HIV抗体检测实验室技术规程天津市CDC HIV确证中心实验室 郑敏娜 HIVHIV病毒感染人体过程及免疫学机制病毒感染人体过程及免疫学机制o明确明确HIV感染者诊断感染者诊断o控制传播控制传播o及早医学干预及早医学干预o血液筛查血液筛查o流行病学调查、高危人群监测流行病学调查、高危人群监测o开展开展VCT的根底的根底o职业保护职业保护HIV抗体检测在艾滋病防治中的作用抗体检测在艾滋病防治中的作用主要内容oHIV抗体检测的相关标准性文件oHIV抗体检测的方法和本卷须知oHIV抗体确证实验的相关规程和结果解释o目前我市HIV筛查实验室中存在的问题HIV抗体检测的相关标准性文件o?医疗机构临床实验室管理方法?卫医发200673号 o?全国艾滋病检测工作管理方法?卫疾控发2006218号 o?全国艾滋病检测技术标准(2021年版)?HIV抗体检测的相关标准性文件o?全国艾滋病检测工作管理方法?卫疾控发2006218号 o检测工作要求第十二条艾滋病检测实验室应在规定的职能范围内开展检测工作，遵守国家法律、法规和有关标准。检测技术及程序应符合?全国艾滋病检测技术标准?的要求。HIV抗体检测的方法和本卷须知oHIV抗体检测的主要方法金标准o包括初筛实验和确证实验 p初筛实验:p试剂必须经国家食品药品监督管理局注册批准，在有效期内的，批批检合格p敏感性和特异性好：p方法包括：ELISA，化学发光法和快速检测法免疫层析，颗粒凝集等方法p样本：血清、血浆；干血斑；唾液；尿液p HIV抗体检测的方法和本卷须知快速免疫层析明胶颗粒凝集法PAHIV ELISA试剂质量评估：1.严格遵照试剂说明书进行试验检测2.正确使用仪器设备3.正确判读试验结果4.作好实验记录试验操作本卷须知HIVHIV抗体检测技术要求抗体检测技术要求建立标准操作程序建立标准操作程序禁止肉眼判读！禁止肉眼判读！保证酶标仪，洗板机正常运转保证酶标仪，洗板机正常运转保证加样器准确保证加样器准确选择高质量的与加样器配套的选择高质量的与加样器配套的TIP头头使用有效期内的试剂使用有效期内的试剂保证样品质量保证样品质量影响影响ELISAELISA测定的因素测定的因素o试剂盒的因素：妥善保存试剂试剂盒的因素：妥善保存试剂o 在有效期内使用在有效期内使用o试验操作试验操作o 形成良好的操作习惯：加样时应将所形成良好的操作习惯：加样时应将所加物加在加物加在ELISAELISA板孔的底部，防止加板孔的底部，防止加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡。产生气泡。o 严格按试剂说明书操作严格按试剂说明书操作: :空白孔不空白孔不加样品和酶标试剂加样品和酶标试剂o 操作过程中集中精力：防止加样错操作过程中集中精力：防止加样错误误本卷须知本卷须知o保证实验室温度，室温过低有可能造成吸光度值偏低。o ELISA试验的敏感性很高，如果操作不当很容易出现非特异性反响。在操作过程中，尤其应注意洗涤过程。洗涤彻底可减少假阳性的时机。o进行ELISA试验时，必须用酶标仪进行测定，不得目测结果。使用酶标仪时，要防止酶标孔内产生气泡，影响判读结果。ELISA操作中的本卷须知操作中的本卷须知o试剂准备试剂准备o加样加样o温育温育o洗板洗板o显色显色o比色比色操作示范请看教学片操作示范请看教学片ELISA试验假阳性产生原因？o样品加错位置，标本搞错样品加错位置，标本搞错o洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔洗板机设置不当，洗板时洗涤液溢出，污染其它孔o洗板机内部管道有真菌生长洗板机内部管道有真菌生长o实验中，实际孵育时间过长，温度过高实验中，实际孵育时间过长，温度过高o待测标本溶血或含有血细胞。待测标本溶血或含有血细胞。 o待测标本长菌或其它原因混浊。待测标本长菌或其它原因混浊。o其它原因：与试验操作无关其它原因：与试验操作无关HIV抗体筛查和复检的流程与2004版检测标准的不同报告HIV抗体检测阴性HIV感染产妇所生婴幼儿的抗体检测HIVHIV抗体确证实验的相关规程和结果解释抗体确证实验的相关规程和结果解释o复检阳性或一阴一阳的样本 确认实验 送确认前，应核对身份，补充个人信息姓名，身份证号等填写HIV抗体复检检测单样本“三级包装第一层：带盖的试管第二层：防水，防漏第三层：包装箱内附缓冲材料HIV抗体确认实验o包括： 免疫印迹实验免疫印迹实验(WB) 条带免疫试验条带免疫试验(LIA) 免疫荧光试验免疫荧光试验(IFA) 放射免疫沉淀试验放射免疫沉淀试验(RIPA)HIV抗体确认实验结果抗体确认实验结果a 强阳性对照（强阳性对照（HIV-1和和HIV-2）b弱阳性对照（弱阳性对照（HIV-1）c阴性对照阴性对照d典型的典型的HIV-2血清阳性反应血清阳性反应 a b c d a b c dgp160gp160gp120gp120 p66 p66p55p55p51 p51 gp41gp41p39p39 p31 p31P24P24p17p17 血清对照血清对照血清对照血清对照HIV-2HIV-2特异带特异带特异带特异带HIV抗体确认实验结果抗体确认实验结果HIV抗体确证实验的流程HIV抗体检测的样本保存o用于抗体和抗原检测的血清和血浆样本： 1周内 2-8保存 1周 -20 保存o筛查阳性样本：送确证o筛查阴性样本：根据具体情况，至少1-2个月o确证样品：保存10年以上目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o实验室布局不合理，没有严格分区；没有标识o 应设严格分区污染区、半污染区和洁净区；生物平安标识o个别实验室设备不全，没有平安柜o仪器没有定期校准o 酶标仪/洗板机、加样器，温度计，高压灭菌器，生物平安柜每年校准，每季度期间核查o没有HIV实验室生物平安管理制度和SOPo 实验活动的根本依据，必须建立，每年应进行检查修订，并有记录目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o没有质控记录：很多实验室都有o人员流动性大，经培训的专业技术人员严重缺乏，局部人员未经专业技术培训就上岗o 保证实验室负责人和主要技术 人员的稳定，两年一培训，考核合格，持证上岗o实验室技术人员生物平安意识淡薄o 增强平安意识，做好防护，保护自身平安o实验室原始记录不标准，缺乏可溯源性o 应表达加样步骤和位置；试剂厂家、批号、效期，检测人和复核人目前我市HIV筛查实验室中存在的问题o复检阳性结果的报告问题o 筛查实验阴性直接出报告；复检后为阳性或一阴一阳的样本报告为“HIV抗体代确证，用“HIV抗体复检检测单进行报告o送错样本o 认真核对样本，补充个人信息，必要时采集第二份血o质控品的使用时限o -20 有效期内均可使用；解冻后的1周内用完o送检样本包装不合格，没有送检单HIV复检检测单o阴性样本的保存问题o 建议至少保存1-2月HIV确证结果的反响、解释和报告o一般5个工作日出具结果，国家?标准?是10天o第一时间上传到网报系统o结果查询 24333419oHIV-1抗体检测不确定结果的解释