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抗IL-14R单抗在SLE患者中对IL-14R的表达及其Ig分泌的影响抗IL-14R单抗在SLE患者中对IL-14R的表达及其Ig分泌的影响2010-02-22 马安伦余奇文张冬青王树军葛海良顾越英 【摘要】目的探索IL-14R与SLE病程的相关性。方法应用抗IL-14R单抗(BA5)分析了30例正常人和43例SLE患者外周血淋巴细胞表面IL-14R的分布与表达。结果发现SLE患者外周血IL-14R阳性细胞百分比(22.56%)明显高于正常人(7.84%)。在活动期和缓解期SLE患者中,IL-14R表达百分比也具有显著的差异(32.02%和13.09%)。结论提示BA5单抗能拮抗B细胞激活后IL-14R的高表达和IgG的分泌。并可能以BA5单抗阻断和调节IL-14R的表达等方面调节B细胞功能的异常,从而为临床提供新的免疫治疗和检测手段。 【关键词】白细胞介素14抗IL-14R单克隆抗体红斑狼疮,系统性 Effect of IL-14 receptor monoclonal antibody on IL-14R expression and Ig secretion in SLE patientsMA Anlun,YU Qiwen,ZHANG Dongqing,et al.Shanghai Second University,Shanghai 200025 【Abstract】ObjectiveTo explore the IL-14R expression in peripheral blood of SLE patients and to analyse the relationship between IL-14R and course of disease.MethodsIL-14R-positive subset in PBMCs of 30 healthy subjects and 43 SLE patients was determined by flow cytometry with BA5,an mAb anti-IL-14.ResultsSignificant difference of the percentage of IL-14R-positive cells was detected not only between SLE patients (22.56%) and healthy subjects (7.84%),but also between the patients in active (32.02%) and in remission periods (13.09%). Moreover,an IL-14-containing supernant of mixed lymphocyte culture (MLRS) in the experiment to induce a more intensive proliteration and a higher expression of IL-14R in the SAC-stimulated B cells and PBMCs for both patients and healthy subjects.The mAb BA5,however,was capable of blocking the MLRSeffect,resulting in a derease of B cellsrelative response from 100% to 40.18% and 44.70% for healthy subjects and patients,respectively.ConclusionThese results show a promise for immunoprevention with mAb BA5 for control of the autoimmune diseases. 【Key words】Interleukin-14mAb anti IL-14 receptorLupus erythematosus,systemic 本文应用抗IL-14R的单抗,分析正常人群和SLE患者外周血中IL-14R的表达状态,同时利用免疫荧光和ELISA技术检测经细胞激活剂刺激后用IL-14R单抗的阻断效应,并分析其IL-14R表达和Ig分泌状况,以便探索IL-14R与SLE病程的相关性,以建立与SLE密切相关的实验室诊断和病程监控指标。 1资料和方法 1.1研究对象 43例SLE患者皆符合美国风湿病学会1982年修订的诊断标准,根据临床病症分为活动期20例,缓解期23例,30名正常对照组均为健康自愿者。 1.2试剂 葡萄球菌COWAN I蛋白(SAC)。IL-14R单抗(BA5)。CD98单抗(广泛表达于激活的细胞)以上由美国华盛顿大学Ambrus教授惠赠。CD19单抗(北京军事医学科学院)。Namalva T淋巴瘤细胞培养上清(NTLS)。ELISA-Ig测定盒(上海第二医科大学)。AET-SRBC(溴化二氨基硫氢化物处理的羊红细胞)。 1.3方法 1.3.1免疫荧光流式细胞仪检测:外周血经淋巴细胞分离液分离得PBMC,分别加入BA5、CD19、CD98单抗,冰浴30分钟,经三次洗涤后,加入FITC标记的兔抗鼠二抗,冰浴30分钟,三次洗涤后,经FACS测定,计5 000只淋巴细胞,以阳性细胞百分率估计上述IL-14R、CD19和CD98的表达量。 1.3.2细胞亚群分离:加入一定量AET-SRBC的PBMC,37 温育15分钟后,4 过夜,然后通过淋巴细胞分离液分离,分别获取T、B细胞,经CD3、CD19单抗荧光鉴定,T细胞纯度95%,而B细胞纯度80%。 1.3.3PBMC的体外诱导和增殖:用SAC激活B细胞,共同培养48小时后,1640营养液洗涤,接种于96孔培养板中,分别加入NTLC、BA5和NTLCBA5。继续培养7天,然后分别收集细胞及细胞培养上清。 1.3.4细胞培养上清中IgG分泌的检测(ELISA检测法)。 2结果 2.1SLE患者中IL-14R与B细胞相关标志的FACS测定:表1是用流式细胞仪对正常人和SLE患者外周血PBMC中IL-14R、CD19和CD98阳性的细胞的分析,结果表明IL-14R阳性细胞在SLE患者中的百分比为22.56%,明显高于正常人(7.84%,P0.001),而且该百分比在活动期和稳定期SLE中也有显著性的差异,分别为32.03%和13.09%。提示SLE病程中IL-14受体阳性细胞的数量与病情的转归有关。同时表明,CD98在SLE活动期与缓解期阳性率也显著增高,但两者之间无明显差异。 表1IL-14R、CD19和CD98(阴性细胞百分率)与SLE疾病的关联(s) 正常人 SLE n30 总和%n43 活动期%n20 缓解期%n23 IL-14R 7.844.41 22.5617.561) 32.0317.26 13.0912.091) CD19 21.138.18 27.498.202) 29.218.97 24.906.452) CD98 8.817.85 42.3627.041) 40.5630.74 43.5625.642) 注:1)正常人与SLE总和比较;SLE活动期与缓解期比较P0.001 2)正常人与SLE总和比较;SLE活动期与缓解期比较P0.05 2.2单抗BA5对正常人和SLE患者淋巴细胞增殖后IL-14R的表达影响:见图1,正常人和SLE患者外周血B细胞亚群经SAC激活后,NTLS具有进一步诱导正常人和SLE患者B细胞IL-14R表达的作用(42.26%和38.18%),然而这种表达能被单抗BA5所抑制。这一结果提示单抗BA5能竞争抑制NTLS对IL-14R的诱导作用。 2.3对SAC激活的PBMC经BA5、NTLS及BA5NTLS调节后的IgG分泌的影响:见图2在加入不同调节剂的四组中(A,B,C和D组),正常人的B细胞IgG分泌量均无明显差异;在SLE患者中活动期和缓解期的B细胞IgG分泌量(B,C,D组)均高于对照组(A)组;当加入NTLS后,SLE病人的IgG分泌量下降并低于对照组;而这种下降又由于BA5单抗的加入而得以回升。 图1SAC激活的B细胞及各种调节剂图2单抗BA5对SAC激活的B细胞
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