学习必备欢迎下载选修 1 基础知识点背诵果酒和果醋和制作一、果酒制作1原理： 菌种： 酵母菌， 属于真核生物， 新陈代谢类型： 异养兼性厌氧型，有氧时， 呼吸的反应式为：C6H12O66O2 6CO26H2O；无氧时，呼吸的反应式为：C6H12O6 2C2H5OH2CO2 2条件：繁殖最适温度200C 左右，酒精发酵一般控制在18-250C （传统发酵技术所使用的酵母菌的来源）3菌种来源：。：。：菌菌种分离获得得纯净的酵母人工培养型酵母菌附着于葡萄皮上的野生自然发酵现在工厂化生产果酒，为提高果酒的品质，更好地抑制其它微生物的生长，采取的措施是直接在果汁中加入人工培养的酵母菌。4实验设计流程图挑选葡萄冲洗榨汁酒精发酵醋酸发酵 _ 果酒果醋5根据教材P4 操作提示设计实验步骤及装置。充气口作用向发酵瓶内充入氧气；排气口作用酒精发酵时排出二氧化碳；出料口作用用来取样。排气口要通过一个长而弯曲的胶管与瓶身连接，其目的是防止空气中微生物的污染使用该装置 制酒 时，应将充气口关闭 ；制醋 时，应将充气口打开 。6实验结果分析与评价：可通过嗅觉和品尝初步鉴定，并用重铬酸钾检验酒精存在。可观察到的现象为橙色变成灰绿色二、果醋的制作：1原理：菌种：醋酸菌，属于原核生物，新陈代谢类为异养需养型醋酸生成反应式是_C2H5OH+O2CH3COOH+H2O 2条件：最适合温度为30-350C，需要充足的氧气。3菌种来源：到生产食醋的工厂或 菌种保藏中心购买。4设计实验流程及操作步骤：果酒制成以后， 在发酵液中加入醋酸菌或醋曲，然后将装置转移至30-350C 条件下发酵， 适时向发酵液中充入O2。如果没有充气装置，可以将瓶盖打开，在瓶盖上纱布，以减少空气中尘土污染。三、操作过程应注意的问题（1）为防止发酵液被污染，发酵瓶要用体积分数为70% 的酒精消毒。精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页，共 12 页学习必备欢迎下载（2）葡萄汁装入发酵瓶时，要留出大约 1/3 的空间。（3）制作葡萄酒时将温度严格控制在18-250C，时间控制在10-12d 左右， 可通过出料口对发酵的情况进行及时的监测。（4）制葡萄醋的过程中，将温度严格控制在30-350C，时间控制在7-8d ，并注意适时通过充气口 充气。【疑难点拨 】1、 认为应该先冲洗葡萄还是先除去枝梗？为什么？应该先冲洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗时引起葡萄破损，增加被杂菌污染的机会。2、 认为应该从哪些方面防止发酵液被污染？需要从发酵制作的过程进行全面的考虑，因为操作的每一步都可能混入杂菌。例如：榨汁机、发酵装置要清洗干净；每次排气时只需拧松瓶盖、不要完全揭开瓶盖等。3. 制葡萄酒时，为什么要将温度控制在1825 ？制葡萄醋时，为什么要将温度控制在3035 ？答：温度是酵母菌生长和发酵的重要条件。20 左右最适合酵母菌繁殖。因此需要将温度控制在其最适温度范围内。而醋酸菌是嗜温菌，最适生长温度为3035 ，因此要将温度控制在3035 。4. 制葡萄醋时，为什么要适时通过充气口充气？答：醋酸菌是好氧菌，在将酒精变为醋酸时需要氧的参与，因此要适时向发酵液中充气。腐乳的制作一、腐乳制作的原理1腐乳的发酵有多种微生物的协同作用，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。它是一种丝状真菌，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上。新陈代谢类型是异养需氧型。2 毛霉等微生物产生的蛋白酶可以将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可以将脂肪水解成甘油和脂肪酸。3现代的腐乳生产是在严格的无菌条件下，将优良毛霉菌种直接接种在豆腐上，这样可以避免其他菌种的污染，保证产品的质量。二、腐乳制作的实验流程：让豆腐长出毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制。三、实验材料含水量 70%的豆腐，粽叶，盘子，盐，黄酒，米酒，糖，香辛料等，广口玻璃瓶，高压锅。四、实验步骤1将豆腐切实3cm3cm1cm 若干块2豆腐块放在铺有干粽叶的盘内，每块豆腐等距离排放，豆腐上再铺干净粽叶，再用保鲜膜包裹。3将平盘放在温度为15-180C 的地方，毛霉逐渐生长，大约5d 后，豆腐表面丛生直立菌丝。4当毛霉生长旺盛，呈淡黄色时，去除保鲜膜及粽叶，散热及水分，同时散去霉味约36h。5豆腐凉透后，将豆腐间的菌丝拉断，整齐排在容器内，准备腌制。6长满毛霉的豆腐块（以下称毛坯）分层摆放，分层加盐，并随层高而增加盐量，在瓶口表面铺盐要厚一些，以防止其他微生物污染，约腌制8d。7将黄酒、米酒和糖、香辛料等混合制成卤汤。卤汤酒精含量控制在12%为宜。8广口玻璃瓶刷洗干净，用高压锅在1000C 蒸汽灭菌30min ，将腐乳成坯摆入瓶中，加入卤汤和辅料后，将瓶口用酒精灯加热灭菌，用胶条密封，常温下，六个月即可以成熟。【疑难点拨】1王致和为什么要撒许多盐，将长毛的豆腐腌起来？盐在该过程中起什么作用？精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页，共 12 页学习必备欢迎下载盐能防止杂菌污染，避免豆腐腐败。盐能抑制多种微生物的生长。2配制卤汤时，一般将酒精含量控制在12% 左右，过高过低都不行，为什么？酒精含量的高低与腐乳后期发酵时间的长短有很大关系。酒精含量越高，对蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延长；酒精含量过低， 蛋白酶的活性高，加快蛋白质的水解，杂菌繁殖快，豆腐易腐败，难以成块。3. 豆腐坯用食盐腌制，其作用是什么？渗透盐分，析出水分给腐乳以必要的咸味防止毛霉继续生长和污染的杂菌繁殖浸提毛霉菌丝上的蛋白酶4. 腐乳在酿造后期发酵中添加多量酒液的目的是什么？防止杂菌污染以防腐与有机酸结合形成酯，由于酒中特别是黄酒中含有酵母茼，经发酵可产生醇，并与有机酸结合形成酯，赋予腐乳风味利于后期发酵5. 卤汤中香辛料的作用是什么？调味促进发酵杀菌防腐解释： （香辛料如花椒、大蒜、茴香中含有花椒酰胺、蒜辣素、茴香醚及茴香醛等，有极强的杀菌力；又有良好的调味功能；香辛料成分参与发酵过程，合成复杂的酯类，使腐乳形成特有色、香、味。）6. 你能利用所学的生物学知识，解释豆腐长白毛是怎么一回事？答：豆腐上生长的白毛是毛霉的白色菌丝。严格地说是直立菌丝，在豆腐中还有匍匐菌丝。7. 我们平常吃的豆腐，哪种适合用来做腐乳？答：含水量为70% 左右的豆腐适于作腐乳。用含水量过高的豆腐制腐乳，不易成形。8. 吃腐乳时，你会发现腐乳外部有一层致密的“皮”。这层“皮”是怎样形成的呢？它对人体有害吗？它的作用是什么？答：“皮”是前期发酵时在豆腐表面上生长的菌丝（匍匐菌丝），它能形成腐乳的“体”，使腐乳成形。“皮”对人体无害。探讨加酶洗衣粉的洗涤效果一、基础知识3在本课题中，我们主要探究有关加酶洗衣粉的三个问题：一是普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的效果有什么不同；二是在什么温度下使用加酶洗衣粉效果最好，三是添加不同种类酶的洗衣粉，其洗剂效果有哪些区别。（答案：酶制剂蛋白酶脂肪酶淀粉酶纤维素酶碱性蛋白酶碱性脂肪酶氨基酸肽温度酸碱度表面活性剂基因工程）二、实验操作1探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉对衣物污渍的洗涤效果精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页，共 12 页学习必备欢迎下载（1）实验遵循的原则：实验变量为洗涤剂，设计时应遵循对照原则、 单一变量原则，有效地控制其他变量，如水的用量、污染物的量、所用实验用布的质地大小、两种洗衣粉的用量，搅拌及洗涤时间。（2）实验过程取两只大烧杯，用量筒分别量500mL 蒸馏水放入其中，放入400C 的水浴锅保温。将制好的污染布和洗衣粉（一组为污染布和普通洗衣 粉，另一组为污染布和加酶洗衣粉 ）分别放入两只烧杯中。用玻璃棒同时充分搅拌相同 时间，一段时间后搅拌可重复进行。过相同的时间后观察洗涤效果，探究加酶洗衣粉使用时的最适温度。2不同种类的酶洗衣粉对同一污渍的洗涤效果（1）实验原理：不同种类的加酶洗衣粉所加的酶不同，而酶具有专一性 ，所以对不同污渍的洗涤效果不同。（2）实验过程：根据表格设计实验步骤【疑难点拨】1普通洗衣粉中包含哪些化学成分？提示：普通洗衣粉中通常包含有：表面活性剂、水软化剂、碱剂、 漂白剂等成分，有的洗衣粉中还含有增白剂、香精和色素，以及填充剂等。2在本课题中你打算使用什么方法和标准判断洗涤效果？提示：可在洗涤后比较污物的残留状况，如：已消失、颜色变浅、面积缩小等，3含有蛋白酶的洗衣粉的洗剂效果好，可以用丝绸作为实验材料吗？不能。因为丝绸的主要成分是蛋白质，它会被加酶洗衣粉中的蛋白酶分解，损坏衣物。酵母细胞的固定化一、基础知识酶：优点：催化效率高，低耗能、低污染，大规模地应用于食品、化工等各个领域。实际问题：对环境条件敏感，易失活；溶液中的酶很难回收，不能再次利用，提高了生产成本；反应后的酶会混合在产物中，如不除去，会影响产品质量。设想：能否将酶固定在不溶于水的载体上固定化酶：优点：酶既能与反应物接触，又能与产物分离，还可反复利用实际问题：一种酶只能催化一种化学反应，而在生产实践中，很多产物的形成都是通过一系列的酶促反应才能得到的设想：能否将合成酶的细胞直接固定固定化细胞：优点：成本更低，操作更容易编号污渍类型洗涤效果蛋白酶脂肪酶淀粉酶复合酶普通洗衣酶1 鸡血2 牛奶3 菜油4 番茄汁5 墨水6 染料精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页，共 12 页学习必备欢迎下载二、固定化酶的应用实例( 课本 49 页) 高果糖浆是指果糖含量为42%左右的糖浆能将葡萄糖转化为果糖的酶是葡萄糖异构酶。使用固定化酶技术，将这种酶固定在一种颗粒状的载体上，再将这些酶颗粒装到一个反应柱内，柱子底端装上分布着许多小孔的筛板。酶颗粒无法通过筛板的小孔，而反应溶液却可以自由出入。生产过程中，将葡萄糖溶液从反应柱的上端注入，使葡萄糖液流过反应柱，与固定化葡萄糖异构酶接触，转化成果糖，从反应柱的下端流出。反应柱能连续使用半年，大大降低了生产成本，提高了果糖的产量和质量。三、固定化细胞技术固定化酶和固定化细胞是利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括包埋法、化学结合法和物理吸附法。一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的细胞难以被吸附或结合，而个小的酶容易从包埋材料中漏出。包埋法法固定化细胞即将微生物细胞均匀地包埋在不溶于水的多孔性载体中。常用的载体有明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等。四、实验操作( 一) 制备固定化酵母细胞1.酵母菌的活化：活化就是处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。2.配制物质的量尝试为0.05mol/L 的 CaCl2溶液3.配制海藻酸钠溶液加热溶化海藻酸钠时要注意：用小火或间断加热，反复几次，直到溶化为止4.海藻酸钠溶液与酵母菌细胞混合5.固定化酵母细胞以恒定的速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中，并浸泡 30min (时间 )。( 二) 用固定化酵母细胞发酵1.将固定好的酵母细胞用蒸馏水冲洗 2-3 次。2.发酵时的温度就为250C，时间24h 。五、结果分析与评价（一）观察凝胶珠的颜色和形状如果制作的凝胶珠颜色过浅、呈白色， 说明海藻酸钠浓度偏低，包埋的酵母菌数量少；如果形成的凝胶珠不是圆形或椭圆形，则说明海藻酸钠浓度偏高，制作失败， 需要再作尝试。（二）观察发酵的葡萄糖溶液利用固定的酵母细胞发酵产生酒精，可以看到产生了很多气泡，同时会闻到酒味补充：直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点：精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页，共 12 页学习必备欢迎下载【疑难点拨】1细胞的活化。提示： 在缺水的状态下，微生物会处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复正常的生活状态。 酵母细胞所需要的活化时间较短，一般需要0.5 1小时。2如何检验凝胶珠的质量是否合格。提示： 检验凝胶珠的质量是否合格，可以采用以下方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力摔打凝胶珠，如果凝胶珠很容易弹起，也表明制备的凝胶珠是成功的。3 酶和细胞分别适应哪种固定方法？提示： 一般来说，酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定，而细胞多采用包埋法固定化。 这是因为细胞个大，而酶分子很小；个大的难以被吸附或结合，而 个小的酶容易从包埋材料中漏出。微生物的分离和培养一微生物的实验室培养（一）培养基（1）培养基可分为液体和固体培养基（按照物理性质） 。在液体培养基中加入凝固剂琼脂后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。（2）营养构成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如 CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类（主要是葡萄糖）、脂肪酸等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+、尿素、牛肉膏、蛋白胨等。只有固氮 微生物才能利用N2。（二）无菌技术精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页，共 12 页学习必备欢迎下载（1）获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒 。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰 附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触 。（2）消毒与灭菌的区别消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子） 。消毒方法常用煮沸消毒法，还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、紫外线消毒。灭菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压锅灭菌（三）制作牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板（2）倒平板操作的步骤：将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。右手拿锥形瓶，将瓶口迅速通过火焰。用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基（约 1020mL ）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。等待平板冷却凝固，大约需5 10min。然后，将平板倒过来放置 ，使培养皿盖在下、皿底在上。（四）纯化大肠杆菌(1) 微生物接种的方法最常用的是平板划线法 和 稀释涂布平板法。（2）平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。（3）稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。（4）用平板划线法和稀释涂布平板法接种的目的是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落，以便于纯化菌种。（五）菌种的保存（1）对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。临时保藏方法：接种到固体斜面 培养基，菌落长成后置于40C的冰箱中 保存。缺点：这种方法保存的时间不长，菌种容易被污染或产生变异。（2）对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏 的方法。【疑难点拨 】1. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？能有效避免操作者自身被微生物感染。2. 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1） 培养细菌用的培养基与培养皿（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管（3） 实验操作者的双手（1） （ 2）需要灭菌（3）需要消毒3. 培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。可以用什么办法来估计培养基的温度？用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以倒平板了4. 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 7 页，共 12 页学习必备欢迎下载通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染5. 平板冷凝后，为什么将平板倒置？平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠。将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以避免培养基中的水分过快地挥发6. 在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用7. 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然要灼烧接种环？第一步：为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，划线前：为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目减少，以便得到单个菌落。划线结束后：能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者8. 在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种9. 在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少。每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁殖而成的菌落。10. 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，第2 步应如何进行无菌操作？从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围一、以尿素为氮源的微生物1尿素：又称碳酰胺，是蛋白质降解 的产物。在人和其他哺乳动物如家畜的尿液中都含有尿素，大量尿素的存在对环境造成污染。2以尿素为氮源的微生物：这些细菌可以尿素为氮源，是因为其含有脲酶，通过分解尿素作为其生长的氮源。其利用尿素的方程为：3分离以尿素为氮源的微生物所依据的原理：在氮源只有尿素时，这些微生物能利用尿素获得氮源而存活；而其他微生物却不能利用尿素，最终因为缺乏氮源而死亡。二、从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物实验1实验目的：(1)使用 _专一 _的培养基 (含有尿素 )分离专一的细菌 (含有脲酶的细菌)。(2)使用 _指示剂颜色的变化_检知酶 (脲酶 )所催化的反应。2实验内容：(1)从土壤中分离出能利用尿素的细菌。(2)观察菌落数。3实验步骤：精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页，共 12 页学习必备欢迎下载(1)采用倒平板技术，在超净台上的酒精灯旁制得固体平面LB 全营养培养基与尿素培养基；(2)制备细菌悬浮液：将土样 1 g， 在无菌条件下加到99mL 无菌水的三角瓶中，振荡 10min， 制成 10-2稀释液；从该稀释液中取0.5mL悬液加到4.5mL 无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10-3稀释液；再从该稀释液中取0.5mL 悬液加到4.5mL 无菌水的三角瓶中，经振荡就制成10-4稀释液；依此法可依次制备出105、106 土壤稀释液。(3)用涂布法分离细菌：取 0.1mL 稀释 104和 105的土壤稀释液，分别加到有LB 培养基和尿素培养基的培养皿中，再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。(4)培养：将培养皿倒置，在37恒温箱中培养24-48h。(5)观察、计数菌落。三、纤维素1化学组成：由C、H、O 三种元素组成，属于糖类中的多糖。2植物的细胞壁主要由纤维素、果胶组成。四、水解纤维素的微生物1现已发现的能水解纤维素的微生物：绿色木霉、变异青霉、黑曲霉、根霉 等。2这些微生物能水解纤维素的原因：它们能分泌纤维素酶，分解纤维素。五、纤维素酶1纤维素酶：不是单一的一种酶，而是复合酶 ，它包括C1酶、 Cx酶、葡萄糖苷酶。不同酶水解的作用不同2纤维素酶的作用：纤维素酶能催化水解纤维素(具体作用如下 ) 六、观察土壤中能水解纤维素的微生物实验1实验材料：(1)80 g_草炭 _土或 _枯树周边 _的土：可以从其中获得能水解纤维素的微生物。(2)牛皮 纸(90 cm2)2 张(3)自来水(4)卷烟 的纸 6 张：从其中获得纤维素培养基细菌悬浮液稀释度104105LB 全营养固体培养基尿素固体培养基精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页，共 12 页学习必备欢迎下载2实验步骤：(1)灭菌：将培养皿、三角瓶、自来水以及_一半 土壤用灭菌锅在1 kg 压力下灭菌30 min。(2)设置对照实验：将已灭菌 和未灭菌的 等量土壤分别放在2 个经灭菌处理的培养皿中，互相形成对照。(3)培养将 6 张卷烟纸 等分成 2 份，分别放在上述2 个有土样的培养皿的土壤表面 ，培养皿不加盖，可用牛皮纸遮盖保湿。然后置于 较高湿度 的培养室中。4 6 周后观察卷烟纸的变化(是否消失 )。【疑难点拨】1筛选菌株的原则：人为提供有利于目的菌株生长的条件( 包括营养、温度、pH 等) ，同时抑制或阻止其他微生物的生长。2探究菌株筛选原理的不同点土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变红，pH升高，说明细菌能分解尿素选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈3在微生物的筛选与计数实验中，设置对照实验的目的是：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。4怎样设置证明培养基未被污染的对照？用空白培养基作对照。5怎样设置证明选择培养基选择作用的对照？用牛肉膏蛋白胨培养基接种等量同种菌液作对照。【易错警示】(1) 为了使结果接近真实值，应设置三个或三个以上的平板，计算出菌落平均数。(2) 计算时明显偏离实际值( 本组实验其他平板计数值) 的要舍弃掉后求平均值。(3) 对照实验的设计首先要明确设计的目的，分析出实验的自变量之后才能准确设计。DNA 的粗提取与鉴定一、提取 DNA 的方法提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于DNA 的粗提取而言，就是要利用DNA 与 RNA 、 蛋白质与脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA ，去除其他成分。1）DNA 的溶解性DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl 中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。此外， DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA 与蛋白质进一步的分离。2）DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA 没有影响。大多数蛋白质不能忍受 6080oC 的高温，而DNA 在 800C 以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对DNA 没有影响。3）DNA 的鉴定在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺会被染成蓝色二、实验设计精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页，共 12 页学习必备欢迎下载1）实验材料的选取凡是含有DNA 的生物材料都可以考虑，但是使用DNA 含量高的生物组织，成功的可能性更大。在下面的生物材料中选取适合的实验材料：鱼卵、猪肝、菜花（花椰菜）、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基的大肠杆菌2）破碎细胞，获取含DNA 的滤液动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。 例如，提取洋葱的DNA 时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和 食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。3）去除滤液中的杂质4）DNA 的析出与鉴定将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液（体积分数为95%） ，静置 2-3min ，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA 。用玻璃棒沿同一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支 20ml 的试管，各加入物质的量浓度为2mol/L 的 NaCl 溶液 5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml 的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于中加热 5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有DNA 的溶液是否变蓝 。三、操作提示以血液为实验材料时，每100ml 血液中需要加入3g 柠檬酸钠，防止血液凝固。加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免加剧 DNA 的断裂，导致DNA 分子不能形成絮状沉淀。二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。四、结果分析与评价【疑难点拨】1为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂( 细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA 。2加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜， 有利于 DNA的释放； 食盐的主要成分是NaCl，有利于 DNA的溶解。3如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全， 提取的 DNA量变少， 影响实验结果， 导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。4此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质。5为什么反复地溶解与析出DNA ，能够去除杂质？答：用高盐浓度的溶液溶解DNA ，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA ，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。6方案二与方案三的原理有什么不同？精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页，共 12 页学习必备欢迎下载答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA分离。7.DNA的溶解度与NaCl 溶液浓度的关系：当 NaCl 溶液浓度低于0.14mol/L时，随浓度的升高， DNA的溶解度降低； 当 NaCl 溶液浓度高于0.14mol/L时，随浓度升高， DNA的溶解度升高。8.制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血中加入柠檬酸钠的原因制备鸡血细胞液时，要在新鲜的鸡血中加入抗凝剂柠檬酸钠，防止血液凝固。其原理是柠檬酸钠能与血浆中 Ca2+发生反应，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液便不会凝固，因为鸡血红细胞，白细胞都有细胞核，DNA主要存在于细胞核中，所以在离心或静置沉淀后，要弃出上层清液血浆。9提取 DNA的第一步是材料的选取，其目的是一定要选取DNA含量较高的生物材料，否则会由于实验过程中或多或少的损失而造成检测的困难；第二步是DNA的释放和溶解，这一步是实验成功与否的关键，要尽可能使细胞内的DNA全部溶解；第三步是DNA的纯化，即根据DNA的溶解特性、对酶及高温的耐受性的不同等特性，最大限度地将DNA与杂质分开；最后一步是对DNA进行鉴定，这是对整个实验的结果的检测。10在 DNA的析出的步骤中用到玻璃棒搅拌时，注意动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀。11盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的DNA ，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内 DNA的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的DNA就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的DNA的损失。12.本实验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液：为了获得含核物质的滤液过滤含粘稠物的0.14mol/LNaCl溶液：为了纱布上的粘稠物过滤溶解有DNA的 2mol/LNaCl 溶液：为了含DNA的滤液精选学习资料 - - - - - - - - - 名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页，共 12 页