资源预览内容
第1页 / 共3页
第2页 / 共3页
第3页 / 共3页
亲,该文档总共3页全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述
实验项目:荧光分光光度法测定维生素B2的含量实验题目】荧光分光光度法测定维生素B2的含量 实验目的】1、掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。2、了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能,掌握其基本操作。实验原理】维生素B2(又叫核黄素,VB2)是橘黄色无臭的针状结晶。其结构式为: 由于分子中有三个芳香环,具有平面刚性结构,因此 它能够发射荧光。维生素b2易溶于水而不溶于乙醚等有机 溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解,对热稳定。维生素B2溶液在430440nm蓝光的照射下,发出绿色 荧光,荧光峰在535nm附近。维生素B2在pH=67的溶 液中荧光强度最大,而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度 呈线性关系,因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。 维生素b2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为 另一物质一一光黄素,光黄素也是一个能发荧光的物质, 其荧光比维生素B2的荧光强得多,故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内,且在 避光条件下进行。在稀溶液中,荧光强度F与物质的浓度c有以下关系:F=2.303Ibc 当实验条件一定时,荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系:F=Kc 这是荧光光语法定量分析的依据。主要仪器与试剂】主要仪器:F-2500 HiTachi荧光分光光度计;1cm石英皿;50mL容量瓶;5mL移液管;烧杯; 胶头滴管试剂:维生素B2标准溶液:未知液4 实验内容及步骤】1、系列标准溶液的制备取维生素 B2标准溶液(10.0ug/mL)1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分别置 于50mL的容量瓶中,各加入去离子水稀释至刻度,摇匀。标记为的一系列维生 素 B2 标准溶液。待测。2、待测液制备取5.00mL未知液4置于50mL容量瓶中,加入去离子水稀释至刻度,摇匀。待测。3、激发光谱和荧光发射光谱的绘制设置入em=540nm为发射波长,在250500nm范围内扫描标准溶液,记录荧光发射强 度和激发波长的关系曲线,便得到激发光谱。从激发光谱图上找出其最大激发波长入ex。在 此激发波长下,在400600nm范围内扫描,记录发射强度与发射波长间的函数关系,便得到 荧光发射光谱。从荧光发射光谱上找出其最大荧光发射波长入em。4、标准溶液及样品的荧光测定将激发波长固定在最大激发波长入ex,荧光发射波长固定在最大荧光发射波长处入em。 扫描蒸馏水和上述5个标准液的荧光发射强度。数据记录于表1中。以溶液的荧光发射强度 为纵坐标,标准溶液浓度为横坐标,制作标准曲线。在同样条件下测定未知溶液的荧光强度,并由标准曲线确定未知试样中维生素B2的浓 度,计算待测样品溶液中的维生素b2的含量。数据记录与结果分析】、维生素B激发光谱图:最大激发波长入ex=373nmidh - Ki 074X4.、维生素b2荧光发射光谱图: am DW Rd剳LFTEMlHaJlOSL EraM EWW VjE1 -flOO烦呛i-iiJ严朗hi 02 441.D0IJQta)aMT1QD最大荧光发射波长处入em=524nm表 1:标准溶液及待测溶液的浓度和荧光强度数据记录维生素B溶液浓度/ (卩0.0000.2000.4000.6000.8001.000g/mL)相对荧光强度0.23424.6548. 0070.5091.86112.9、系列标准溶液浓度与荧光发射强度的标准曲线图:lEIL E.WbIL3 - I *zi 立想 L -0p112 n Soltrtlw - 7-H40 FLm COIJB EJLa JU LIdl3 J1J Ly liJulfr tHJfJTIRTO WgUF“ m.Suh-.幼 IBM1Q254CmcIsjgAjL刊/再 fpt!MKiRR2Z iTlisrdH 幽-O.Cn 53R aEBcHlliasajiaI EQujsJSjJ In Sir町 A E iEhim:iOCtES OKfiie: a DiB a di Kia %.aan :aETC- MRIUu.ttKr.Q!nLr*hi- hl.pLUvl |lMlf由计算机处理得标准曲线方程为 y=112.49x-1.7769 相关系数r= 则待测溶液的浓度c =0.907 u g/mL 问题讨论】1、试解释荧光光度法较吸收光度法灵敏度高的原因? 答:原因是由于现代电子技术具有检测十分微弱光信号的能力,并且荧光强度与激发光强度成正比,提高激发光强度也可以增大荧光强度,使测定的灵敏度提高;而吸收光度法测 定的是吸光度,不管是增大入射光强度,还是提高检测器的灵敏度,都会使透射光信号 与入射光信号以同样的比例增大,吸光度值不会改变,因此灵敏度不能提高。2、维生素B2在pH=67时荧光最强,本实验为何在酸性溶液中测定?答:因为维生素B2在碱性溶液中经光线照射,会发生分解而转化为光黄素,后者的荧光比维生素b2的荧光强的多。因此,测量时溶液要控制在酸性范围内进行。(注:专业文档是经验性极强的领域,无法思考和涵盖全面,素材和资料部分来自网络,供参考。可复制、编制,期待你的好评与关注)
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号