学习目标：学习目标： 1 1、说出动物细胞融合原理、过程和方法、说出动物细胞融合原理、过程和方法 2 2、单克隆抗体的原理和应用、单克隆抗体的原理和应用重点和难点：重点和难点： 1.1.动物细胞融合的过程动物细胞融合的过程 2.2.单克隆抗体的制备和应用单克隆抗体的制备和应用2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞与植物细胞的差别：无细胞壁全能性受限制，不能发育成杂种动物动物细胞杂交与植物细胞杂交的不同：不需去除细胞壁不需去除细胞壁不能发育成新的动物个体不能发育成新的动物个体一、动物细胞融合（细胞杂交）一、动物细胞融合（细胞杂交）P521、概念、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。2、结果、结果：形成单核的杂交细胞3、原理、原理： 细胞膜的流动性4、诱导方式、诱导方式物理法：离心、振动、电激化学法：聚乙二醇（PEG)生物法：灭活的病毒5 5、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程动物细胞融合动物细胞融合杂种细胞杂种细胞愈伤组织愈伤组织杂种植株杂种植株植物细胞植物细胞A植物细胞植物细胞B 原生质体原生质体A原生质体原生质体B植物体细胞杂交植物体细胞杂交去壁去壁融合融合组培组培不同不同DNADNA的两个细胞的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞融合后的细胞进行有丝分裂进行有丝分裂5 5、动物细胞融合过程、动物细胞融合过程6、意义、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。7、应用、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段 特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目比较项目比较项目比较项目植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交植物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合动物细胞融合原原原原 理理理理融合前处理融合前处理诱诱诱诱 导导导导 方方方方 法法法法用用用用 途途途途细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性植物细胞的全能性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用纤维素酶、用纤维素酶、用纤维素酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散使细胞分散使细胞分散物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学方法物理、化学、物理、化学、物理、化学、物理、化学、生物方法生物方法生物方法生物方法获得部分获得部分获得部分获得部分或完整植株或完整植株或完整植株或完整植株主要用于制备主要用于制备主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体提问？1.1.抗体是由何种细胞产生的？抗体是由何种细胞产生的？ 效应效应B B细胞（浆细胞）。细胞（浆细胞）。2.2.一个淋巴细胞一个淋巴细胞( (浆细胞浆细胞) )能分泌多种抗体吗？能分泌多种抗体吗？ 每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。每一个淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。3. 3. 简述获得抗体的简述获得抗体的传统传统途径？途径？ 抗原抗原 动物体动物体 抗体抗体 抗原不纯抗原不纯 抗体不纯抗体不纯二、单克隆抗体（单个细胞分裂产生二、单克隆抗体（单个细胞分裂产生的细胞群体分泌抗体）的细胞群体分泌抗体）刺激浆细胞体外培养淋巴细胞能无限增殖吗体外培养淋巴细胞能无限增殖吗? ?怎样解怎样解决这个问题？决这个问题？4.4.这种方法获得的抗体有什么缺陷？这种方法获得的抗体有什么缺陷？ 产量低，纯度低，特异性差产量低，纯度低，特异性差一个一个B B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，但是淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，但是不能无限增殖不能无限增殖骨髓瘤细胞能无限增骨髓瘤细胞能无限增殖，但不能产生抗体殖，但不能产生抗体设计方案：设计方案：动物细胞融合技术动物细胞融合技术杂交瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞培养技术动物细胞培养技术单克隆单克隆抗体抗体 既能产生特异性抗体，既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞又能大量增殖的细胞1 1、原理、原理：杂交瘤细胞具有两个亲本的特性，即能迅速大量增殖，又能够得到大量的单一抗体。效应效应B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中细胞有几培养液中细胞有几种类型？融合细胞种类型？融合细胞几种几种类型类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞- B- B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种多种杂交细胞杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养2 2、单克隆抗体的制备过程、单克隆抗体的制备过程第第第第1 1 1 1次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。交瘤细胞（多种）。第第第第2 2 2 2次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产交瘤细胞中筛选出能产生单一抗体的杂交瘤细生单一抗体的杂交瘤细生单一抗体的杂交瘤细生单一抗体的杂交瘤细胞。胞。胞。胞。 该细胞继承该细胞继承双亲细胞双亲细胞的遗传特性，既能的遗传特性，既能产生专产生专一抗体一抗体又能又能无限增殖无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高产生相应的产生相应的产生相应的产生相应的B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞2.诱导其融合的方法有哪些？诱导其融合的方法有哪些？3.融合后培养液中有几种细胞融合后培养液中有几种细胞?4.怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交怎样筛选出杂交瘤细胞，杂交瘤细胞有何优点瘤细胞有何优点?原因？原因？1.注射抗原的目的是什么注射抗原的目的是什么?5.大量增殖杂交瘤细胞和获大量增殖杂交瘤细胞和获得单抗的方法得单抗的方法?产生相应的产生相应的产生相应的产生相应的B B淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞淋巴细胞选择培养基选择培养基选择培养基选择培养基既能在体外无限增殖，也能产生既能在体外无限增殖，也能产生既能在体外无限增殖，也能产生既能在体外无限增殖，也能产生特定的抗体特定的抗体特定的抗体特定的抗体具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质具有双亲细胞的遗传物质培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养培养液中或小鼠腹腔中培养从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取从培养液或小鼠腹水中提取(2)(2)、过程过程B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合B-B细胞B-瘤细胞瘤-瘤细胞选择培养基第一次筛选第一次筛选杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）克隆化培养专一抗体检测 第二次筛选第二次筛选相应杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体(3).(3).单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大量大 作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：优点：准确、高效、简易、快速准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。一种诱导细胞融合的新方法一种诱导细胞融合的新方法一种新细胞一种新细胞灭活病毒灭活病毒杂交瘤细胞杂交瘤细胞一个优势一个优势单克隆抗体特异性强、单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势灵敏度高的优势1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的经过免疫的B淋巴细胞淋巴细胞 B.没经过免疫的没经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞C.经过免疫的经过免疫的T淋巴细胞淋巴细胞 D.没经过免疫的淋巴细胞没经过免疫的淋巴细胞A2.动物细胞融合的目的中最重要的是动物细胞融合的目的中最重要的是-（ ）A.克服远缘杂交不亲和克服远缘杂交不亲和 B. 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 C.培育新品种培育新品种 D.生产杂种细胞生产杂种细胞3.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（ ）A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段基本相同所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞 B D4. 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是-（ ）A.由小鼠能产生抗体的由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合淋巴细胞与肝细胞融合 B.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成淋巴细胞诱导融合而成 C.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成 D.由小鼠一个由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D