土源性线虫和食源性寄生虫检测方法第一页，共42页。内容摘要土源性线虫和食源性寄生虫检测方法。八、囊尾蚴病和旋毛虫病血清学检测方法。1）在胶贴纸上记录受检者编号等信息，将胶贴纸有粘性一面向外。锥形离心管（长11.5cm、管口内径1.5cm）。谢谢观赏第二页，共42页。一、改良加藤厚涂片法改良加藤厚涂片法二、透明胶二、透明胶纸肛拭法肛拭法三、三、试管管滤纸培养法培养法四、土壤中四、土壤中钩蚴分离改良方法蚴分离改良方法五、土壤中人蛔虫卵五、土壤中人蛔虫卵检查及活力及活力测定方法定方法六、猪体囊尾蚴六、猪体囊尾蚴检测方法方法七、肉七、肉类中旋毛虫中旋毛虫检验方法方法八、囊尾蚴病和旋毛虫病血清学八、囊尾蚴病和旋毛虫病血清学检测方法方法2021/3/203第三页，共42页。一、改良加藤厚涂片法一、改良加藤厚涂片法加藤厚涂片法是50年代日本人Kato首先提出，是用在甘油透明液中浸泡过的亲水玻璃纸替代盖玻片。七十年代Katz设计出圆孔卡片用于定量，此后称为改良加藤厚涂片法。八十年代起，中国疾控中心寄生虫病所对定量板进行了多次改进。检出率高，操作简便、适用于粪便中各种寄生虫卵检测。1988年至今我国实施的大规模寄生虫病调查，粪检用的都是该方法。背景2021/3/204第四页，共42页。一、改良加藤厚涂片法一、改良加藤厚涂片法透明液（蒸透明液（蒸馏水水100ml纯甘油甘油100ml3%孔雀孔雀绿1ml);亲水性透明玻璃水性透明玻璃纸(2540mm)需在透明液中浸泡需在透明液中浸泡24小小时 以以上；上；尼尼龙绢片（片（80目）裁剪大小目）裁剪大小55cm；圆台形孔塑料定量板；台形孔塑料定量板；塑料刮片。塑料刮片。其他：原始登其他：原始登记表、表、镊子、剪刀、子、剪刀、记号笔、号笔、标本盒、旧本盒、旧报纸、吸、吸水水纸、光学、光学显微微镜和一次性手套等。和一次性手套等。材料2021/3/205第五页，共42页。一、改良加藤厚涂片法一、改良加藤厚涂片法步骤2021/3/206第六页，共42页。一一、改良加藤厚涂片法改良加藤厚涂片法1）每份每份粪样取取2张载玻片玻片进行行编号（与待号（与待检粪样的的编号相同）号相同）2）将）将80目的尼目的尼龙绢摊在在粪样上，用刮棒上，用刮棒压平后平后刮刮取取粪便。便。3）将定量板放置玻片中央，定量孔小孔朝上，将）将定量板放置玻片中央，定量孔小孔朝上，将粪样填填满、抹平。、抹平。2021/3/207第七页，共42页。一一、改良加藤厚涂片法改良加藤厚涂片法4）垂直向上移去定量板，将）垂直向上移去定量板，将亲水玻璃水玻璃纸抖抖掉多余水分，掉多余水分，盖盖在在粪样上；上；5）取另一）取另一张载玻片玻片轻压粪样，均匀展开至玻，均匀展开至玻片片边缘；6）待加藤片）待加藤片透透明后明后镜检2021/3/208第八页，共42页。一一、改良加藤厚涂片法改良加藤厚涂片法记录下每下每张片子的各种虫卵数片子的各种虫卵数;当每个当每个视野中的蛔虫卵数在野中的蛔虫卵数在10个个以上以上时,可固定抽可固定抽查10个个视野野,将将 10个个视野的虫卵平均数乘以全野的虫卵平均数乘以全片的片的视野数，得到全片虫卵数近似野数，得到全片虫卵数近似值。例：抽例：抽查的的10个个视野蛔虫卵数相加野蛔虫卵数相加为366，全片，全片粪膜膜视野数野数为78，则全片全片粪膜蛔膜蛔虫卵虫卵总数（数（ 36610 ）782854.82855镜检2021/3/209第九页，共42页。（1）受）受检者需提供足量的者需提供足量的粪样，约50g（鸡蛋大小）。蛋大小）。（2）加藤片的）加藤片的粪样应厚薄均匀，不能逸出玻片厚薄均匀，不能逸出玻片边缘。（3）涂片放置）涂片放置时间长短是关短是关键。一般室温。一般室温25、75湿度下，湿度下，涂片放置涂片放置不宜超不宜超过2小小时。只要透明了，就。只要透明了，就应及及时镜检，否，否则透明透明过度，薄壳虫卵易度，薄壳虫卵易变形看不清楚。形看不清楚。（4）登）登记粪检结果果时，分，分别填写每填写每张加藤片的各种虫卵数（加藤片的各种虫卵数（不要不要乘乘24）。）。（5）调节显微微镜左右目左右目镜的距离和焦距。的距离和焦距。一、改良加藤厚涂片法一、改良加藤厚涂片法注意事项2021/3/2010第十页，共42页。二、透明胶二、透明胶纸肛拭法肛拭法材料材料透明胶贴载玻片2021/3/2011第十一页，共42页。二、透明胶二、透明胶纸肛拭法肛拭法检测步步骤1）在胶贴纸上记录受检者编号等信息，将胶贴纸有粘性一面向外；2021/3/2012第十二页，共42页。二、透明胶二、透明胶纸肛拭法肛拭法2） 用食指和拇指分开受检儿童的肛门，尽量分开肛周褶皱 ，将透明胶贴纸在肛门口反复粘压。2021/3/2013第十三页，共42页。二、透明胶二、透明胶纸肛拭法肛拭法3)将采样后的胶贴纸贴回载玻片，抹平，减少气泡产生。2021/3/2014第十四页，共42页。二、透明胶二、透明胶纸肛拭法肛拭法要求要求39岁儿童只儿童只检查1次。次。虫卵不虫卵不计数，只数，只记录阴性、阳性阴性、阳性。蛲虫有夜虫有夜间排卵的排卵的习性性,采采样宜在清晨宜在清晨,采采样前前不要洗澡或清洗肛不要洗澡或清洗肛门,以免漏以免漏检。2021/3/2015第十五页，共42页。三、三、试管管滤纸培养法培养法锥形离心管（形离心管（长11.5cm、管口内径、管口内径1.5cm）。）。试管架、吸管、管架、吸管、载玻片、盖玻片玻片、盖玻片(2020mm)、小、小镊子、子、滤纸条（条（宽度略大于度略大于试管直径，管直径，长度略短于度略短于试管，管，约9.01.6cm，滤纸条要用剪刀剪，防止毛条要用剪刀剪，防止毛边）、）、显微微镜、温箱、解剖、温箱、解剖镜或放大或放大镜、竹、竹签、旧、旧报纸、橡皮筋。、橡皮筋。材料2021/3/2016第十六页，共42页。三、三、试管管滤纸培养法培养法（1）每管内加入冷开水）每管内加入冷开水约2ml。（2）将）将滤纸条沿条沿长轴纵折，以保持挺直。折，以保持挺直。（3）用竹）用竹签取取0.5g粪便，涂于便，涂于滤纸中段，左右各留中段，左右各留0.5cm，上端留，上端留1cm，下，下端留端留约2cm空白，不涂空白，不涂粪便。便。（4）将涂布）将涂布粪便的便的滤纸插入管中，但不插入管中，但不应该接触管底，接触管底，滤纸条插入管中的深度条插入管中的深度以以水只接触水只接触纸条而不碰到条而不碰到粪便便为宜。宜。（5）在培养管上）在培养管上贴上上标签并写上受并写上受检者的姓名和者的姓名和编号。号。（6）每）每3050管用橡皮筋扎住，上下均包以旧管用橡皮筋扎住，上下均包以旧报纸，再用橡皮筋扎，再用橡皮筋扎紧。步骤2021/3/2017第十七页，共42页。三、三、试管管滤纸培养法培养法（7）将培养管置于）将培养管置于31温度中培养温度中培养4天，或置于天，或置于2630温度中培养温度中培养68天。天。以保以保证所有幼虫都有足所有幼虫都有足够的的时间发育到感染期幼虫。育到感染期幼虫。（8）分离幼虫：沿管壁加入）分离幼虫：沿管壁加入45温水温水，淹没淹没滤纸上的上的粪便便，1小小时后用后用镊子取出子取出滤纸条，弃去。条，弃去。将培养管静置将培养管静置1小小时，用吸管吸去上清液，幼虫留，用吸管吸去上清液，幼虫留于管底于管底0.5ml或更少的水内。或更少的水内。（9）用放大）用放大镜(4以上以上)或解剖或解剖镜以以侧照法照法检出沉淀物内有无活的幼虫。如出沉淀物内有无活的幼虫。如有活的幼虫，可先将管底部浸于有活的幼虫，可先将管底部浸于50-60的的热热水内抑制活水内抑制活动动。（10）将沉淀物置于低倍）将沉淀物置于低倍镜下下(1010)检查，为使可折光的幼虫易于使可折光的幼虫易于观察，察，检查时要尽量要尽量缩小光圈减弱光小光圈减弱光线，如需，如需详细辨辨认幼虫，可加上盖玻片，在高倍幼虫，可加上盖玻片，在高倍镜下下(4010)检查，必要，必要时可用目可用目镜测微微计测量幼虫。量幼虫。2021/3/2018第十八页，共42页。三、三、试管管滤纸培养法培养法每份每份样本本鉴定定钩蚴蚴100条，不足条，不足100条，全部条，全部鉴定定记数。数。发现其他种其他种类的的线虫只虫只记录虫种名不虫种名不记数。数。如遇土壤如遇土壤污染，培养中可出染，培养中可出现自由生活的自由生活的线虫成虫和幼虫必虫成虫和幼虫必须与人体寄生虫的幼虫相与人体寄生虫的幼虫相鉴别。若若幼虫蠕幼虫蠕动过快，快，难于于观察，可用以下方法制察，可用以下方法制动1)将将载玻片放在玻片放在90的的热水上用水上用热气熏气熏2)从一从一侧加加3%5%福福尔马林一滴林一滴3)加入加入1：4000的稀碘液一滴的稀碘液一滴 要求注意事项2021/3/2019第十九页，共42页。三、三、试管管滤纸培养法培养法钩蚴蚴鉴别2021/3/2020第二十页，共42页。美洲钩虫美洲钩虫鞘膜横纹鞘膜横纹食管矛食管矛十二指肠钩虫十二指肠钩虫三、三、试管管滤纸培养法培养法2021/3/2021第二十一页，共42页。四、土壤中四、土壤中钩蚴分离改良方法蚴分离改良方法1 材料材料圆形分形分样筛（20目，直径目，直径15cm）、塑料）、塑料烧杯（杯（500ml）、棉）、棉纸、搪瓷、搪瓷盘或不或不锈钢脸盆盆（底面稍大于（底面稍大于圆形分形分样筛的底面）、三角量的底面）、三角量杯（杯（500ml）、平皿（直径）、平皿（直径9cm）、土）、土铲、量、量筒、大筒、大镊子、子、记号笔、保号笔、保鲜袋、温箱（或水袋、温箱（或水浴箱）、温度浴箱）、温度计、自来水、自来水、氯化化钠（Nacl）、）、解剖解剖镜、显微微镜。2021/3/2022第二十二页，共42页。四、土壤中四、土壤中钩蚴分离改良方法蚴分离改良方法2 步骤2.1用土铲取表层2-3 cm土样，在500 ml塑料烧杯中定量至300 ml刻度处（约350 g）后放入保鲜袋，注明土样编号，并在登记本上注明相应的取样点、种植物类型、户主姓名等基本信息。2.2在圆形分样筛网面上铺上3层棉纸（棉纸直径22 cm），倒入样本土，用大镊子将颗粒较大的土压细、去除石子、草等杂质后，将土铺展均匀。2.3将放入土样的分样筛放入搪瓷盘中，并在搪瓷盘中加入45、5%的盐水，至盐水的液面没过筛网面的棉纸为止。2.4将加入盐水和土样分样筛的搪瓷盘置45温箱或水浴箱中，放置1.5 h。2021/3/2023第二十三页，共42页。2021/3/2024第二十四页，共42页。2.5取出分样筛，将搪瓷盘中的水倒入三角量杯，自然沉淀15 min。2.6缓缓弃去上清液（倾倒过程不要让水回流），底部留50 ml或更少的液体。2.7将沉淀倒入平皿，解剖镜下进行初步鉴别后，显微镜下进行十二指肠钩虫钩蚴和美洲钩虫钩蚴的鉴别和计数。四、土壤中四、土壤中钩蚴分离改良方法蚴分离改良方法2021/3/2025第二十五页，共42页。四、土壤中四、土壤中钩蚴分离改良方法蚴分离改良方法3 注意事项3.1土样应在早上10点前采集完毕。3.2采集的土样在近一段时间内没有喷过杀虫剂。3.3如果分离后沉淀中有絮状沉淀不便观察，建议再采取以上分离步骤，在45、5%的盐水中分离20 min后进行观察。2021/3/2026第二十六页，共42页。1 取土样取从土表至表层以下2cm处泥土；2 土样处理2.1 取回土样，剔除菜叶、树皮等大杂物，压碎土样中的大颗粒；2.2过筛 先后用孔径3mm的铜筛和孔径为2mm的铜筛过筛，收集过筛后的土样。五、土壤中人蛔虫卵五、土壤中人蛔虫卵检查及活力及活力测定方法定方法2021/3/2027第二十七页，共42页。五、土壤中人蛔虫卵五、土壤中人蛔虫卵检查及活力及活力测定方法定方法3 取2支50ml大离心管，各放入过筛后的土样10g，加5%氢氧化钠溶液至40或45ml刻度线。4 用橡皮塞紧塞管口，用力振摇数分钟，充分混合后，以2000rpm,离心4min。5 弃去上部的氢氧化钠，加入饱和硝酸钠溶液搅拌混匀，2000rpm离心4min。6 离心后，再加饱和硝酸钠溶液满至管口，静置15min。7 用一次性滴管吸取管口表层液面，滴加于离心管内，待下一步活力测定。2021/3/2028第二十八页，共42页。六、六、 猪体囊尾蚴猪体囊尾蚴检测方法方法一、设备和材料显微镜、目镜测微尺、37C孵箱、方盘、解剖刀、解剖剪、解剖针、眼科镊、培养皿、载玻片、盖玻片、标本瓶、滴管、废物盘二、试剂生理盐水、猪胆汁。2021/3/2029第二十九页，共42页。六、六、 猪体囊尾蚴猪体囊尾蚴检测方法方法三、检测方法 猪囊尾蚴寄生猪活动较多的肌肉，以臀股部肌肉最多，其后依次为舌肌、脑组织以及心肌。通过肉眼可直接查看到肌肉内有米粒大至豌豆大的白色半透明的囊泡。用镊子取出囊泡，置于生理盐水孵化，囊尾蚴头节外翻，压片后在低倍显微镜下观察头节，头节的四周可有4个吸盘和2圈小钩。2021/3/2030第三十页，共42页。“米猪肉”2021/3/2031第三十一页，共42页。六、六、 猪体囊尾蚴猪体囊尾蚴检测方法方法1 采样采集猪的一侧臀股部肌肉1000 g，用刀每隔810 mm横断切开肌肉纤维，观察有无乳白色透明石榴籽样物的囊泡，取下囊泡置入盛有生理盐水的标本瓶中，待镜检鉴定。2 镜检将检获的囊泡用解剖针剥离去掉纤维膜，放入盛有20%猪胆汁生理盐水的平皿中，置于37C孵箱30 min，待头节翻出后压片镜检，观察其形态特点。3 猪囊尾蚴形态猪囊尾蚴呈卵圆形，白色半透明的囊泡状，大小约1015 mm。囊壁薄，囊内充满囊液，内有一米粒大的小白点，为翻卷其内的头节。头节四周有4个吸盘、头节中央有顶突，顶突上有两圈小钩。2021/3/2032第三十二页，共42页。2021/3/2033第三十三页，共42页。七、肉七、肉类中旋毛虫中旋毛虫检验方法方法2021/3/2034第三十四页，共42页。七、肉七、肉类中旋毛虫中旋毛虫检验方法方法2021/3/2035第三十五页，共42页。七、肉七、肉类中旋毛虫中旋毛虫检验方法方法2021/3/2036第三十六页，共42页。2021/3/2037第三十七页，共42页。七、肉七、肉类中旋毛虫中旋毛虫检验方法方法2021/3/2038第三十八页，共42页。七、肉七、肉类中旋毛虫中旋毛虫检验方法方法2021/3/2039第三十九页，共42页。八、囊尾蚴病和旋毛虫病血清学囊尾蚴病和旋毛虫病血清学检测方法方法具体具体详见检测试剂盒盒说明明书2021/3/2040第四十页，共42页。谢谢 谢！谢！2021/3/2041第四十一页，共42页。谢谢观赏谢谢观赏第四十二页，共42页。