卫校讲稿卫校讲稿- -第三次课第三次课目的要求1 1、掌握细菌生长繁殖的条件。、掌握细菌生长繁殖的条件。2 2、熟悉细菌的代谢产物及其意义。、熟悉细菌的代谢产物及其意义。3 3、了解细菌的人工培养法。、了解细菌的人工培养法。4 4、熟悉常见的细菌变异现象。、熟悉常见的细菌变异现象。5 5、了解细菌变异的意义。、了解细菌变异的意义。 各各种种细细菌菌的的菌菌落落半固体培养基上半固体培养基上穿刺线有或无穿刺线有或无混浊混浊沉淀沉淀菌膜菌膜液体培养基中液体培养基中沉沉淀淀生生长长混混浊浊生生长长菌菌膜膜生生长长三、细菌的人工培养：三、细菌的人工培养：（三）细菌的人工培养的意义（三）细菌的人工培养的意义1 1细菌的鉴定和研究细菌的鉴定和研究2 2传染病的诊断和防治传染病的诊断和防治3 3生物制品的制备生物制品的制备4 4菌种的保存菌种的保存四、细菌的代谢产物及意义四、细菌的代谢产物及意义（一）细菌的分解性代谢产物及意义（一）细菌的分解性代谢产物及意义糖代谢产物和蛋白质代谢产物糖代谢产物和蛋白质代谢产物 意义：利用生物化学方法（生化反应）来鉴意义：利用生物化学方法（生化反应）来鉴别不同细菌别不同细菌 常用方法：糖发酵试验、常用方法：糖发酵试验、 VP VP试验、甲基红试试验、甲基红试验、枸橼酸盐利用试验、吲哚试验、验、枸橼酸盐利用试验、吲哚试验、H H2 2S S产生试验产生试验 大肠埃希菌伤寒沙门菌合成代谢产物与临床意义合成代谢产物与临床意义1、毒素和侵袭性酶：、毒素和侵袭性酶：内外毒素-元凶，侵袭性酶-帮凶。2、热原质、热原质:G-菌多见，即细胞壁中的脂多糖 。3、抗生素：、抗生素：如青霉素。4、维生素：、维生素：大肠埃希菌能产生VitB、VitK。5、色素、色素水溶性色素：铜绿假单胞菌脂溶性色素：金黄色葡萄球菌热原质热原质3班对组织细胞有毒害作用如对组织细胞有毒害作用如透明质明酸酶、血浆凝固透明质明酸酶、血浆凝固酶等。酶等。毒素毒素与酶与酶如葡萄球菌产生的如葡萄球菌产生的金黄色色素、绿脓金黄色色素、绿脓杆菌产生的绿脓素，杆菌产生的绿脓素，可用于鉴别细菌。可用于鉴别细菌。 色色素素柠檬色柠檬色白色白色维生素维生素具抑菌或杀菌具抑菌或杀菌作用，但抑菌作用，但抑菌谱窄，主要用谱窄，主要用于细菌分型于细菌分型 和和流行病的调查。流行病的调查。杀杀 菌菌 或或 抑抑菌菌 作作 用用 ，用用 于于 治治 疗疗感感 染染 性性 疾疾病病如如维维生生素素B B6 6、B B1212、 K K2 2等等 ，可可用用于于治治疗疗维维生生素素缺缺乏乏所致的疾病所致的疾病抗生素抗生素细菌素细菌素五细菌的遗传与变异五细菌的遗传与变异形态结构变异形态结构变异（一）细菌的变异现象（一）细菌的变异现象菌落变异菌落变异毒力变异毒力变异耐药性变异耐药性变异 42-43 42-43 炭疽杆菌炭疽杆菌 失去形成芽胞能力、毒性降低失去形成芽胞能力、毒性降低 10-20 10-20天天 无血清无血清肺炎链球菌肺炎链球菌 失去荚膜失去荚膜 培养基培养基 0.1% 0.1%石碳酸石碳酸变形杆菌变形杆菌 失去鞭毛失去鞭毛 H H O O形态结构变异形态结构变异 3-6% 3-6%食盐食盐鼠疫杆菌鼠疫杆菌 多形态性多形态性( (衰残型衰残型) ) 琼脂培养基琼脂培养基正常形态细菌L型细菌菌落变异菌落变异 光滑型菌落粗糙型菌落 S R在陈旧培养基中长期培养或在有免疫力的人体内毒力变异毒力变异强毒株弱毒株或无毒株牛型结核杆菌卡介苗胆汁、甘油、马铃薯培基13年(230代)少量化学药物、免疫血清或长期人工培养耐药性变异耐药性变异痢疾杆菌依链株(耐药菌株)含链霉素培基长期培养物质基础物质基础染色体：含5000左右个基因质 粒: 含30-100个基因突变方式：突变方式：基因突变、基因转移与重组1、突变突变： 细菌遗传物质结构发生突然而稳定的改变，包括染色体和基因突变。2、基因转移与重组：、基因转移与重组： 转化：受体菌直接摄取供体菌DNA。 溶原性转换：温和噬菌体的DNA整合到细菌的DNA上。 转导：以温和噬菌体为媒介，将供体菌遗传物质转移到受体菌中。 接合：通过性菌毛，将质粒转移给受体菌（使F-菌变为F+菌）。（二）细菌变异的机理（二）细菌变异的机理诊断方面诊断方面治疗方面治疗方面预防方面预防方面基因工程方面基因工程方面（三）细菌变异的意义（三）细菌变异的意义第三节第三节 细菌与外界环境细菌与外界环境2.1 细菌在人体的分布细菌在人体的分布2.2 消毒与灭菌消毒与灭菌2.1 细菌在人体的分布细菌在人体的分布1.1.正常菌群正常菌群：存于机体一定部位具有一定种类和一定数量， 正常情况下对人体有利无害的细菌群。营养作用营养作用-大肠埃希氏菌合成维B和维K。免疫作用免疫作用-细菌细胞成分可促进宿主免疫器官发育与成熟。拮抗作用拮抗作用-大肠埃希氏菌、变形杆菌、肠球菌等正常菌，可抵 抗引起痢疾和伤寒的志贺菌和伤寒沙门菌等病原菌。抗抗 衰衰 老老-双歧杆菌、肠球菌等产生超氧化物歧化酶（SOD） 可分解自由基，起抗衰老的作用。其他作用其他作用 正常菌群正常菌群条件致病菌条件致病菌 特特 定定 条条 件件3.菌群失调菌群失调：正常菌群的种类、数量或比例发生异常。机体免疫力下降离开正常寄居部位抗生素应用不适当2.条件致病菌条件致病菌：正常情况下对人体有利无害，特定 条件下可致病的细菌。特定条件特定条件2.2 消毒与灭菌消毒与灭菌一、基本概念一、基本概念1.1.消消 毒毒: :指杀灭物体上的病原微生物（不包括芽胞和非 病原微生物）的方法。2.2.灭灭 菌菌: :杀灭物体上所有微生物的方法，包括病原微生 物和非病原微生物，包括细菌繁殖体和芽胞。3.防防 腐腐: :防止或抑制细菌生长繁殖的方法。4.无无 菌菌:不含活菌的意思。5.无菌操作无菌操作:防止微生物进入机体或物品的一种操作技术。 二、消毒灭菌的方法二、消毒灭菌的方法物理方法：热力、紫外线、滤过除菌、超声波等。同温，湿热灭菌比干热灭菌效果好。同温，湿热灭菌比干热灭菌效果好。（1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固。）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固。（2）湿热的穿透力比干热大。）湿热的穿透力比干热大。（3）湿热的蒸汽有潜热。）湿热的蒸汽有潜热。原因原因热力灭菌法热力灭菌法热热力力灭灭菌菌法法 干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法焚烧焚烧-灭菌最彻底灭菌最彻底烧灼烧灼-直接用火焰灭菌直接用火焰灭菌干烤干烤-加热加热160-180 2H高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法103.43kpa103.43kpa，1212030分钟煮沸消毒法煮沸消毒法水煮1005分钟(繁殖体)2小时(芽胞)流通蒸汽消毒法流通蒸汽消毒法巴氏消毒法巴氏消毒法间歇蒸汽灭菌法间歇蒸汽灭菌法水蒸汽1001530分钟(繁殖体)反复多次流动蒸汽间歇加热灭菌较低的温度（7130秒）杀灭致病菌高温高温灭菌灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌(normal autoclving)(normal autoclving) 是湿热灭中最好方法，通常在是湿热灭中最好方法，通常在1.05kg/cm2,1.05kg/cm2,的压力下面（此时的压力下面（此时温度温度121121 ）处理）处理151530min30min。 要排冷，否则会形成假压，要排冷，否则会形成假压，虽然压力达到要求，温度却虽然压力达到要求，温度却达不到相应高度，而影响灭达不到相应高度，而影响灭菌效果。菌效果。新新式式高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌锅锅辐射杀菌法辐射杀菌法 紫外线紫外线杀菌机理：杀菌机理：波长波长200300m的紫外线具有杀菌作用的紫外线具有杀菌作用干扰干扰DNA的复制与转录的复制与转录穿透力较弱对人有害穿透力较弱对人有害特特 点：点：应用范围：空气及物体表面消毒应用范围：空气及物体表面消毒、化学方法、化学方法机理：机理： 使菌体蛋白质变性凝固使菌体蛋白质变性凝固 干扰细菌代谢干扰细菌代谢 损伤细菌细胞膜损伤细菌细胞膜滤过除菌滤过除菌超声波除菌超声波除菌影响消毒剂作用的因素影响消毒剂作用的因素（1）消毒剂性质、浓度与作用时间、理化性质消毒剂性质、浓度与作用时间、理化性质。表面活性剂对革兰 氏阳性菌的灭菌效果比对革兰氏阴性菌好，龙胆紫对葡萄球菌 的效果特别强。（2）微生物污染程度微生物污染程度。污染越严重，消毒就越困难，须加大消毒剂 浓度、延长消毒作用时间。（3）微生物种类和菌龄微生物种类和菌龄。芽胞抵抗力最强，幼龄菌比老龄菌敏感。（4）环境因素环境因素。细菌和有机物特别是蛋白质混在一起时，某些消毒 剂效果受明显影响。消毒皮肤及器械前应先清洁再消毒。（5）温度、湿度、酸碱度温度、湿度、酸碱度。温度升高消毒加快。湿度对减弱气体消 毒剂效果。不同试剂所需酸碱度不同。季胺盐类如戊二醛碱性 环境中效果较好；酚类和次氯酸盐药剂酸性环境中效果佳。（6）化学拮抗物化学拮抗物。阴离子表面活性剂可降低季胺盐类和洗比泰消毒 作用，故不能将新洁尔灭等消毒剂与肥皂、阴离子洗涤剂合用。 次氯酸盐和过氧乙酸会被硫代硫酸钠中和，金属离子对消毒效 果也有影响。常规的消毒剂常规的消毒剂第三节第三节 细菌的致病性与感染细菌的致病性与感染3.1 病原菌的致病因素病原菌的致病因素3.2 感染的发生与发展感染的发生与发展3.1 病原菌的致病因素病原菌的致病因素一、基本概念一、基本概念病原菌引起传染的能力，取决于它们的致病性和毒力。1.1.致病性致病性：病原菌在特定寄主体内定居、增殖并引起疾病的性质，同一种病原菌的不同菌株的病原性存在差异，致病性是菌株的特征之一。 要点：病原菌的致病性是对特定的宿主而言的。 不同病原菌对寄主机体的病理过程不同。2.2.毒毒 力力：病原菌致病力的强弱程度，即致病性的程度。各种病原菌的毒力不同，同一种细菌也有强毒、弱毒及无毒株之分。 毒力毒力 侵袭力侵袭力 菌体表面结构菌体表面结构 侵袭性酶（胞外酶）侵袭性酶（胞外酶） 粘附因子（菌毛等）粘附因子（菌毛等） 荚膜、微荚膜或类似结构荚膜、微荚膜或类似结构血浆凝固酶血浆凝固酶 透明质酸酶透明质酸酶链激酶链激酶毒毒 素素 内毒素内毒素 外毒素外毒素二、构成病原菌毒力的因素二、构成病原菌毒力的因素 （一）侵袭力（一）侵袭力(invasiveness) 定义：病原菌突破动物机体的防御屏障，并能在机体内定居、生长繁殖和蔓延扩散的能力。构成因素：1菌毛等粘附因子菌毛等粘附因子：细菌引起感染一般需先粘附在宿主的呼吸道、消化道或泌尿生殖道等粘膜上皮细胞上，以免被呼吸道的纤毛运动、肠蠕动或粘液分泌等活动所清除。然后在局部定居，进而繁殖扩散。粘附作用是细菌引起感染的首要条件。粘附因子或粘附素：具有粘附作用的细菌结构统称为粘附因子。 G-：菌毛（产毒性大肠杆菌）粘附因子 G+：菌体表面的毛发样突出物(A群链球菌膜磷壁酸)菌毛的粘附作用具有组织特异性。如：产毒性大肠杆菌粘附于菌毛的粘附作用具有组织特异性。如：产毒性大肠杆菌粘附于小肠粘膜而志贺氏菌粘附于结肠粘膜。小肠粘膜而志贺氏菌粘附于结肠粘膜。细菌的粘附性与其致病性密切相关。细菌粘附体表成粘膜，有细菌的粘附性与其致病性密切相关。细菌粘附体表成粘膜，有的穿过细胞膜进入细胞内繁殖，有的进入深层组织或血液向全的穿过细胞膜进入细胞内繁殖，有的进入深层组织或血液向全身扩散，引起深部或全身感染。身扩散，引起深部或全身感染。2荚膜、微荚膜或类似结构：荚膜具有抗吞噬和体液中杀菌物荚膜、微荚膜或类似结构：荚膜具有抗吞噬和体液中杀菌物质的作用，使细菌能留在宿体内迅速繁殖和扩散。质的作用，使细菌能留在宿体内迅速繁殖和扩散。此外，溶血性链球菌的此外，溶血性链球菌的M-蛋白质、大肠杆菌的蛋白质、大肠杆菌的K抗原和伤寒杆菌抗原和伤寒杆菌的的Vi抗原等。抗原等。 3侵袭性酶侵袭性酶(胞外酶）：胞外酶）：A 透明质酸酶透明质酸酶:（葡萄球菌、溶血性链球菌）（葡萄球菌、溶血性链球菌）,能分解结缔组能分解结缔组 织的透明质酸织的透明质酸,细胞间隙扩大细胞间隙扩大,通透性增高通透性增高,有利于细菌在组有利于细菌在组 织内蔓延扩散。织内蔓延扩散。B 纤维蛋白溶酶纤维蛋白溶酶（链激酶）（链激酶）: （如葡萄球菌、链球菌）（如葡萄球菌、链球菌）,该酶该酶 能激活溶纤维蛋白酶原为纤维蛋白酶，纤维蛋白迅速溶能激活溶纤维蛋白酶原为纤维蛋白酶，纤维蛋白迅速溶 解，从而解除病原菌被局限的状态，有利于在组织中扩散。解，从而解除病原菌被局限的状态，有利于在组织中扩散。C 胶原酶胶原酶：（如魏氏梭菌），能分解肌肉和网状结缔组织的：（如魏氏梭菌），能分解肌肉和网状结缔组织的 胶原，使肌肉崩解、软化和坏死，造成病原菌侵袭与蔓延。胶原，使肌肉崩解、软化和坏死，造成病原菌侵袭与蔓延。D 血浆凝固酶血浆凝固酶：（金黄色葡萄球菌）：（金黄色葡萄球菌）,加速血浆凝固，抗吞噬。加速血浆凝固，抗吞噬。E 卵磷酯酶卵磷酯酶：（魏氏梭菌），能产生此种酶。分解细胞膜上：（魏氏梭菌），能产生此种酶。分解细胞膜上 的卵磷酯，导致组织细胞崩解和红细胞溶解。的卵磷酯，导致组织细胞崩解和红细胞溶解。F DNA酶酶：(如链球菌如链球菌),在水解动物组织时释放出粘稠的在水解动物组织时释放出粘稠的 DNA，从而使脓液变稀，有利于进一步扩散。，从而使脓液变稀，有利于进一步扩散。(二二) 毒素毒素(toxin) 定义：生物在正常代谢过程中所产生的具有抗原性的有毒物质，定义：生物在正常代谢过程中所产生的具有抗原性的有毒物质， 可引起宿主机体不同程度的病理反应。可引起宿主机体不同程度的病理反应。1.外毒素外毒素(exotoxin)：某些某些G+菌病原菌和少数菌病原菌和少数G-菌（志贺氏菌、菌（志贺氏菌、 产毒性大肠杆菌、霍乱弧菌）在生长繁殖过程中所产生，并分产毒性大肠杆菌、霍乱弧菌）在生长繁殖过程中所产生，并分 泌到周围环境中的一种毒性代谢产物。毒性极强。如泌到周围环境中的一种毒性代谢产物。毒性极强。如1mgA型肉型肉 毒素晶体，可杀死毒素晶体，可杀死2000万只小白鼠。万只小白鼠。2.内毒素内毒素(endotoxin)：内毒素是大多数内毒素是大多数G-菌细胞壁的结构成菌细胞壁的结构成 分，在菌体崩解时释放出来。分，在菌体崩解时释放出来。类毒素类毒素外外毒毒素素抗抗毒毒素素甲醛脱毒甲醛脱毒刺激刺激刺激刺刺 激激中中 和和类毒素：类毒素：由外毒素经由外毒素经0.3-0.4%甲醛溶液处理，使其毒性甲醛溶液处理，使其毒性 完全丧失，而保留其抗原性，完全丧失，而保留其抗原性，可用于免疫预防。可用于免疫预防。抗毒素：抗毒素：由外毒素或类毒素刺激机体产生的能中和外毒由外毒素或类毒素刺激机体产生的能中和外毒 素或类毒素的一类抗体。素或类毒素的一类抗体。内毒素与外毒素的比较内毒素与外毒素的比较种类种类外毒素外毒素内毒素内毒素来源革兰阳性菌和部分革兰阴性菌革兰阴性菌释放方式活菌分泌或细菌裂解后释放细菌裂解后释放化学成分蛋白质脂多糖稳定性不稳定，60-8030分钟被破坏稳定，1602-4小时破坏免疫原性强，刺激机体形成抗毒素；经甲醛脱毒后能形成类毒素弱,刺激机体产生抗体但作用弱；甲醛处理后不能形成类毒素毒性作用强，对组织器官有选择性毒害作用，引起特殊临床表现较弱,各种内毒素作用大致相同，引起休克，发热，DIC等三、毒力的测定三、毒力的测定 毒力大小单位毒力大小单位 最小致死量、半数致死量、最小致死量、半数致死量、 最小感染量、半数感染量。最小感染量、半数感染量。最小致死量最小致死量MLD：能使特定实验动物于感染后一定：能使特定实验动物于感染后一定 时限内死亡的最小活菌量或毒素量。时限内死亡的最小活菌量或毒素量。半数致死量半数致死量LD50：能使半数实验动物于感染后一定：能使半数实验动物于感染后一定 时限内死亡的活菌量或毒素量。时限内死亡的活菌量或毒素量。最小感染量最小感染量 MID：引起特定实验动物传染最小活菌量。：引起特定实验动物传染最小活菌量。半数感染量半数感染量ID50：引起特定实验动物半数传染活菌量。：引起特定实验动物半数传染活菌量。3.2 感染的发生与发展感染的发生与发展一、感染概念与必要条件一、感染概念与必要条件1.概念感染感染(infection)：通常称为传染：通常称为传染，指，指病原微生物侵入动物机体， 在一定部位生长繁殖，从而引起机体病理现象的总和。2.感染发生的必要条件病原菌 易感动物 外部环境 病原菌须具有足够毒力、一定数量、适宜的侵入门户足够毒力、一定数量、适宜的侵入门户等3个条件。病病原原菌菌来来源源方方式式与与途途径径患者、带菌者、患病或带菌动物体内正常菌群转化为条件致病菌呼吸道感染、消化道感染、创伤感染、接触感染、节肢动物叮咬感染、多途径感染内源性感染内源性感染外源性感染外源性感染二、传染的表现形式二、传染的表现形式表现形式表现形式 条条 件件 病病 症症显性传染显性传染（传染病）病原菌毒力机体抵抗力病原菌繁殖机体受损临床症状明显隐性传染隐性传染病原菌的毒力较弱机体有一定抵抗力病原菌有限繁殖机体受损较轻无或仅轻微临床症状潜伏感染潜伏感染病原菌毒力=机体抵抗力病原菌长期潜伏无临床症状一定条件下可致病不感染不感染机体抵抗力病原菌毒力病原菌被机体清除无临床症状带菌现象带菌现象(carrier phewomenon)：隐性传染或传染病痊愈后，病原菌在动物机体内继续存在，并不断排出体外，呈现带菌状态的动物为带菌者(carrier) 。 三、传染的分类三、传染的分类1.1.局部传染局部传染(local infection) 病原菌侵入动物机体后，局限于一定部位生长繁殖和毒害动物 机体，称为局部传染。2.2.全身传染全身传染(systenic ifection) 毒血症(toxemia)：病原菌只在侵入的局部组织中生长繁殖且 不进入血流，其有毒产物（外毒素）进入血流引起全身症状。 菌血症(bacteremia)：病原菌由局部侵入血流，但未在血流中 生长繁殖，在血流中持续存在，称为菌血症。 败血症(septicemia)：病原菌进入血流后，并在血流和全身组 织器官中大量生长繁殖，引起显著的全身中毒症状。 脓毒血症(pyemia)：化脓性病原菌进入血流，在血流中生长繁 殖，引起多个组织器官形成化脓病灶，称为脓毒血症。传传染染部部位位临床病情缓急临床病情缓急急性感染急性感染（acute infection） 突然发作，病程较短，一般是数日至数周，病原 菌从体内消失。如:霍乱弧菌、产毒性大肠杆菌。慢性感染慢性感染(chronic infection) 病程缓慢，常持续数月至数年。细胞内寄生 的病原菌往往引起慢性感染。如：结核杆菌。