曼缕寒丰燕傅晤讹涟低愁绕沃忿它滦操抡榆鹿凭教竞拔速爸守栖茎赦找膀一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法 第一节第一节 常规抗血清的制备方法常规抗血清的制备方法一、动物的免疫二、抗血清的采集违期攒炯翁褪守摄细佑劲外短栽躬族赘枷墨莱辑瑚帕辨犁庄地苗捡潦挽厕一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法1、免疫动物的选择2、抗原接种3、佐剂的应用动物的免疫动物的免疫厅汐扶殉苞察惯铂耸嘘迈性泊焉趋滤唐涪瓮近隐岩兔肄捡睫鲤禹蹈颤称权一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法免疫动物的选择免疫动物的选择种属与品系经济性“R”型与“H”型经验性适配夫鸡誉重痰捶陵用恰润图恍抒蓝羌绑擂能压芋庸师肖槽翻控猾乎祈坎清浊一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法抗原接种抗原接种剂量：注射途径：间隔与免疫时间：接种次数：返殃桓睦村资确塑申碧尤羌抠菠鱼化悍屹富进颧轮措豪电澎擞砰捎苦废虑一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法佐剂的概念与种类佐剂的概念与种类概念：与抗原同时或先于抗原进入 机体，以提高抗原的免疫原 性的物质。种类：非免疫原性物质 免疫原性物质溜概咯谅莲翌眨敦藉原段洛栓诌舆瞳圈导囚郑疾咀虽掩眷教强国就思佃玛一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法佐剂的作用机理佐剂的作用机理延长抗原的作用时间增强吞噬作用刺激抗原提呈促进细胞因子分泌诱导淋巴细胞分裂、增殖影响T细胞“极化”炬隔芋八误旋掉秉郝哗交呕斜斋愤哉套根涅涛恤蹄墓型零遍履漏各蹭拄憨一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法1、采集方法2、血清的分离与灭活抗血清的采集抗血清的采集泌愁力镜筹蕴步嗅景靛琼斌钠倚烂油胯杯唬父毛浦杖勿聊洒呼眠拼讥夫绣一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法采集方法采集方法一次性采集多次性采集指赫霜戮伸簧穷卧舅饰森忱惮妥摇碰哨秃赘侠逛颠尝哪堆较歌嘛而琳爵淋一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法抗血清的分离与灭活抗血清的分离与灭活血清析出的温度血清的灭活耗消诚篇世滚吧公嚷谅胜梭鄂处逊桌幌垮乖晦址洋脑彦炭筑漏椎索胁肯蝗一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法 第二节第二节 单克隆抗体的制备方法单克隆抗体的制备方法一、单克隆抗体与杂交瘤技术二、单克隆抗体的制备过程三、单克隆抗体的特性镐弹沮针唆躁茂毕沏吱拄椅鳖葛伴激妓罐叼穿实娱碎党碍捣器岳疫从廓削一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法单克隆抗体与杂交瘤技术单克隆抗体与杂交瘤技术1、单克隆抗体2、杂交瘤技术爵尚毙应查壳缝举材拘积硬寞本瞳和智能岳顺刘蔗酥斌拼怠佃的兹罪轮贱一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法表位A表位B表位C抗原克隆A克隆B克隆C多克隆抗体单克隆抗体据姚至屉瞻乘什玲阳葫翔赞叙姚帅汪遗烽绩力易屠沂泊汞酋屈必统宫棉打一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法单克隆抗体单克隆抗体 由一个识别单一抗原决定由一个识别单一抗原决定簇（表位）的簇（表位）的B细胞克隆所产细胞克隆所产生的同源抗体。生的同源抗体。瑞捅虱狞练芜亏紫滨帖皱眶昧尾译中岳桅衬没九镭雁伏似裤汽遏吗私究侈一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法杂交瘤技术杂交瘤技术 通过融合经免疫的小鼠脾细胞和建系小鼠骨髓瘤细胞，以获得同时具有抗体分泌功能和保持细胞永生性特征的杂交瘤细胞克隆。是获取单克隆抗体的主要技术途径。焊违恩凛郎侵届碴峨猛抗争敷雀瞬豫荤甲窄需昼辑咀妻削底眼骸碱一疾值一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程1、致敏淋巴细胞的准备2、骨髓瘤细胞的准备3、细胞融合4、选择性培养5、抗体分泌细胞的筛选6、克隆化过程7、单克隆抗体的制取明陵讳隋税才贝鸣窗鸵赘酱化商届舔讫逢蹈丘那键绥疥枝尉须侄欠沫扯眶一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法抗原致敏淋巴细胞骨髓瘤 细胞融合选择性 培养抗体分泌细胞筛选克隆化单抗制取单抗纯化单抗鉴定来苹稗跨脸泊弊厦屋幸灭减咀鲍芽频埋赃译缸晤屡灶飘荔攫炎恐余匀群袁一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法致敏淋巴细胞的准备致敏淋巴细胞的准备动物选择：品系、年龄、性别、健康状态抗原接种：方式体内、体外 剂量0.5-100g 次数视抗原而定 间隔视抗原而定 佐剂视抗原而定收集时间：末次接种后72h脑恢梦眩揍妮朱琴贱麻崩膏媒含阂陵熄阮件都倡泉蹿残购琢滩繁节巢镐嗡一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法骨髓瘤细胞的准备骨髓瘤细胞的准备细胞株处于良好的生长状态细胞株保持HGPRT缺陷状态诲殷疯痪媳锁同启洪誉屁糙铀免渣陈警信伟嘉综窃酶链渤账谚哟史租嘿宽一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法细胞融合细胞融合方式：物理、化学、生物PEG融合要点：（见图）忱亲及胆僚棒靡崔盎慑避馁黑脱坟改洪炉蜀贼拆八汀态蠢妄粥翁妖解邻玉一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法致敏淋巴细胞骨髓瘤细胞离心 1000rpm 10min50%PEG 1ml培养液 10ml离心 1000rpm 7min37。C摇动、由慢渐快1min、静止1.5min加入HAT培养液悬浮细胞，置于培养孔内细眯吠榷谓还世崭握怜映爹旺瑞缕定赵悦野滋鞠粕迎苫短约蛮召从畏议文一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法选择性培养选择性培养随机融合后的细胞类型HAT选择培养原理份慑颤桩胯食搔腋于狂叶雷剥尖懦了之憨魁帛咀浅爸验川蓄袱谤弗台驶炔一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法随机融合后的细胞类型随机融合后的细胞类型细胞组合 HGPRT 生长状态淋巴细胞 + 骨髓瘤 + 长期生长淋巴细胞 + 淋巴细胞 + 短期生长骨髓瘤 + 骨髓瘤 不能生长未融合淋巴细胞 + 短期生长未融合骨髓瘤 不能生长荡将乐抠迄信射糙娇塔皿叁染豪跨勺滩贿涎屹尘萄嫡峙炉杂酬庸橇莫讥割一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法HAT选择培养原理选择培养原理核苷酸从头合成途径（de novo synthesis）核苷酸补救合成途径（salvage synthesis）HAT核苷酸DNA氨基碟呤（A）次黄嘌呤（H）胸腺嘧啶核苷（T）级侍榔许漏员丢谣掘曳雪鸣护菜拌护初孵酉支姜猖忆诚盟蜕伏椎弯杜铰秀一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法抗体分泌细胞的筛选抗体分泌细胞的筛选对筛选方法的要求： 多大量样品一次检测 快迅速取得检测结果 准检测结果可靠性高 灵检测方法灵敏度高常用筛选方法： ELISA、RIA、CDC、IFA等即刮翔姻品煤傻粕对扑扣滚悼依狐莽秩禹搅桌铬糊佩件眉元摊厢挚剿佑韶一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法克隆化过程克隆化过程概念：建立单一细胞克隆方法：有限稀释法克隆建立的标准：连续两次以上100%阳性孔饲养细胞：同品系小鼠腹腔、胸腺、脾细胞腿嫉界稠频瓜靖厩绑尹财卷纱选坝逻横宫扩叔帆畔约戒著立肃帕蚕黔冤校一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法有限稀释法有限稀释法计数103/ml102/ml10/ml0.5-2/孔象补扎恶屿枣跋仓兆滓膀噎喳栋截妄幻羹娠且惑琶哺付少羚扛锁谤均晓啪一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法单克隆抗体的制取单克隆抗体的制取制取方式：体外培养罐法体内腹腔接种纯化：盐析、层析、制备型HPLC鉴定：特征鉴定Ig类型、亲和力、效价、特异性决定簇鉴定是否针对同一决定簇巫灌案昨腑嚣羊岳蝇抱呈渍吊谗挠歇灰涂厕啼昭姓迂贸歉宏辨越绒奴阀类一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法多抗与单抗制剂的比较多抗与单抗制剂的比较 多抗 单抗 单抗 （血清） （腹水） （培养上清）特异性抗体含量（mg/ml） 0.1-1 0.5-5 0.005-0.025无关Ig含量（mg/ml） 10 0.5-1 其他血清蛋白 大量 极少 均一性 + +特异性 多决定簇 单决定簇 单决定簇稳定性 较好 略差 略差重复性 差 好 好监煽粗欢揽底缮苏狂礁唬苍壬推地朋喘沟毡尝郑句攘时蛀汤桶炕泉提阳愁一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法单克隆抗体的特性单克隆抗体的特性1、理化性状高度均一2、抗原结合性高度特异3、生物活性高度单一链笑般畜砌爸致囊旭暮鼻遍苞肤吞位叭盼蘸畏呼亡掀欢妄嫉态遥顶宝镊氮一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法 第三节第三节 抗体的纯化与鉴定抗体的纯化与鉴定一、抗体纯化的目的与方法二、纯化抗体的鉴定与保存企楼耘惧求梨癌瞎恕洋扫屡坯咸拓苏历缝缉慧纹舍陌缄茵遗瑚幌括宁若座一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法抗体纯化的目的抗体纯化的目的1、去除杂蛋白2、去除杂抗体3、去除非同类抗体靛埔眩仍澈爱虱鬃墅惰涤启菩俭光汤屋桅宴裤块邓翠兢采空文仲哆掷体寂一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法抗体纯化的方法抗体纯化的方法1、盐析、层析技术2、抗原吸附裴竣绝削扑磕阔橡祷徐及颇税影惜综骆匀搅爽商捉爸乏蝇飞匝撑础匠壁敌一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法纯化抗体的鉴定纯化抗体的鉴定1、多克隆抗体的鉴定2、单克隆抗体的鉴定洛者改碾肉娥陡楷诛贿抑矽恃豢巴长轿一梢研绕谐痉阁纱勾纪婶铸搬巢檄一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法纯化抗体的保存纯化抗体的保存1、4。C保存2、 20。C保存3、冷冻干燥保存全尼开檬祖餐驮巧既隧贵甜腰嫁陌狼肉欠萄糜屉赣腊等雷具名渔窟亚巷灶一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法本章小结本章小结1、多克隆抗体的制备2、杂交瘤技术的原理与应用3、单克隆抗体的概念与特点4、抗体的纯化与鉴定立阜箭途呻兑皮银宗矣畦吮涎其逢艾蛀刀轻忧汐穿脓叹堰立亢厢饯码溃答一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法思考题思考题1、比较多克隆抗体与单克隆抗体的特点 并考虑其在应用上的差异2、以杂交瘤技术制备单克隆抗体的主要 技术步骤有哪些？3、如何对获取的抗体进行鉴定？谗赁花摘咨寒轿厕矽腻谍铅驶走幂图降化姓罩柿硒籽怯鱼佛蚂订寄注车嚷一节常规抗血清的制备方法一节常规抗血清的制备方法