附件2 广西食品安全地方标准食品中钩吻碱和钩吻碱子的测定（征求意见稿） 编制说明目录一、工作简况3（一）任务来源与合同编号、起草单位、主要起草人3（二）简要起草过程4二、与我国、我区有关法律法规和其他标准情况的关系4三、标准制定必要性、目的及意义情况说明5四、标准的制订原则5五、各项技术内容的验证及说明61 目标化合物的物理和化学性质61.1 钩吻碱和钩吻碱子的理化性质61.2 钩吻碱和钩吻碱子的应用61.3 钩吻碱和钩吻碱子的毒理作用72 标准溶液的配制及有效期验证82.1 标准品信息82.2 标准溶液的配制82.3 标准溶液有效期验证83本标准的检测范围及本方法检测原理的说明93.1 检测范围93.2 方法检测原理94 高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法（方法一）104.1 质谱测定条件104.2 液相测定条件124.3 前处理方法优化144.4 精密度试验154.5 基质效应考察164.6 标准曲线174.7 重复性试验184.8 回收率试验194.9 检测方法的检出限、定量限205 气相色谱-串联质法（方法二）205.1 质谱测定条件205.2 气相测定条件215.3 前处理方法优化225.4 精密度试验235.5 基质效应考察235.6 标准曲线245.7 重复性试验255.8 回收率试验275.9 检测方法的检出限、定量限276 高效液相色谱-串联高分辨质谱法（方法三）286.1 质谱测定条件286.2 液相测定条件296.3 前处理方法316.4 检测方法的灵敏度和专属性31一、工作简况（一）任务来源与合同编号、起草单位、主要起草人本检测方法标准的制订工作，是受广西壮族自治区卫生健康委员会委托，由梧州市食品药品检验所负责研制，合同编号为桂地标食2019005。标准主要起草单位为梧州市食品药品检验所。主要起草人为：罗达龙、陈学松、刘慧妍、黄蘅、叶小强、赖秀梅、王华、陈翠玲、姚泳成、钟家良，详见表1。表1 参加标准项目人员情况研制人员姓名性别年龄职称职务研究方向单位投入时间项目负责人罗达龙男36副主任药师业务科主任兼科研管科主任食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程主要参加人员陈学松男46主任药师所长食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程刘慧妍女37副主任药师食品室主任食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程黄蘅女47副主任药师副所长食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程叶小强男56副主任药师副所长食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程赖秀梅女37主管药师药品室主任食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程王华男26主管药师检验员食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程陈翠玲女32中药师检验员食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程姚泳成男28药师检验员食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程钟家良男25药师检验员食品药品检验梧州市食品药品检验所整个研究过程（二）简要起草过程梧州市食品药品检验所接受制订任务后，成立由实验室专业技术人员组成的研制小组，全面负责标准的研制计划和工作安排。主要成员由正高1人，副高4人，中级职称2人，初级职称3人，共10人组成。制订本标准主要依据中华人民共和国标准化法，GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写、GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测等标准或规范。制标小组为做好标准的制定工作，广泛收集国内外有关的检测技术资料、检测标准、限量指标，以及相关的法律、法规，召开了有关座谈会，听取各方建议。在研制过程中，遵循科学性、实用性和前瞻性等原则，尊重客观规律，融合科学理论和标准化方法。考虑到我国食品卫生标准分析方法应逐步与国际接轨，以及分析方法应有较强的可操作性的要求，确定了标准制定的关键环节，对本项目作了以下主要制订：（1）确定了检测项目为食品中钩吻碱和钩吻碱子的测定；（2）制定了检测方法为方法一：高效液相色谱-三重四极杆串联质谱法、方法二：气相色谱-串联质谱法、方法三：高效液相色谱-串联高分辨质谱法；（3）规定了检测对象为蜂蜜、酒类及疑似钩吻中毒的食品中钩吻碱和钩吻碱子的测定，其它基质食品可参照执行。二、 与我国、我区有关法律法规和其他标准情况的关系新制地方标准与相关法律、法规及相关标准协调一致，没有冲突。第一， 新制地方标准的检测项目为食品中钩吻碱和钩吻碱子，国内对于食品中钩吻碱类生物碱中毒的应急检测仍未有相关的技术标准和检测方法。第二， 新制地方标准的检测范围较宽。新制地方标准检测对象为蜂蜜、酒类及疑似钩吻中毒的食品中钩吻碱和钩吻碱子的测定，其它基质食品可参照执行。第三，新制地方标准的灵敏度、准确度和精密度较优。新制地方标准的灵敏度、准确度和精密度等相关指标满足国家标准GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测中的规定。第四，新制地方标准采用固相萃取净化方法，运用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱或气相色谱-串联质谱对食品中钩吻碱和钩吻碱子进行定性和定量测定，用高效液相色谱-串联高分辨质谱对食品中钩吻碱和钩吻碱子进行筛查和定性确证。 三、标准制定必要性、目的及意义情况说明钩吻碱类生物碱主要存在于马钱科植物胡蔓藤Gelsemium elegans(Gardn.et Champ.)Benth.中，习称断肠草，民间有用药史，一般用于跌打损伤，骨折，皮肤湿疹等，因其有大毒，一般外用，误服能致命。2015-2016 年梧州地区共发生2 起因误食钩吻（断肠草）引起的生物碱中毒事件，造成6人中毒1人死亡。查阅文献，报道国内广东茂名市公安局早期曾发表过钩吻碱中毒40例尸检分析的文章，文章称其中利用钩吻投毒致死15人、服钩吻自杀20人、为治病服药5人，由此可见因误食钩吻导致中毒或死亡的案例时有发生。梧州市食品药品检验所作为梧州市食品安全委员会办公室成员中唯一应急检验单位，近四年参与的辖区内应急检验，确证两例共29批样品含钩吻成分，应急处理中发现国标和地标均未有相关的食品钩吻中毒的检测标准，故很有必要在食品中毒领域上找到可行、规范、准确的质量检测技术，为食品中毒钩吻的应急处理提供一个依据和对中毒物质的定性定量做出准确的判断，由于钩吻中含有特征性成分钩吻碱和钩吻碱子，故本研究对食品中钩吻碱和钩吻碱子运用高效液相色谱-三重四极杆串联质谱或气相色谱-串联质谱对食品中钩吻碱和钩吻碱子进行定性和定量测定，并以高效液相色谱-串联高分辨质谱对疑似钩吻中毒的样品进行筛查和定性确证。建立检测法，制定明确标准，为中毒分析检验提供法定依据，为人员抢救抢占时间。为医院的后续治疗处理或中毒物质分析提供有效准确的数据支持。四、标准的制订原则本标准的制定和起草工作遵循统一性、协调性、适用性、一致性和规范性。第一，本标准为现有检测食品中钩吻碱和钩吻碱子的唯一标准。第二，方法确认和验证严谨、全面，适用性强。本标准选择了蜂蜜、酒、保健汤（保健汤为误用钩吻作为原材料加水煮熟后的汁液）作为试样进行方法确认，覆盖钩吻中毒事件中常见的食品。第三，标准按照国家标准GB/T 27404-2008实验室质量控制规范 食品理化检测中的规定，要求进行制定，具有一致性和规范性。五、各项技术内容的验证及说明1 目标化合物的物理和化学性质1.1 钩吻碱和钩吻碱子的理化性质 钩吻碱和钩吻碱子详见表1-1表1-1钩吻碱和钩吻碱子的理化性质名称钩吻碱钩吻碱子 别称钩吻素甲钩吻素子英文名称GelsemineKoumine密度1.33 g/cm31.330.1 g/cm3沸点493.4C at 760 mmHg493.4C at 760 mmHg熔点178C181-183C分子式C20H22N2O2C20H22N2O分子量322.4306.4CAS号509-15-91358-76-5精确分子量322.1681306.1732储存条件应放有毒有害保险箱常温保存应放有毒有害保险箱常温保存分子结构式1.2钩吻碱和钩吻碱子的应用1.2.1钩吻碱应用文献记载钩吻碱是治疗部分坐骨神经结扎（PSNL）小鼠的神经性疼痛和睡眠障碍的有效药物。钩吻碱（4 mg / kg）对PSNL诱导的机械异常性疼痛和热痛觉过敏产生镇痛作用。在PSNL小鼠中，钩吻碱（4mg / kg）使机械阈值增加4小时并延长热潜伏期3小时。此外，钩吻碱能增加非快速眼动（非REM，NREM）睡眠，减少觉醒，但在前3小时内不影响快速眼动（REM）睡眠在PSNL小鼠。免疫组织化学研究表明，PSNL可增加前扣带皮层神经元中c-Fos的表达，而钩吻碱（4 mg / kg）可使c-Fos表达降低58。具有兴奋中枢神经作用，由于毒性很大，很少作药用。1.2.2钩吻碱子应用 钩吻碱子是从钩吻中得到的生物碱，具有高效抗肿瘤活性，在肿瘤细胞中能够增加Bax/Bcl-2 的蛋白比例和 caspase-3 的表达。钩吻碱子具有抗焦虑、抗应激、抗银屑病和镇痛活性。在类风湿性关节炎动物模型中，钩吻碱子能够预防关节炎的发展。1.3钩吻碱和钩吻碱子的毒理作用1.3.1钩吻碱主要抑制延脑的呼吸中枢，引起呼吸中枢麻痹，呼吸衰竭而死亡，同时作用于迷走神经和心肌，引起血液循环障碍，从而加剧了肝、肾等脏器的损害。1.3.2钩吻碱子毒理作用与钩吻碱相似。1.3.3钩吻生物碱的危害钩吻常见于广东、广西、贵州等地区，由于其型与金银花相似，导致民间多见误食钩吻而导致钩吻中毒，中毒患者多见为饮用含钩吻中药材的自酿中药药酒而导致中毒，或误把钩吻当做药用食材用于烹饪方面。钩吻全株都有大毒，根、茎、枝、叶含有8种钩吻生物碱，而当中钩吻碱和钩吻碱子是毒理研究最多的成分，也是钩吻的最具代表性成分。服食钩吻碱过量，即导致消化系统、循环系统和呼吸系统的强烈反应，肠发黑粘连。中毒症状包括流涎、恶心、口渴、吞咽困难、发热、呕吐、口吐白沫、抽搐、四肢麻木、肌肉无力、肌肉纤维颤动、舌硬、言语不清、烦躁不安、心律失常等。1.3.4 钩吻的小鼠半数致死量洪息君、陆文光等在断肠草不同部位毒性的研究中指出用钩吻植物的不同部位以1:10的煎剂来测定小鼠的半数致死量（LD50）植物中各部位的LD50分别为：钩吻根0.0798g /kg，老茎1.309 g/kg，嫩茎1.830 g/kg，叶0.255 g/kg，花0.458 g/kg，果实1.275 g/kg。据相关文献报道钩吻根3g左右或嫩芽7个，或流浸膏3.5mL，或钩吻碱0.150.3g经口摄入可使人致死。钩吻碱摄入量在0.150.3g，人体即有中毒迹象。张永志、何宏源等在钩吻素甲对小鼠的急性毒性实验研究中指出使用钩吻碱灌胃的小鼠30分钟内半数致死浓度为78.23mg/kg，9