷却后,观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。
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