个人收集整理仅供参考学习1 / 5 即墨市北中学高二生物课前预习案课 题课题 1 菊花的组织培养编写人审核人时间2013.3.23 学习目标1、熟悉植物组织培养的基本过程2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力重点植物组织培养过程中使用的无菌技术难点植物组织培养过程中使用的无菌技术一、 基础知识（一）植物组织培养的基本过程1. 细胞分化（1）概念：在个体发育中，相同细胞的后代在_、 _、_上发生稳定性差异的过程。（2）过程：如：受精卵增殖生长分化形成组织、器官、系统。（3）特点：持久性：是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命过程中, 在_期达到最大限度。稳定性：细胞分化是稳定的，一般是_的。全能性：已分化的细胞，仍具有发育成完整个体的潜能。（4）结果：形成不同的细胞和组织。（5）原因： _ 的结果。2. 细胞全能性（1）定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。（2）原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因。（3）实例：已分化的植物细胞，仍具有全能性。高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为_ _ 。（4）全能性的比较: 受精卵 生殖细胞 体细胞。3. 植物组织培养（1）必要条件：细胞离体；一定的营养物质、激素和其他外界条件。（2）原理 : 细胞的全能性（3）相关概念 : 外植体： _ 。脱分化：由高度分化的植物组织或细胞_的过程，称为植物细胞的脱分化，或者叫做去分化。再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫做再分化。愈伤组织 : _,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞。（二）影响组织培养的因素1. 外植体的选取不同植物的组织培养难度不同；同一种植物的不同组织培养难度不同。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 5 页个人收集整理仅供参考学习2 / 5 菊花的组织培养一般选择_ 。2. 培养基的配制(MS培养基 ) 大量元素：微量元素：有机物：植物激素：3. 不同植物激素浓度，使用顺序和使用量使用顺序实验结果先生长素，后细胞分裂素有利于分裂但不分化先细胞分裂素，后生长素同时使用分化频率提高生长素细胞分裂素比值结果比值高时促根分化，抑芽形成比值低时比值适中促进愈伤组织生长4. 消毒在培养的整个过程中，都需要是一个_环境。5.pH 、温度、光照菊花： pH=_；温度控制在_；每日用日光灯照射_h。二、 实验操作（一） MS固体培养基制备1配置各种母液无机物中大量元素浓缩_倍，微量元素浓缩_倍，常温保存。激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml 的质量浓度单独配制成母液。用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量。2配制培养基 配制培养液；调 PH ；培养基的分装。分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml 或 100ml。由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素。3灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌。（二）外植体消毒1选材 ：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝。2消毒流水冲洗：菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min 左右。 酒精处理：用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70的酒精中摇动_次，持续 _s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗。消毒液处理：取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1 的氯化汞溶液中 12min，取出后在无菌水中至少清洗_次，漂净消毒液。（三）接种1接种室消毒污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种室消毒是至关重要的。用70的酒精喷雾使空气消毒，酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外线照射20 分钟。2无菌操作要求操作要在_完成，每次使用器械后，都需要_ ，接种后立即_。3材料的切取和接种精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 5 页个人收集整理仅供参考学习3 / 5 即墨市北中学高二生物课堂探究案课 题2.1 微生物的实验室培活动与探究4接种注意事项每接种一块外植体前，镊子需放入体积分数为75的酒精溶液中消毒一次，然后在酒精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种。外植体在培养基中要分布均匀，放置外植体数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜_块，菊的茎或叶 _块，也不要太少， 以充分利用培养基中的营养成分和光照条件。插入时应注意_，不要 _。茎段、茎尖基部插入培养基利于_。思考：应该做几组重复、设置几组对照实验？答：（四）培养1愈伤组织的培养从接种外植体到出现愈伤组织需经过2 周时间。 2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈伤组织长的更快。2 周后，培养基成分接近耗尽，必须更换培养基，进行_。2愈伤组织的继代培养继代培养所用的培养基与培养愈伤组织的相同，在严格的无菌条件下，将愈伤组织连同原来的外植体一起移到新培养基上。愈伤组织的继代培养一代为20d。如果延长时间，培养基中营养物质减少，外植体会分泌有毒物质，造成自身中毒。如果愈伤组织长到直径为_cm 时，就可以进行试管苗培养，否则还需进行第二代继代培养。3试管苗的培养当愈伤组织长到一定大小后，可以更换培养基，进行试管苗的见光培养。（五）移栽1打开封口膜2清洗转移3移栽 ：幼苗长壮后，移栽到土壤中。（六）栽培例 1：下列实例中能体现细胞全能性的是( ) 用培养基培养的胡萝卜单个细胞培养成了可育的植株植物用种子进行繁殖用烟草组织培养的单个组织培育出了可育的完整植株胡萝卜韧皮部细胞培育出植株紫色糯性玉米种子培育出植株转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株A B C D 例 2：用高度分化的植物器官、组织或细胞进行组织培养可以形成愈伤组织，下列叙述错误的是( ) A该愈伤组织是细胞经过脱分化和分裂形成的B该愈伤组织的细胞没有全能性C该愈伤组织是由排列疏松的薄壁细胞组成的 D 该愈伤组织可以形成具有生根发芽能力的胚状体例 3：植物组织培养过程中的脱分化是指( ) A 植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞 B 未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程C 植物的器官、组织或细胞通过离体培养产生愈伤组织的过程D取植物的枝芽培育成一株新植物的过程精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 5 页个人收集整理仅供参考学习4 / 5 即墨市市北中学高二生物课后巩固案例 4：用菊花的茎尖植物组织培养可培育出试管苗。下面关于这一过程的说法正确的是( ) A.进行培养时，一次性加足营养物质以防止污染 B.整个培养过程应在光下进行，有利于长叶C. 要根据培养过程的实际情况，更换培养基D.整个培养过程都应在密闭条件下进行，以免杂菌的污染例 5：污染是植物组织培养过程中的最大技术难题，可发生于不同的对象和不同阶段，某同学按照教材中的实验操作，结果发现在培养基中出现白色晕圈或有色菌落，下列关于此项分析错误的是 ( ) A.可能是锥形瓶口处理不当 B. 组织培养的每一个环节都有可能出现污染C.可在培养基中添加生长素等物质来避免污染D.先初培养，挑出无污染的物质再进行培养，可减少污染例 6：下列关于植物组织培养的叙述中，错误的是 ( ) A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化C.离体器官或组织的细胞都不必通过脱分化就能形成愈伤组织D.同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同例 8：影响植物组织培养的因素包括( ) 培养基配制外植体选取激素的运用消毒温度、 pH、光照AB C D 例 9：(2011 年晋城 ) 要想获得无病毒植株，可选择以下植物什么部位进行离体培养( ) A根尖B花粉粒 C 韧皮部细胞 D 叶肉细胞例 10：植物细胞表现出全能性的必要条件是( ) A给予适宜的营养和外界条件 B导入其他植物细胞的基因C脱离母体后的具有完整细胞核的细胞或组织，给予适宜的营养和外界条件D将成熟筛管细胞的细胞核移植到去核卵细胞中例 11：在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪一项条件不是都需要的( ) A消毒灭菌 B适宜的温度C充足的光照 D适宜的养料和激素例 12：用组织培养技术繁殖植物体时，可能发生的是( ) A基因突变B基因重组 C同源染色体分离 D性状分离例 13：在植物组织培养过程中要使用植物激素，但不同的植物激素的浓度以及使用的先后顺序和用量的比例都影响细胞的分裂、分化。下列叙述中错误的是( ) A先使用生长素，后使用细胞分裂素，有利于细胞分裂，但细胞不分化B先使用细胞分裂素，后使用生长素，细胞既分裂也分化C生长素与细胞分裂素用量比值低，有利于芽的分化，抑制根的形成D不使用植物激素，有利于愈伤组织的形成例 14：关于制备MS固体培养基的过程，有误的是( 多选 )( ) A在使用提前配制的母液时，可直接用移液管从母液中取B配制母液时，无机物中大量元素浓缩10 倍，微量元素浓缩100 倍C配制培养基时，琼脂要及早加热熔化DMS培养基的pH要求不太严格，可控制在57 之间精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 5 页个人收集整理仅供参考学习5 / 5 精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 5 页