作业52微生物的培养和利用123456789 10 11A组基础达标1.下列有关生物技术实践实验中灭菌方法的叙述,错误的是()A.用高压蒸汽灭菌法对涂布器进行灭菌B.尿素培养基用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌即可C.含葡萄糖的培养基须在500g/cm2压力下灭菌30minD.接种环在使用的过程中常通过灼烧灭菌B解析应采用已在121下高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对尿素进行过滤除菌,再将尿素添加到已灭菌的培养基中,B项错误。123456789 10 11(2023浙江金华十校模拟)阅读下面材料,回答第2、3题。某技术人员设计了青霉素生产菌产黄青霉菌的诱变育种方案,具体包括:配制中性偏酸的培养基,准备相关的培养皿、稀释用水;进行菌种的紫外线诱变;用接种环蘸取诱变后的产黄青霉菌孢子悬液在固体培养基上划线;放在恒温培养箱中培养到长出单菌落;挑取单菌落,接种至均匀分布野生型金黄色葡萄球菌(以葡萄糖为主要碳源)的培养基上进行生产青霉素性能的测定。123456789 10 112.下列对该方案的叙述,正确的是()A.中应配制中性偏碱的培养基B.中分离菌种应用稀释涂布平板法C.步骤的顺序应该调换D.中应将单菌落接种至含酚红的培养基上B解析霉菌适宜在中性偏酸的环境中成长,A项错误;该方案的目的是诱变出产黄青霉菌高产菌株,所有的诱变后的菌株都需要测定,应用稀释涂布平板法获得全部诱变菌株的单菌落,B项正确;应先对菌种进行诱变,再接种培养纯化,步骤的顺序不能调换,C项错误;该方案是生产青霉素性能的测定,不应接种至含酚红的培养基上,D项错误。123456789 10 113.下列关于该方案中无菌操作的叙述,正确的是()A.中调节pH需在灭菌之后进行B.实验结束时可用紫外线照射的方法对中残余的培养基彻底灭菌C.过程培养基中添加的葡萄糖可用G6玻璃砂漏斗过滤除菌D.青霉素具有杀菌作用,此发酵罐不需严格灭菌C123456789 10 11解析中调节pH时可能会带入杂菌,应在灭菌之前进行,A项错误;紫外线照射只能消毒,杀死部分微生物,不能对中残余的培养基彻底灭菌,B项错误;葡萄糖在115以上会焦化,可采用已在121下高压蒸汽灭菌的、孔径最小的G6玻璃砂漏斗对葡萄糖进行过滤除菌后,再在超净工作台内添加到培养基中,C项正确;青霉素具有杀菌作用,但不能杀死所有的微生物,所以发酵罐需严格灭菌,D项错误。123456789 10 114.(2023浙江湖州教学质量检测)利用以尿素为唯一氮源的培养基,可从土壤中分离出能产脲酶的微生物。下列叙述错误的是()A.需用无菌水制备和稀释土壤菌悬液B.培养基中加入酚红可起到鉴别作用C.尿素溶液用G6玻璃砂漏斗过滤除菌D.能在该培养基上生长的微生物均能产生脲酶D123456789 10 11解析需用无菌水制备和稀释土壤菌悬液,避免杂菌污染,A项正确;由于尿素被分解后产生氨会使培养基的pH升高,因此培养基中加入酚红可起到鉴别作用,会显红色,B项正确;尿素溶液需用到高压蒸汽灭菌的G6玻璃砂漏斗过滤,用其过滤的原因是其孔径小、细菌不能通过,便于除菌,C项正确;能在该培养基上生长的微生物不一定能产生脲酶,比如能够利用空气中的氮气作为氮源的微生物也可以在上面生长,D项错误。123456789 10 115.为了调查湖水中细菌的污染情况,某小组同学进行了相关实验,其中包括制备培养基、灭菌、接种、培养及菌落观察计数。下列叙述错误的是()A.LB培养基中的蛋白胨可为细菌提供碳源和氮源B.配制好的培养基,分装到锥形瓶,放入高压灭菌锅灭菌C.培养接种无菌水的平板作为对照,可检验培养基的灭菌是否合格D.若实验组平板上出现形态和颜色不同的菌落,说明湖水遭受严重污染D123456789 10 11解析LB培养基中的蛋白胨来源于动、植物蛋白,含有糖类、维生素和有机氮化合物等营养物质,可为细菌提供碳源和氮源,A项正确;配制好的培养基,应分装到锥形瓶,塞好棉塞,用牛皮纸将瓶口包裹好,放入高压灭菌锅灭菌,B项正确;培养接种无菌水的平板作为对照,可检验培养基灭菌是否合格,C项正确;若实验组平板上出现形态和颜色不同的菌落,说明湖水中含有多种微生物,并不能说明湖水遭受严重污染,D项错误。123456789 10 116.(2024浙江柯桥适应性考试)在生产、生活和科研实践中,经常通过无菌操作技术避免杂菌的污染。下列有关无菌操作技术的叙述,错误的是()A.当超净工作台处于紫外灯和过滤风打开状态时,人必须离开B.高压蒸汽灭菌时,只要压力达到设定要求锅内就可达到相应温度C.密闭空间内可采用紫外线照射消毒,在照射前可喷洒消毒液D.用乙醇和次氯酸钠处理过的外植体需经无菌水清洗后才可用于组织培养B123456789 10 11解析当超净工作台处于紫外灯和过滤风打开状态时,人必须离开,以免造成伤害,A项正确。使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌时,需要将灭菌锅内的冷空气排尽后,才能关闭排气阀,以保证锅中的高压只来自水蒸气,从而能随着加热的进行将压力达到设定要求;若未将锅内冷空气排尽,则会出现锅内压力达到要求,而温度并没有达到相应要求的现象,B项错误。紫外线能破坏DNA结构,照射前适量喷洒消毒液,可强化消毒效果,C项正确。用乙醇和次氯酸钠处理过的外植体需经无菌水多次冲洗后才可用于组织培养,D项正确。123456789 10 117.(2023浙江杭州第二次联考)在某病原菌均匀分布的平板上,铺设含有不同种抗生素的圆形纸片,用纸片扩散法测定某病原菌对各种抗生素的敏感性,图示为培养的结果(其中抑菌圈是在纸片周围出现的透明区域)。下列分析错误的是()A.有些未形成抑菌圈可能是该病原菌对该抗生素很敏感B.有些抑菌圈很小可能与该抗生素扩散速度太慢有关C.若抑菌圈内出现一个菌落,则该菌落可能由抗药性变异菌体形成D.从抑菌圈边缘挑取病原菌继续培养,连续选择几代后抑菌圈的直径会变小A123456789 10 11解析未出现抑菌圈的可能原因是该病原菌对该抗生素不敏感,A项错误;不同的抑菌药物的抑菌圈直径,因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同,故抗生素在平板上的扩散速度太慢可能会导致抑菌圈很小,B项正确;部分抑菌圈内出现零散细小的菌落,说明这些菌落对该抗生素具有抗性,可能是菌株出现了抗药性突变,C项正确;从抑菌圈边缘的菌落上挑取病原菌继续培养,连续选择几代后,菌体对抗生素的抗性越来越强,因而抑菌圈会变小,D项正确。123456789 10 118.血细胞计数板是酵母菌计数的常用工具,如图表示一个计数室及显微镜下一个中方格菌体分布情况。B组素能培优123456789 10 11下列有关叙述错误的是()A.每次选取计数室四个角和中央的五个中格计数,目的是减小误差B.需要先盖盖玻片再滴加样液,等酵母菌全部沉降后方可计数C.每天的取样时间可任意选择,但取样前要摇匀培养液,目的是使酵母菌均匀分布,减小误差D.若五个中格酵母菌平均数为上图所示,则估算酵母菌的总数为6106个/mLC123456789 10 11解析每次选取计数室四个角和中央的五个中格计数,目的是取样计数并求平均值,以减小误差,A项正确;制片时,应先将盖玻片盖上,再将培养液滴在计数板的一侧,等酵母菌全部沉降后方可计数,B项正确;每天计数酵母菌数量的时间要固定,防止由于取样时间不同造成实验误差,C项错误;在计数时,计数原则为“计上不计下,计左不计右”,题图所示的中方格中酵母菌数量为24个,则1mL培养液中酵母菌的总数为2416400104=6106(个),D项正确。123456789 10 119.(2022浙江6月选考节选)回答与产淀粉酶的枯草杆菌育种有关的问题。(1)为快速分离产淀粉酶的枯草杆菌,可将土样用制成悬液,再将含有悬液的三角瓶置于80的中保温一段时间,其目的是。(2)为提高筛选效率,可将菌种的过程与菌种的产酶性能测定一起进行:将上述悬液稀释后涂布于以淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养,采用显色方法,根据透明圈与菌落直径比值的大小,可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。(3)为了获得高产淀粉酶的枯草杆菌,可利用现有菌种,通过后再筛选获得,或利用转基因、等技术获得。无菌水水浴杀死不耐热微生物分离KI-I2人工诱变原生质体融合123456789 10 11解析(1)分离产淀粉酶的枯草杆菌时,需用液体培养基扩大培养,可将土样用无菌水制成悬液,在80的水浴中保温一段时间,其目的是杀死不耐热微生物。(2)为提高筛选效率,可将菌种的分离过程与菌种的产酶性能测定一起进行:将上述悬液稀释后涂布于以淀粉为唯一碳源的固体培养基上培养,采用KI-I2显色方法,根据透明圈与菌落直径比值的大小,可粗略估计出菌株是否产酶及产酶性能。(3)利用现有菌种,通过人工诱变后再筛选,或利用转基因、原生质体融合等技术均可获得高产淀粉酶的枯草杆菌。123456789 10 1110.(2023浙江精诚联盟一模)为了探究微生物在不同条件下的繁殖速度,微生物的计数是发酵工程中不可或缺的环节。回答下列问题。(1)测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用稀释涂布平板法和显微镜计数法,前者往往无法进行动物细胞数量的测定,原因是;显微镜计数法计数结果一般比稀释涂布平板法大,可能的原因是。显微镜计数中包含死亡菌体;稀释涂布平板时当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落;涂布操作可能会造成细胞死亡;涂布器可能带走小部分菌体动物细胞无法在固体平板培养基中正常生长123456789 10 11(2)在用显微镜进行酵母菌细胞计数时,必须将菌液,然后应(盖专用盖玻片;滴加酵母菌悬液。按操作的先后顺序填写序号),已知血细胞计数板规格为1mm1mm0.1mm,在培养后期对培养液稀释100倍后,用显微镜观察到其中某方格中酵母菌的分布情况如图,若最终几个样方中平均数与其相同,则培养液中酵母菌的密度为个/mL。摇匀6108123456789 10 11(3)稀释涂布平板时,若平板中菌落数过少,随机误差增大。要解决这个问题可以从两方面入手:一是在保证能准确计数的前提下降低稀释度;二是将相同稀释度下的多组数值取平均值后再进行计算。除用于计数,稀释涂布平板法还能实现对目标微生物的。分离和纯化123456789 10 11解析(1)由于动物细胞无法在固体平板培养基中正常生长,故采用稀释涂布平板法无法进行动物细胞数量的测定。显微镜计数法计数结果一般比稀释涂布平板法大,因为显微镜计数中包含死亡菌体,稀释涂布平板时当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到的只是一个菌落,涂布操作可能会造成细胞死亡,涂布器可能带走小部分菌体。(2)在用显微镜进行酵母菌细胞计数时,必须将菌液摇匀,然后盖专用盖玻片,再滴加酵母菌悬液。据题意可知,该血球计数板的规格为1mm1mm0.1mm、2516,即一个大方格含有25个中方格,据图可知,一个中方格酵母菌数量为24个,因此一个大方格酵母菌数量为2425=600(个),一个大方格内的细胞悬液体积是10-4mL,培养液稀释倍数为100倍,因此培养液中酵母菌的密度为600104102=6108(个/mL)。(3)除用于计数,稀释涂布平板法还能实现对目标微生物的分离和纯化。123456789 10 1111.(2024浙南联盟模拟)苹果树腐烂病由真菌感染引起,为了寻找该病的生物防治途径,研究者拟从土壤中分离筛选出能抑制苹果树腐烂病菌生长的芽孢杆菌,实验流程如下图。请回答下列问题。123456789 10 11(1)配制培养基时,培养基的灭菌应该在倒平板(填“之前”或“之后”)。(2)图中过程取5g土壤加入45mL无菌水中充分振荡得到10-1的土壤稀释液,进行系列稀释后,用法接种到培养基上。在接种过程中,下列选项无须用到的是(填序号)。酒精灯涂布器显微镜接种环移液器之前稀释涂布平板123456789 10 11(3)接种后在37条件下培养24h,根据菌落特征鉴别出芽孢杆菌并进一步纯化。目的菌筛选时,应将芽孢杆菌接种于(填“A”或“B”)处,培养35天,筛选出抑菌率最高的菌株。(4)与化学防治