地中海贫血检测相关问题地中海贫血检测相关问题 -地贫基因缺失示意图- 3.7- 4.2-SEA 22 112211 1 1 地贫的基因型与表型Normal (/) 正常正常+ thal trait(/-3.7)(/-4.2) 静止型单一静止型单一基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅临床无任何症状，一般血液学检查无异样，仅平均红细胞体积平均红细胞体积(MCV) (MCV) 位于正常值下限。出生位于正常值下限。出生时脐带血时脐带血HbHb Bart Barts s 可达可达1%-2%1%-2%，但很快消失。，但很快消失。地贫的基因型与表现型Hb H disease(- 3.7/-SEA)(- 4.2/-SEA)o Thal trait( /-SEA)( - / - ) 标准型标准型2个个基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大临床无症状，血液学检查出现轻微贫血，红细胞大小不均一，小不均一，平均红细胞体积平均红细胞体积(MCV) (MCV) 及平均血红蛋白及平均血红蛋白含量含量(MCH)(MCH)轻度下降。出生时脐带血轻度下降。出生时脐带血HbHb Bart Barts s 可可达达5%-15%5%-15%血红蛋白血红蛋白H病病3个个基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能肝脾肿大，中度贫血。肝脾肿大，中度贫血。HbHHbH含量较高含量较高（0.8%-40%0.8%-40%），易发生溶血，有些病例需不定期输血，重者需切脾易发生溶血，有些病例需不定期输血，重者需切脾。a地贫的基因型与表现型Hb Barts Hydrops(-SEA/-SEA) Hb Barts胎儿水肿综合症胎儿水肿综合症 4个个 基因缺失或丧失功能基因缺失或丧失功能患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水患胎于妊娠晚期或产后数小时内死亡，全身水肿，肝脾肿大肿，肝脾肿大，可有四肢和外生殖器畸形，可有四肢和外生殖器畸形。由。由于胎儿无法合成于胎儿无法合成 亚基，脐血血红蛋白亚基，脐血血红蛋白（ Hb Barts ， 4）含量高含量高（80%-90%80%-90%）。HbHb Constant Spring ( Constant Spring (HbHb CS) CS) 基因突变：基因突变：基因突变：基因突变： 2 2珠蛋白基因珠蛋白基因珠蛋白基因珠蛋白基因142142位终止密码子位终止密码子位终止密码子位终止密码子TAATAACAACAA突突突突 变变变变，其其其其mRNAmRNA不不不不稳稳稳稳定定定定，降降降降解解解解加加加加速速速速，导导导导致致致致HbHb CSCS合合合合成成成成减减减减少少少少， HbHb CS CS 在在在在功功功功能能能能上上上上相相相相当当当当于于于于一一一一个个个个-地地地地中中中中海海海海贫贫贫贫血血血血2 2 2 2基因基因基因基因。 Hb Quong Sze (Hb QS) 基因突变：基因突变： 2珠蛋白基因珠蛋白基因125 位密码子位密码子CTGCCG突突 变，导致变，导致Hb QS ( 125(H8)Leu Pro)。 Hb QS高度不稳定，合成后迅速降解。高度不稳定，合成后迅速降解。n nCodonCodon 41-42 41-42（ TCTTTCTT）n n IVS-II-654 IVS-II-654 （CTCT）n nCodonCodon 17 17 （ A ATT） n n-28-28（ A ATT） n nCodonCodon 71-72 71-72（ +A+A） n nCodonCodon 26 26 （ GGA A）常见的基因突变类型：常见的基因突变类型：n nCodonCodon 43 43（ GG）n nCodonCodon 27/28 27/28 （）n nIVS-I-1IVS-I-1 （GGA A）n nIVS-I-5IVS-I-5 （GG）2011第一次地贫基因检验第一次地贫基因检验EQA一、背景：一、背景： 1 1、广西与卫生部合作项目，开展地贫防治工程；、广西与卫生部合作项目，开展地贫防治工程； 2 2、基因检测在指导有地贫携带基因夫妇进行产、基因检测在指导有地贫携带基因夫妇进行产前检查，防止重度地贫孩子出生方面具有重要意前检查，防止重度地贫孩子出生方面具有重要意义。已建立三大地贫检测中心。义。已建立三大地贫检测中心。二、目的：了解广西各医疗机构开展地贫基因检测二、目的：了解广西各医疗机构开展地贫基因检测的质量情况，进一步规范地贫基因检测、保证质的质量情况，进一步规范地贫基因检测、保证质量。量。三、参加实验室：广西各级医疗机构、人口服务中心三、参加实验室：广西各级医疗机构、人口服务中心共共2323个实验室（调查摸底个实验室（调查摸底3434家，报名家，报名2525家，已发家，已发质控品，自愿退出质控品，自愿退出2 2家）。家）。四、质控品：选取已确诊地贫接收治疗患儿，治疗时四、质控品：选取已确诊地贫接收治疗患儿，治疗时抽取的全血，用枸橼酸钠抗凝，交公司分装加工成抽取的全血，用枸橼酸钠抗凝，交公司分装加工成质控品，每支质控品，每支0.50.5毫升。样本冻于毫升。样本冻于-20-20，低于，低于4 4运送到各实验室。运送到各实验室。五、质控品发放：共发放五、质控品发放：共发放1010个血样（其中个血样（其中-地中海贫地中海贫血基因分析和血基因分析和-地中海贫血基因分析各地中海贫血基因分析各5 5个血样，个血样，不同实验室收到的血样不完全相同，避免抄袭结果。不同实验室收到的血样不完全相同，避免抄袭结果。每个病人的血样均留足备份保存于每个病人的血样均留足备份保存于-80-80，用作破，用作破损后的补发和参考实验室确定参考结果。损后的补发和参考实验室确定参考结果。六、检测要求：六、检测要求：1 1、-地中海贫血基因分析：包括中国人群常见的东南亚缺失（地中海贫血基因分析：包括中国人群常见的东南亚缺失（- -SEASEA）、右侧缺失（）、右侧缺失（-3.7-3.7）、左侧缺失（）、左侧缺失（-4.2-4.2）三种缺失型基）三种缺失型基因检测，以及因检测，以及HbHb WS, WS, HbHb QS, QS, HbHb CS CS三种三种三种三种22珠蛋白基因突变的珠蛋白基因突变的珠蛋白基因突变的珠蛋白基因突变的检测。检测。检测。检测。 2 2、-地中海贫血基因分析：包括中国人群常见的地中海贫血基因分析：包括中国人群常见的8 8个位点突变个位点突变CD41-42-TCCT(41-42M)CD41-42-TCCT(41-42M)、IVS-2-654 CIVS-2-654 C变变T(654M)T(654M)、CD17 ACD17 A变变T T (17M)(17M)、-28 A-28 A变变G (28M)G (28M)、CD26 GCD26 G变变A (A (EMEM) )、CD71-72CD71-72加加A A (71-72M)(71-72M)、CD43 GCD43 G变变T (43M)T (43M)、-29 A-29 A变变G (29M)G (29M)的检测，以及少的检测，以及少见的见的9 9个位点突变、个位点突变、CD14-15CD14-15加加G(14-15M)G(14-15M)、CD27-28CD27-28加加C(27-C(27-28M)28M)、-32 C-32 C变变A(32M)A(32M)、-30 T-30 T变变C(30M)C(30M)、IVS-1-1 GIVS-1-1 G变变T(IVS-1-T(IVS-1-1M)1M)、IVS-1-5 GIVS-1-5 G变变C(IVS-1-5M)C(IVS-1-5M)、CD31CD31减减C(31M)C(31M)、CAP-40-43-CAP-40-43-AACC)(CAPM)AACC)(CAPM)、起始密码子、起始密码子ATGATG变变AGG(IntMAGG(IntM) )的检测的检测 。七、评价方法： 各样本的参考答案由专家组根据参评实验室检测结果、参考实验室检测结果和患儿病历资料确定，有异议时可取出血样再次检测。参考实验室名单： 广西医科大学儿科实验室儿科实验室 自治区妇女儿童医院优生遗传科实验室 自治区人民医院PCR实验室 解放军303医院血液科PCR实验室八、本次质评发现的问题：八、本次质评发现的问题：（一）（一）a-a-地贫地贫 ：1 1、有一家实验室完全错误，参考答案为、有一家实验室完全错误，参考答案为 -SEA/-SEA/cscs的标本，做成了的标本，做成了“ “/” ”。2 2、7 7家实验室未做家实验室未做22珠蛋白基因突变的检测珠蛋白基因突变的检测珠蛋白基因突变的检测珠蛋白基因突变的检测 ，导致所涉及的三，导致所涉及的三个样本个样本CSCS突变未检出。突变未检出。3 3、报告格式不规范：参考答案为、报告格式不规范：参考答案为-SEA/-SEA/的标本，的标本，其他格式有：其他格式有：“ “/-SEA ”/-SEA ”， “ “-SEA/-SEA/ ” ”，“ “-/-/” ”，“ “东南亚缺失型东南亚缺失型 地贫地贫-1 ”-1 ”，“ “1.1.检出东南亚缺失型检出东南亚缺失型-地中海贫血地中海贫血 2.2.未检出未检出-3.7-3.7，-4.2-4.2缺缺失型失型-地中海贫血地中海贫血 3.3.未检出未检出QS,CS,WSQS,CS,WS点突变点突变 ” ”（二）（二）-地贫地贫 ：1 1、有一家实验室两个标本检测错误，参考答案为、有一家实验室两个标本检测错误，参考答案为“ “28M/28M”28M/28M”的报告为的报告为“ “71-72/71-72”71-72/71-72”，参考答案为，参考答案为“ “43M/71-72M”43M/71-72M”的报告为的报告为“ “71-72M/n”;71-72M/n”;2 2、另一家实验室参考答案为、另一家实验室参考答案为“ “28M/71-72M”28M/71-72M”的报告为的报告为“ “- -28/-28”28/-28”；3 3、报告格式混乱，参考答案为、报告格式混乱，参考答案为“ “28M/28M”28M/28M”的报告格式有：的报告格式有： “ “-28m/-28m ”-28m/-28m ”，“ “-28/-28 ”-28/-28 ”，“ “-28N-28N位点突变纯合子位点突变纯合子 ” ”，“ “-28-28纯合子纯合子 ” ”，“ “CD28”CD28”，“ “2828位点突变（纯合子）位点突变（纯合子）” ”， ” ” 珠蛋白基因珠蛋白基因2828位点突变纯合子，其余位点未见突变位点突变纯合子，其余位点未见突变” ”。九、提醒：1、地贫基因检测不同于其他检验项目，要求100%准确。2、目前检测的突变为中国人常见已知突变，覆盖90%，检测最好不遗漏3、报告格式需要规范。遵循原则：信息完整，表述规范，尽量简洁。4、室内质控。谢谢！