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资源描述
一 常用贮液与溶液1mol/L亚精胺(Spermidine):溶解2.55g亚精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。1mol/L精胺(Spermine):溶解3.48g精胺于足量的水中,使终体积为10ml。分装成小份贮存于-20C。10mol/L乙酸胺(ammonium acetate):将77.1g乙酸胺溶解于水中,加水定容至1L后,用0.22um孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml牛血清蛋白(BSA):加100mg的牛血清蛋白(组分V或分子生物学试剂级,无DNA酶)于9.5ml水中(为减少变性, 须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白),盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到 10ml, 然后分装成小份贮存于 -20C。1mol/L二硫苏糖醇(DTT):在二硫苏糖醇5g的原装瓶中加32.4ml水,分成小份贮存于-20C。或转移100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。8mol/L乙酸钾(potassium acetate):溶解78.5g乙酸钾于足量的水中,加水定容到100ml。1mol/L氯化钾(KCl):溶解7.46g氯化钾于足量的水中,加水定容到100ml。3mol/L乙酸钠(sodium acetate):溶解40.8g的三水乙酸钠于约90ml水中,用冰乙酸调溶液的pH至5.2,再加水定容到100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA和NaOH溶液(0.5mol/L),混合后形成EDTA的三钠盐。或称取186.1g的Na2EDTA2H2O 和20g的NaOH,并溶于水中,定容至1L。1mol/L HEPES:将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中,用 NaOH 调 pH (6.8-8.2),然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl:力口 8.6ml的浓盐酸至91.4ml的水中。25mg/ml IPGT:溶解250mg的IPGT (异丙基硫代-0-D-半乳糖苷)于10ml水中,分成小份贮存于-20C。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCI26H2O于足量的水中,定容到100ml。100mmol/L PMSF:溶解174mg的PMSF (苯甲基磺酰氟)于足量的异丙醇中,定容到10ml。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20 C。20mg/ml蛋白酶K (proteinase K):将200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,轻轻摇动,直至蛋白酶K完全溶解。不要涡旋混合。加 水定容到10ml,然后分装成小份贮存于-20C10mg/mlRnase (无 DNase) (DNasefree RNase):溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的TrisHCl调pH至7.5,于-20C贮存。(配制过程中要戴手套)5mol/L氯化钠(NaCI):溶解29.2g氯化钠于足量的水中,定容至100ml。10N氢氧化钠(NaOH):溶解400g氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中(磁力搅拌器搅拌),氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L。10%SDS (十二烷基硫酸钠):称取100gSDS慢慢转移到约含0.9L的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。 2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使终体积为100ml。100%三氯乙酸(TCA):在装有500gTCA的试剂瓶中加入100ml水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。(稀释液应在临用前配制)2.5% Xga(5-溴-4-氯-3-吲哚一0-半乳糖苷):溶解25mg的Xgal于1ml的二甲基甲酰胺(DMF),用铝箔包裹装液管,贮存于-20C。100xDenhardt 试剂(Denhardts regent)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量2%聚蔗糖(Ficoll, 400 型)2%聚乙烯吡咯烷酮(PVP-40)2%BSA (组分 V)水2g2g2g加水至总体积为100ml依照上表称取各组分,溶于水中定容。过滤除菌及杂质,分装成小份于-20C贮存。10x标准DNA连接酶缓冲液(standard DNA ligase buffer)(粘端、平端连接)成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L 贮液100mmol/L MgCI21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/L 贮液5mmol/L盐酸亚精胺(可选)50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA (组分 V)(可选)0.5ml 10 mg/mL 贮液水2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份,贮存于-20C。100 mmol/L dNTP 溶液(dNTP solutions)可以购买到100mmol/L纯dNTPs贮液,-80C可贮存至少6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制20ul溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP 贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP 贮液10mmol/L dGTP2ul 100 mmol/L dGTP 贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP 贮液水12ul20 % PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制10ml溶液各成分的用量质量浓度为20%聚乙二醇20g2.5mol/L氯化钠50ml 5 mol/L氯化钠或14.6g固体氯化钠水补足100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中,加水至终体积100ml,用磁力搅拌器搅拌溶解。20xSSC成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量300mmol/L柠檬酸三钠(二水)88.2g3mol/L氯化钠175.3g水补足1L溶解柠檬酸三钠(二水)和氯化钠于约0.9L水中,加几滴10N NaOH溶液调pH为7.0,用水补足体积至1L。DEPC (焦碳酸二乙酯)处理水加100ul DEPC于100ml水中,使DEPC的体积分数为0.1%。在37C温浴至少12h,然后在15 psi条件下高压灭菌20min,以使残 余的 DEPC 失活。 DEPC 会与胺起反应,不可用 DEPC 处理 Tris 缓冲液。甲酰胺( deionized formamide)直接购买或加Dowex XG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中,用磁力搅拌器轻轻搅拌1h,可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂后分成小份,充氮气于-80 C贮存(防止氧化)。磷酸缓冲液( phosphate buffer)按照下表所给定的体积,混合1 mol/L的磷酸二氢钠(单碱)和1mol/L磷酸氢二钠(双碱)贮液,获得所需pH的磷酸缓冲液。配制1 mol/L的磷酸二氢钠(NaH2PO4H2O)贮液:溶解138g于足量水中,使终体积为1L;1mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4)贮液:溶解142g 于足量水中使终体积为1L。1mol/L磷酸二氢钠(ml)1mol/L磷酸氢二钠(ml)最终pH值8771236.08501506.18151856.27752256.37352656.46853156.56253756.65654356.75104906.84505506.93906107.03306707.12807207.2TE (用于悬浮和贮存DNA)成分及终浓度配制100ml溶液各成分的用量10mmol/L TrisHCI1ml 1mol/L Tris-HCl (pH7.4-8.0, 25C)1mmol/L EDTA200ul 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)水98.8mlTris 缓冲液( Tris-HCl buffer)将121g的Tris碱溶解于约0.9L水中,再根据所要求的pH (25C下)加一定量的浓盐酸(11.6N),用水调整终体积至1L。浓盐酸的体积(ml)pH8.69.0148.8218.628.58.4388.2468.0567.8667.671.37.4767.2二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50xTris -乙酸(TAE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱242g1mol/L乙酸57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol/L)100 mmol/L EDTA200ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)水补足1L5xTris-硼酸(TBE)缓冲液成分及终浓度配制1L溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱54g445 mmol/L硼酸盐27.5g硼酸10 mmol/L EDTA20 ml 的 0.5 mol/L EDTA (pH 8.0)水补足1L染料1%漠酚蓝(bromophenol blue)加1g水溶性钠型漠酚蓝于100ml水中,搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1 %二甲苯青 FF( xylene cyanole FF)溶解1g二甲苯青FF于足量水中,定容到100ml。10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide)小心称取1g漠化乙锭,转移到广口瓶中,加100ml水,用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管,于4C贮存。凝胶上样液(gel loading solutions)6x碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.3 N氢氧化钠300ul 10N氢氧化钠6 mmol/L EDTA120ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)18%聚蔗糖(400型)1.8g0.15%漠甲酚绿15mg0.25%二甲苯青FF25mg水补足到10ml6x聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%漠酚蓝1.5ml 1%漠酚蓝0.15%二甲苯青FF1.5ml 1 %二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA100ul 0.5mol/L EDTA (pH8.0)15%聚蔗糖(400型)1.5g水补足到10ml6x漠酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.25%溴酚蓝2.5ml 1%溴酚蓝0.25%二甲苯青FF2.5ml 1 %二甲苯青 FF15%聚蔗糖(400型)1.5g水补足到10ml6x甘油凝胶上样液(4C贮存)成分及终浓度配制10ml溶液各成分用量0.15%溴酚蓝1.5
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