学习好资料欢迎下载基因工程 (习题详见 2016 天利活页 ) DNA重组技术的基本工具知识点一基因工程的概念：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。注意：对本概念应从以下几个方面理解：知识点二基因工程的基本工具1. 限制性核酸内切酶“分子手术刀”（1）限制性内切酶的来源 ：主要是从原核生物中分离纯化来的。（2）限制性内切酶的作用 ：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并能将每一条链上特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键切开。（3）限制性内切酶的切割方式及结果 ：在中心轴线两侧将DNA切开，切口是黏性末端。沿着中心轴线切开DNA ，切口是平末端。2.DNA连接酶“分子缝合针”（1）来源 ：大肠杆菌、 T4 噬菌体（2）DNA连接酶的 种类 ：E.coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。（3）作用 及作用部位： E.coliDNA连接酶作用于黏性末端被切开的磷酸二酯键， T4DNA连接酶作用于黏性末端和平末端被切开的磷酸二酯键。注意：比较有关的DNA酶( 详情见附件 ) DNA 聚合酶： 在 DNA 复制时起作用，将多个脱氧核苷酸催化聚合为脱氧核苷酸链（也就是DNA 单链），此时形成的化学键是磷酸二酯键。DNA 解旋酶： 在 DNA 复制或转录时起作用，将DNA 的双链解开，作用对象是氢键，使氢键断裂DNA 水解酶： 在消化道或细胞内起作用，将DNA 水解为脱氧核苷酸，作用对象是磷酸二酯键DNA 连接酶： 在 DNA 修饰过程或基因工程中起作用，将两个DNA 片段连接起来，此时形成的化学键是磷酸二酯键。操作环境生物体外操作对象基因操作水平DNA分子水平基本过程剪切拼接导入表达结果人类需要的基因产物下图为 DNA 分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制性内切酶、DNA 聚合酶、精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 10 页学习好资料欢迎下载3. 基因进入受体细胞的载体“分子运输车”（1）分子运载车的种类质粒： 常存在于原核细胞和酵母菌中， 是一种分子质量较小的环状的裸露的DNA分子，独立于拟核之外。病毒 ：常用的病毒有噬菌体、动植物病毒等。（2）运载体作用：是用它做运载工具，将目的基因转运到宿主细胞中去。是利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。（3）作为运载体必须具备的条件：在宿主细胞中保存下来并大量复制有多个限制性内切酶切点有一定的标记基因，便于筛选。4、教材拓展：拓展点一限制酶所识别序列的特点限制酶所识别的序列的特点是：呈现碱基互补对称，无论是奇数个碱基还是偶数个碱基，都可以找到一条中心轴线，如图，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。如：以中心线为轴，两侧碱基互补对称；以为轴，两侧碱基互补对称。拓展点二 DNA 连接酶连接的是什么部位？DNA连接酶是将一段DNA片段 3端的羟基与另一DNA片段 5端磷酸基团上的羟基连接起来形成酯键，而不是连接互补碱基之间的氢键。第1节基因工程的基本操作程序一、基因工程的基本操作步骤为四步曲：1. 目的基因的获取；2. 基因表达载体的构建；3. 将目的基因导入受体细胞；4. 目的基因的检测与鉴定。DNA 连接酶、解旋酶作用的正确顺序是精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 10 页学习好资料欢迎下载（一）目的基因的获取1目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因。目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、 人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等2目的基因的获取方法：（1）基因文库 : 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 10 页学习好资料欢迎下载基因文库基因组文库：含有一种生物的所有基因。部分基因文库（如 cDNA文库 ）：含部分基因，可由mRNA 反转录而来。（构建基因文库的目的：为了在不知目的基因序列的情况下，便于获得所需的目的基因。）3. 组成基因文库的目的基因获取途径精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 10 页学习好资料欢迎下载（1）利用 PCR技术扩增目的基因PCR ：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。原理： DNA双链复制原料：模板DNA ；RNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（ Taq 酶）；方法： DNA受热变性解旋为单链、冷却后 RNA引物与单链相应互补序列结合、DNA聚合酶作用下延伸合成互补链。过程：热变性（90-95 ）、退火（ 55-60 ）、延伸（ 70-75）。特点：指数形式扩增DNA 合成仪精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 10 页学习好资料欢迎下载二基因表达载体的构建（基因工程的核心体外进行）1目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在；可以遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。目的基因：根据需要来选择。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 10 页学习好资料欢迎下载2基因表达启动子：位于基因首端，RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动转录基因载体的组成终止子：位于基因尾端，使转录在所需要的地方停下来。标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因。3方法：同种限制酶分别切割载体和目的基因，再用DNA连接酶把两者连接。目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）4条件：同种限制酶、DNA连接酶、（目的基因、启动子、终止子、标记基因）三将目的基因导入受体细胞转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。导入植物细胞：常用农杆菌转化法（将构建的载体导入农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞），基因枪法、花粉管通道法。（过程重点介绍）导入动物细胞：显微注射法（将基因表达载体提纯，用显微仪注射到受精卵中）（过程重点介绍 ）导入微生物细胞：Ca2处理受体细胞成为感受态细胞，再进行混合。提示： 农杆菌转化法的原理是利用农杆菌（胞内寄生菌）对植物的感染而把目的基因导入受体细胞。四目的基因的检测和鉴定1、分子检测：导入检测 +表达检测导入检测：利用DNA分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的 DNA杂交，看是否有杂交带。表达检测：目的为了检测是否转录出了mRNA ，利用 DNA-mRNA 分子杂交技术，目的基因DNA一条链（作探针）与受体细胞中提取的mRNA 杂交，看是否有杂交带。表达检测：目的为了检测目的基因是否翻译成蛋白质。抗体与蛋白质进行抗原抗体杂交 ，看是否有杂交带。 2 、个体水平的鉴定：进行抗虫、抗病的接种实验，根据其性状判断是否表达。提示： DNA分子杂交技术首先提取受体细胞中的DNA ，然后高温解成单链，再与同位素标记的 DNA探针杂交； 抗原抗体杂交所用到的抗体是用表达出的蛋白质注射动物进行免疫，产生相应的抗体，并提取出而来的精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 10 页学习好资料欢迎下载第 3 节 基因工程的应用教材梳理 ：知识点一植物基因工程的应用植物基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力（如抗除草剂、抗虫、 抗病、 抗干旱和抗盐碱等）以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面。1. 提高抗逆性（1）常用抗虫基因：用于抗虫（杀虫）的基因主要是Bt 毒蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、植物凝集素基因等。（2）常用抗病基因：a. 抗病毒基因有：病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因；b. 抗真菌基因有：几丁质酶基因和抗毒素合成基因（3）其他抗逆基因：环境条件对农作物的生产会造成很大影响，并且这些影响是多方面的，因此，抗逆性基因也有多种多样，如：抗盐碱和干旱的调节细胞渗透压基因、抗冻基因、抗除草剂基因等等。2. 改良植物品质由于人们的食品含有的营养不平衡，不能满足人们对食品的要求，这样，可以通过转基因技术，使植物能够合成某些本来不能合成的物质。如科学家将必需氨基酸含量多的蛋白质编码基因导入植物中，或者改变这些氨基酸合成途径中某种关键酶的活性，以提高氨基酸的含量。知识点二动物基因工程的应用1. 用于提高动物生长速度：由于外援生长激素基因的表达可以使转基因动物生长得更快，将这类基因导入动物体内，以提高动物的生长速率。如：转基因绵羊和转基因鲤鱼。2. 用于改善畜产品的品质：基因工程可用于改善畜产品的品质。如：有些人对牛奶中的乳糖不能完全消化或食用后会出现过敏、腹泻、 恶心等不适症状，科学家将肠乳糖酶基因导入奶牛基因组，这样所获得的牛奶其成分不受影响，但乳糖的含量大大减低。3. 生产药物基因工程不但促进了传统技术的变革，也为人类提供了传统产业难以得到的许多昂贵药品，并已形成基因工程制药业的雏形。目前诸如人胰岛素、人生长激素、人脑激素、干扰素、乙肝疫苗、 蛋白 C、组织血纤维蛋白溶酶原激活剂等数十种基因工程药物已实现商品化。此外，还有促红细胞生成素、白细胞介素2、肾素、心钠素等一大批珍贵药品正处于试用或临床试验阶段。4. 用转基因动物做器官移植的供体：目前，人体移植器官短缺是一个世界性的难题，用其它动物的器官替代，又会出现免疫排斥现象，现在，科学家正试图利用基因工程方法对一些动物的器官进行改造，培育出没有免疫排斥反应的转基因克隆器官。知识点三基因治疗1. 概念 ：基因治疗是把正常基因导入病人体内，使该基因的表达产物发挥功能，从而达到治疗疾病的目的，这是治疗遗传病的最有效的手段。2. 方法 ：体外基因治疗和体内基因治疗体外基因治疗： 先从病人体内获得某种相关细胞，进行培养， 然后在体外完成基因转移，再筛精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 10 页学习好资料欢迎下载选成功转移的细胞扩增培养，最后重新输入患者体内，这种方法叫做体外基因治疗。体内基因治疗：直接向人体组织细胞中转移基因的治疗方法叫做体内基因治疗。说明：对于遗传病的治疗最根本的方法是进行基因替换或修复。基因治疗的最佳时期理论上是受精卵时期，这样可以使个体的每个细胞都含有正常基因，但在现实生活中是不可能的，因为不可能人人在受精卵时期进行基因检查。其次是对患者进行相关细胞的基因替换，如：对于遗传性糖尿病患者，只对胰腺的B细胞进行基因替换，该个体就能正常分泌胰岛素，糖尿病得以治疗； 但这种局部细胞的基因替换，并没有改变其它部位细胞的基因，如精原细胞， 其后代很大可能还会患遗传性糖尿病。教材拓展拓展点一该节内容是对第2 节知识的综合运用，是近几年及今后几年高考的主考点。在学习这部分知识时，要注意以下几点：1. 熟练、灵活掌握第2 节的基础知识，形成系统的、完善的知识体系2. 目的基因来自其他生物，目的基因和受体细胞的基因构成基因重组，这是基因工程的原理。3. 常考知识为基因操作的基本步骤4. 相关知识为DNA的结构和复制、 基因控制蛋白质的合成及对性状的控制、基因突变、 酶的性质和作用、其他生物工程等5. 解决的方法是学好相关知识，达到灵活运用程度，进行知识迁移。拓展点二基因治疗的过程（以镰刀形细胞贫血症的治疗为例）步骤过程获 取正常的血 红蛋白基因用限制性核酸内切酶从人的DNA 分子中切取血红蛋白基因形成重组载体用同一种限制性核酸内切酶在载体DNA上切开一个切口， 用 DNA连接酶将正常血红蛋白基因连接在载体 DNA上，形成重组载体重 组载体的转 化与筛选将携带正常血红蛋白基因的重组载体导入患者的造血干细胞中，并将重组载体插入到染色体。用选择培养基筛选出含重组质粒的造血干细胞。将 含正常血红 蛋白 基因的造血 干细 胞回输给患 者骨髓将携带正常血红蛋白基因的造血干细胞输入患者骨髓中， 此造血干细胞产生含正常血红蛋白的红细胞，以根治镰刀形细胞贫血症拓展点三利用微生物生产药物的优越性所谓利用微生物生产蛋白质类药物，是指将人们需要的某种蛋白质的编码基因，构建成表达载体后导入微生物，然后利用微生物发酵来生产蛋白质类药物。与传统的制药相比有以下优越性：1. 利用活细胞作为表达系统，表达效率高， 无需大型装置和大面积厂房就可以生产出大量药品。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页，共 10 页学习好资料欢迎下载2. 可以解决传统制药中原料来源的不足。例如， 胰岛素是治疗糖尿病患者的药物，一名糖尿病患者每年需用的胰岛素需要从40 头牛或 50 头猪的胰脏中才能提取到。1978 年科学家用2 000 L 大肠杆菌发酵液得到100 g 胰岛素，相当于从1 000 kg猪胰脏中提取的量。又如，生长素是治疗侏儒症患者的药物，治疗一名侏儒症患者每年需要从80 具尸体的脑下垂体中提取生长素。利用基因工程菌发酵生产就不需要从动物或人体上获取原料。3. 降低生产成本，减少生产人员和管理人员。第 4 节蛋白质工程的崛起教材梳理：知识点一：蛋白质工程崛起的缘由基因工程生产的自然界已有的蛋白质已经不能满足人类生产和生活的需求。应该在基因工程的基础上按照人们意愿对基因进行操作，从而生产出人们所需要的蛋白质。知识点二：蛋白质工程的基本原理概念： 以蛋白质分的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类生产和生活的需求。目的：根据人们对蛋白质功能的特定需求对蛋白质的结构进行分子设计最终通过基因来实现。原理： 从预测蛋白质功能 设计预期的蛋白质结构推测应有的氨基酸序列找到相对应的脱氧核糖核苷酸序列合成 DNA 表达出蛋白质。（与基因工程的过程相反）知识点三：蛋白质工程的进展和前景在食品工业、日用品工业方面有着广泛的应用前景，目前来看成功的例子很少。拓展内容 ：一、蛋白质工程与基因工程的比较二、蛋白质组计划与基因组计划的比较精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页，共 10 页