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PCR 设计引物时酶切位点的保护酶寡核苷酸序列切割率2 hr20 hrAcc IGGTCGACC00CGGTCGACCG00CCGGTCGACCGG00Afl IIICACATGTG00CCACATGTGG90190CCCACATGTGGG9090Asc IGGCGCGCC/9090AGGCGCGCCT-J9090TTGGCGCGCCAA9090Ava ICCCCGGGG050190CCCCCGGGGG9090TCCCCCGGGGGA9090BamH ICGGATCCG1025CGGGATCCCG9090CGCGGATCCGCG9090Bgl IICAGATCTG00GAAGATCTTC7590GGAAGATCTTCC2590BssH IIGGCGCGCC00AGGCGCGCCT00TTGGCGCGCCAA5090BstE IIGGGT(A/T)ACCC010BstX IAACTGCAGAACCAATGCATTGG00AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA2550CTGCAGAACCAATGCATTGG ATGCAT2590Cla ICATCGATG00GATCGATC00CCATCGATGG9090CCCATCGATGGG5050EcoR IGGAATTCC9090CGGAATTCCG9090CCGGAATTCCGG9090Hae IIIGGGGCCCC9090AGCGGCCGCT9090TTGCGGCCGCAA9090Hind IIICAAGCTTG00CCAAGCTTGG00CCCAAGCTTGGG1075Kpn IGGGTACCC00GGGGTACCCC90190CGGGGTACCCCG9090Mlu IGACGCGTC,00CGACGCGTCG2550Nco ICCCATGGG巧00CATGCCATGGCATG5075Nde ICCATATGG00CCCATATGGG/00CGCCATATGGCG00GGGTTTCATATGAAACCC00GGAATTCCATATGGAATTCC7590GGGAATTCCATATGGAATTCCC7590Nhe IGGCTAGCC00CGGCTAGCCG1025CTAGCTAGCTAG1050Not I TTGCGGCCGCAA00ATTTGCGGCCGCTTTA1010AAATATGCGGCCGCTATAAA1010ATAAGAATGCGGCCGCTAAACTAT2590AAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA2590Nsi ITGCATGCATGCA1090CCAATGCATTGGTTCTGCAGTT9090Pac ITTAATTAA00GTTAATTAAC025CCTTAATTAAGG090Pme IGEAAAC00GGEAAACC025GGGTTTAAACCC050AGCEGEAAACGGCGCGCCGG7590Pst IGCTGCAGC00TGCACTGCAGTGCA1010AACTGCAGAACCAATGCATTGG9090AAAACTGCAGCCAATGCATTGGAA9090CTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT00Pvu ICCGATCGG00ATCGATCGAT1025TCGCGATCGCGA0 J10Sac ICGAGCTCG1010Sac IIGCCGCGGC/00TCCCCGCGGGGA5090Sal IGTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGC 0 :0GCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGG1050ACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCG1075GAASca IGAGTACTC1025AAAAGTACTTTT7575Sma ICCCGGG r010CCCCGGGG010CCCCCGGGGG1050TCCCCCGGGGGA9090Spe IGACTAGTC1090GGACTAGTCC1090CGGACTAGTCCG050CTAGACTAGTCTAG050Sph IGGCATGCC00CATGCATGCATG025ACATGCATGCATGT1050Stu IAAGGCCTT9090GAAGGCCTTC9090AAAAGGCCTTTT9090Xba ICTCTAGAG00GCTCTAGAGC9090TGCTCTAGAGCA7590CTAGTCTAGACTAG7590Xho ICCTCGAGG00CCCTCGAGGG1025CCGCTCGAGCGG1075Xma ICCCCGGGG00CCCCCGGGGG2575CCCCCCGGGGGG50190TCCCCCCGGGGGGA9090注释:1如果要加在序列的5 端,就在酶切位点识别碱基序列(红色)的5端加 上相应的碱基(黑色),相同如果要在3 端加保护碱基,就在酶切位点识 别碱基序列(红色)的3端加上相应的碱基(黑色)。2切割率:正确识别并酶切的效率3。加保护碱基时最好选用切割率高时加的相应碱基。
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