全身用药的毒性研究Stillwatersrundeep.流静水深流静水深,人静心深人静心深Wherethereislife,thereishope。有生命必有希望。有生命必有希望第一节 新药急性毒性试验急性毒性试验 毒性反应类型 定性 出现和消失时间 可能的靶器官和死亡原因 致死量 定量 最大给药量 半数致死量一、目的和意义 1、了解新药急性毒性的强弱 LD50 ED50 治疗指数（ LD50/ED50） 相对毒性 安全系数（ LD5/ ED95） 2、为长期毒性试验和特殊毒性试验剂量设置提供依据 致突变作用评价为核试验的最高剂量 为1/2半数致死量。 生殖毒性试验中，雌性动物最高量为 急毒中的最大耐受量。 长期毒性试验中为急性毒性的最大耐 受量。 3、获取新药毒性反应信息 毒性反应症状、靶器官、致死原因等 一般情况 毒性大小 有明显种属差异 特殊情况 无明显种属差异 对一期临床的指导意义 4、为新药药学研究提供参考 二、试验方法（一）半数致死量（LD50)的测定 试验方法 1、实验动物选择 啮齿类动物 动物 非啮齿类动物 动物性别、年龄、数量。 2、动物随机分组 按性别、体重采用分层随机法 3、剂量设计 预试验得出0-100%的死亡剂量范围 内，设计5-6个剂量组。各剂量组间距 为1:0.65-0.85,高剂量70%死亡率以 上，低剂量死亡率30%以下。 4、给药 两种给药途径 5、观察 观察时间及观察内容 6、结果处理与评价 对数据进行科学全面分析，概括出 药物急性毒性总体情况。（二）最大给药量试验 在受试药物合理的最大容积和最大 浓度条件下，单次给予试验动物不产生 死亡最大给药量试验。（三）最大耐受量试验 单次给药引起动物出现明显中毒反 应而未发生死亡的剂量。 一般使用20只动物，连续观察7-14 天。（四）固定剂量试验 试验不以死亡为观察终点，而以明显 的毒性体征为评价指标。 据资料，用5、50、500和2000mg/kg 4个国定剂量中的一个做初试剂量，单次 给药。给药前禁食6-12小时，给药后禁食 3-4小时。（五）近似致死剂量试验 主要用于非啮齿动物的誓言。常用 Beagel犬或猴。 1、估计可能的致死范围。 2、按50%递增法，设计10-20个剂量的 序列表。 3、在剂量的序列表中找出可能致死剂 量范围。（六）其他方法 1、上下法（阶梯法、序贯法） 2、累积剂量设计法（金字塔法）三、急性毒性试验中常用LD50计算方法 1、Bliss法 2、寇氏法 3、改良寇氏法 4、何尔恩法 第二节 新药长期毒性试验长期毒性试验 对动物反复多次连续给药的毒性试验。长期毒性试验的目的 1、反复多次给药的情况下，实验动物 出现的毒性反应、量效关系、主要的靶器 官、损害程度及其可逆性。 2、获得反复给药情况下，实验动物能 耐收的剂量范围及完全无毒性反应的安全 范围。一、一般原则1、动物的选择及分组 啮齿类 非啮齿类 溶剂对照组 高剂量组 给药试验组 中剂量组 低剂量组2、实验室条件 应尽量符合GLP标准。3、剂量设计 低剂量组-无毒剂量（临床用量2-3倍） 中剂量组-高、低剂量几何平均数 高剂量组-毒性剂量4、给药途径 拟推荐的临床用药途径5、给药容量 应根据体重增长情况调整给药量，按等量不同浓度法配制药物。6、试验周期 临床试验用药 动物试验用药 5天 2周 2周 4周 2-4周 3个月 1-3个月 6个月 3个月 啮齿类6个月、非啮齿类9个月 一般给药时间为临床给药试验周期的3-4倍时间二、检测项目（一）一般观察 外观体征和行为活动，流涎等腺体分泌、粪便性状与颜色、毛色、行为、给药局部反应、食量及体重变化。对死亡动物应进行系统病理学检查。（二）血液学指标 红细胞、网织红细胞计数 血红蛋白 血液学指标 白细胞总数级分类 血小板 凝血时间（三）血液生化指标 天门冬氨酸氨基转换酶(AST) 丙氨酸氨酸氨基转换酶(ALT) 碱性磷酸酶(ALP)血液生化指标 尿酸氮(BUN) 、总蛋白(TP) 白蛋白(Alb) 、血糖(ALU) 总胆红素(T-BIL)、肌酐(Crea) 总胆固醇(T-CHO)（四）特殊检查 可能引起眼、耳毒性的药物，应增加 眼、耳毒性的检查。 有些药物尚需研究对酸碱平衡、水盐 代谢的影响。（五）系统尸体解剖 1、脏器系数 心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、甲 状腺、睾丸、子宫、脑等 2、组织学检查 内容为：脑、脊髓、视神经、眼、 垂体、心脏、肝、脾、肺、肾、肾上腺、 甲状腺、睾丸、子宫等。三、检测指标的时间（一）检查间隔（给药期间的检查间隔）（二）恢复性观察 最后一次给药后24小时，每组活杀部 分动物监测各项指标。留下部分动物，根 据药物的特点和毒性情况，继续观察2-4周， 以了解毒性反应的可逆性和可能出现的延 迟性毒性。四、资料整理要求1、首页写明试验题目，试验单位，课题负责 人签名、试验参与人名单，职称，试验开 始即结束时间，实验原始资料保存地点， 申请注册单位等。2、第二页 试验摘要 3、内容 试验报告的内容 包括试验方法、目 的、供试品（品名、批号、生产单位、规 格、包装情况、性状等等。），实验动物 情况（来源、数量、品系、雌雄、动物证、 试验环境温湿度、饲料来源等），试验方 法，结果，结论，参考文献等。4、要客观的描述大体解剖及病理学检查结果， 提供病理照片的材料。五、结果评价1、试验结果数据进行统计学处理。2、根据试验目的，结合所观察到的毒性表现 作出恰当的评价。3、对获得的数据进行科学全面地分析。4、对于某些项目的试验，可安排在该实验中 同时观察，并提供符合要求的实验结果。第三节 制剂的全身毒性试验一、静脉注射制剂的全身毒性试验 血管刺激性试验 体外溶血试验 全身毒性试验 过敏性试验 热原试验一）血管刺激性试验1、目的-观察静脉注射剂多次给予后对血管 的刺激性情况。2、动物-家兔（每组至少3只动物）3、方法-分成两组（阴性对照组、给药组） 分别对家兔耳缘静脉注射给药，连 续5次，末次注射后24小时处死部分动物， 肉眼观察并对组织进行病理学检查；余下 的动物14天后进行同样检查。4 4、判定方法、判定方法5 5、结果评价、结果评价家兔耳缘静脉血管二）体外溶血试验1、目的-静脉注射剂对红细胞状态的影响2、动物-家兔1只3、方法 1）2%红细胞悬液的制备 2）受试物的制备-临床使用浓度 3）试验方法体外溶血试验加样表 试管号 1 2 3 4 5 6 7 2%红细胞 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 生理盐水 2.0 2.1 2.2 2.3 2.4 2.5 蒸馏水 2.5 受试物 0.5 0.4 0.3 0.2 0.14、判定方法-溶血、无溶血、红细胞凝聚5、结果评价-3小时内无溶血，可以注射使用三）过敏性试验1、目的-观察供试物对动物有无过敏反应2、动物-雄性豚鼠18只（三组-每组6只）3、方法 溶剂组-生理盐水或葡萄糖注射液生理盐水或葡萄糖注射液 1）分组 阳性组-1%新鲜鸡蛋清 给药组-受试物 2）每组分别腹腔注射，隔日一次，共三次，首次注射第14日、21日每组取3只动物静脉注射，观察过敏反应。4、判定方法豚鼠过敏反应判定标准豚鼠过敏反应判定标准反应级数 反应症状0 无明显反应1 有轻微抓鼻、颤抖或竖毛2 有几次咳嗽、抓鼻、颤抖或竖毛3 多次或连续咳嗽、伴有呼吸困难 或痉挛、抽搐等4 痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡5、结果评价 反应级数2级（包括2级）为阳性四）热原试验1、目的-判定受试物是否有致热作用2、动物-家兔3、方法 3只家兔，侧正常体温，注射药物，每 小时测体温一次，共3次。最高一次温度 减正常体温。如三只家兔中有一只升温超 过0.6或三只家兔升温总和超过1.4时; 应另取5只家兔复试，方法通上。4、判定方法 1）3只家兔升温总和不超过1.4而且每 只家兔升温不超过0.6。 2）5只家兔升温总和不超过3.5而且升温超过0.6的家兔不超过1只。5、结果评价二、局部用药的全身毒性试验 主要讨论皮肤用药、眼科用药、滴鼻 剂、吸入剂及直肠、阴道制剂等引起的全 身毒性试验。见第十九章。小结第一节第一节 新药急性毒性试验新药急性毒性试验一、目的和意义一、目的和意义二、试验方法二、试验方法 1 1、半数致死量的测定、半数致死量的测定 2 2、最大给药量试验、最大给药量试验 3 3、最大耐受量试验、最大耐受量试验 4 4、固定剂量试验、固定剂量试验 5 5、近似致死量试验、近似致死量试验三、急性毒性试验中常用的三、急性毒性试验中常用的LDLD5050计算方法计算方法第二节第二节 新药长期毒性试验新药长期毒性试验一、一般原则一、一般原则二、检测项目二、检测项目 1 1、一般观察、一般观察 2 2、血液学指标、血液学指标 3 3、血液生化指标、血液生化指标 4 4、特殊检查、特殊检查 5 5、系统解剖、系统解剖三、检测指标时间三、检测指标时间 1 1、检查时间、检查时间 2 2、恢复性观察、恢复性观察四、资料整理要求四、资料整理要求五、结果评价五、结果评价第三节 制剂的全身毒性试验一、静脉注射制剂的全身毒性试验 1、血管刺激性 2、体外溶血试验 3、过敏性试验 4、热原试验二、局部用药的全身毒二、局部用药的全身毒性试验性试验