第五章第五章现代食品安全检测技术现代食品安全检测技术第一节第一节高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素一、实验目的掌握高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素的原理熟悉高效液相色谱法测定蜂蜜中残留的四环素的实验方法了解高效液相色谱仪的基本结构与使用方法二、实验原理（一） 四环素是一种广谱抗菌素， 可用于治疗和预防一些动物性疾病， 但如果长期使用，将导致四环素类药物在动物类组织中的残留。 残留在动物类组织中的四环素类药物会影响食用者的健康。四环素类药物的毒性反应主要表现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等，还会造成过敏反应、二重感染、致畸胎作用。因此应严格控制其在食品中的残留量。（二） 用酸性的 Na2 2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液将蜂蜜中蛋白质沉淀 ,同时将四环素提取出来，以草酸与乙腈为流动相，C1818柱作为色谱柱，反相分离，紫外检测器检测，在四环素的标准曲线的线性范围内，依据其测得的峰面积与其含量间的线性关系进行定量分析。三、仪器和试剂（一）仪器 1. 高效液相色谱仪 2紫外检测器 3涡旋混合器 4离心机 5天平（二）试剂 1甲醇 2乙腈 3乙酸乙酯 4磷酸二氢钠 5盐酸 6柠檬酸 7乙二胺四乙酸二钠 8草酸四、操作步骤1提取（1）称取 5g 试样，置于 50mL 离心管中，加入 L Na2EDTA-Mcllvaine 溶液,快速混合1min, 以 3500r/min 离心 10min，上清液倒入另一离心管中。（2）将上清液通过固相萃取柱， 用 2mLNa2EDTA-Mcllvaine溶液冲洗，再用 20mL 水洗，弃去全部流出液，减压抽干10min，用4mL 流动相洗脱，定容至4mL，供液相色谱-紫外检测器测定。 2标准溶液的配制（1）称取四环素10mg，用甲醇溶解，并转移至100mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得四环素储备液（mL） 。准确移取该溶液 1mL 置 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度,得 mg/mL。准确移取该溶液 0， ， ， ， ，于 10 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。得四环素标准溶液的浓度分别为， ， ， ，?g/mL。 3测定（1）色谱条件：色谱柱：C1818色谱柱，150mm, 5?m；流动相：L 草酸溶液（pH=）-乙腈（80：20） ；流速：1mL/min; 柱温：室温；紫外检测器：检测波长：355nm。（2）将上述已制备好的不同浓度的四环素标准系列溶液一次进样20?L，依据四环素的峰面积定量。以标准系列溶液的浓度为横坐标，其相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程。（3）样品的测定：取已处理好的样品溶液20?L 进样分析，根据峰面积带入回归方程中计算。五、结果计算按下式可计算出蜂蜜中四环素的含量X=CV/m式中：X 为试样中四环素的含量，单位为?g/g; C 为从标准曲线计算得到的被测组分溶液浓度，单位为?g/mL；V 为试样溶液定容体积，单位为 mL；m 为试样溶液所代表的试样质量，单位为 g。六、注意事项（一）流动相使用前必须经过脱气。 如果流动相中含有气体， 在较高的柱压下会产生气泡，使流动相流动受阻，对分离样品产生不利影响。（二）固相萃取柱使用前应用5mL 甲醇和 10mL 水活化。（陈凌云）第二节第二节液相色谱液相色谱- -串联质谱法测定水产品中的氟苯尼考串联质谱法测定水产品中的氟苯尼考一、实验目的（一）基本熟悉现代食品安全检测技术中高效液相色谱-串联质谱联用技术的测定方法和特点；（二）了解液质联用技术的基本原理以及在食品安全检测中的重要性。二、实验原理氟苯尼考又名氟洛芬、氟甲砜霉素，分子式为C12H14Cl2FNO4S；分子量为；结构式为。氟苯尼考是一种兽用抗菌药，用于敏感细菌所致的猪、鸡及鱼的细菌性疾病，尤其对呼吸系统感染和肠道感染疗效显着。样品中的氟苯尼考在碱性条件下， 用乙酸乙酯提取，提取液经旋转蒸发挥干， 残渣以水溶解，经正己烷液-液萃取脱脂。液相色谱-串联质谱仪，以氘代氯霉素（d5-氯霉素）为内标，MRM 离子对方式检测，内标法定量。三、试剂和仪器甲醇（HPLC） 、乙酸乙酯（AR） 、正己烷（AR） 、氨水（AR，25%28%） 、无水硫酸钠（AR） 、氟苯尼考和氘代氯霉素（d5 5-氯霉素）标准物质（纯度99%） 、超纯水。液相色谱-串联质谱仪（API 4000 Qtrap） ，配电喷雾电离离子源（ESI） ；分析天平，感量和；离心机，4000r/min；小型台式离心机，13000r/min；组织捣碎机；匀浆机；减压旋转蒸发仪；涡旋振荡器；聚丙烯离心管：带盖， 50mL， ；鸡心瓶：25mL；具塞比色管等。四、操作步骤（一）标准溶液配制1100g/mL 标准储备液的配制：称取适量氟苯尼考标准物质， 用甲醇配成 100g/mL的标准储备液，于-18冰箱保存备用。g/mL 标准储备液的配制：准确吸取 100g/mL 标准储备液于 100mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，于-18冰箱保存备用。3.内标标准溶液：氘代氯霉素（d5-氯霉素） ，100g/mL，溶剂为乙腈，氘化度98%。g/mL 内标标准储备液：准确吸取内标标准溶液于 100mL 容量瓶中，用甲醇稀释、定容至刻度，于-18冰箱保存备用。mL 内标标准中间液： 准确吸取内标标准储备液于50mL 容量瓶中， 以超纯水稀释至刻度，于 4冰箱保存备用。6.标准工作溶液的配制： 分别准确吸取一定量的标准储备液和内标标准中间液， 以空白基质溶液配成 10、50、100、200、500ng/mL，含内标 10ng/mL 的标准工作溶液。（二）样品的制备1.标记：从所取样品中，取出有代表性的可食部分约 500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，装入洁净容器，密封，并标明标记。2.提取：称取 5g 充分捣碎均匀的试样，精确至 0.001g，置于 50mL 聚丙烯离心管中，加入内标标准中间液 L，加入 25mL 乙酸乙酯，氨水，3g 无水硫酸钠，匀浆提取 30s，4000r/min 离心 5min，上清液转移至 50mL 比色管中。另取一 50mL 离心管，加入 20mL 乙酸乙酯，氨水，洗涤匀浆刀10s，洗涤液转移至第一支离心管中，用玻棒搅动残渣，涡旋振荡提取 1min，超声波振荡提取5min，4000r/min 离心 5min，上清液合并至50mL 比色管，乙酸乙酯定容至。摇匀后移取乙酸乙酯提取液于25mL 鸡心瓶，45减压旋转浓缩至干。3.净化：鸡心瓶中的残渣用水溶解，涡旋振荡混匀，超声 5min，加入 3mL 正己烷涡旋振荡混合 30s，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加3mL 正己烷涡旋振荡混合 30s，静置分层，移取部分下层的水相至的聚丙烯离心管中，13000r/min 离心 5min，m 滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。4.空白基质溶液的制备： 称取 5g 空白样本， 精确至 0.001g， 除不加入内标标准中间液，其它按照样品制备、净化的步骤进行。（三）液相色谱条件1.色谱条件色谱柱： 安捷伦 Zorbax XDB C-18， 5m， 150mm； 柱温： 40； 流动相： 甲醇-水 （4/1） ；流速：min；进样量：10L。2.质谱条件离子源：电喷雾电离离子源（ESI） ；扫描方式：负离子；检测方式：多反应选择离子检测（MRM） ；质谱条件的优化：以 1g/mL 的氟苯尼考和氘代氯霉素内标溶液， 针泵直接进样，流速5L/min，分别进行 MS 、MS 的优化，确定相应质谱参数，选择合适的检测离子对。电喷雾电压(IS)：-4200V；辅助气温度（TEM） ：600，其它参数见下表5-2-1：12表表 5-2-15-2-1 氟苯尼考、氘代氯霉素（氟苯尼考、氘代氯霉素（d d5 5- -氯霉素）质谱参数氯霉素）质谱参数名称氟苯尼考氘代氯霉素五、结果计算以内标法定量，在优化的最佳条件下， 对基质标准工作溶液进样， 以标准溶液中被测组分的峰面积与氘代氯霉素峰面积的比值为纵坐标， 标准溶液中被测组分的浓度 （或被测组分浓度与氘代氯霉素浓度的比值） 为横坐标绘制标准工作曲线， 用标准工作曲线对样品进行定量，得提取液的含量 C。按下式计算出蔬菜中被测组分的含量定性离子对(m/z)定量离子对(m/z)200-55采集时间（ms）去簇电压 DP（V）-75碰撞能量 CE（V）-15-25-26X C 式中：V1000m1000X试样中被测组分残留量，单位为微克每千克（g/kg） ；C从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL） ；V样品溶液最终的定容体积，单位为毫升（mL） ；m称取试样的质量，单位为克（g） 。六、注意事项（一）样品采集要均匀、具有代表性；（二）试样要捣碎、匀浆彻底；（三）流动相要过滤、脱气，并现时配制；（四）避免样品污染；（五）色谱柱要充分平衡。（马安德）第三节第三节电感耦合等离子体质谱法检测茶叶中铅、砷及镉含量电感耦合等离子体质谱法检测茶叶中铅、砷及镉含量一、实验目的（一） 掌握电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定元素含量的原理、分析过程中的各项干扰情况及其消除方法、基本分析步骤（二） 熟悉电感耦合等离子体质谱仪的基本构造及操作（三） 掌握元素（总量）分析的样品前处理方法二、实验原理ICP-MS 由进样系统、离子源和质谱仪三个主要部分构成。样品溶液经过雾化由载气送入 ICP 炬焰中，经过蒸发、解离、原子化、电离等过程，转化为带正电荷的正离子，经离子采集系统进入质谱仪，质谱仪根据质荷比进行分离。 对于一定的质荷比，质谱积分面积与进入质谱仪中的离子数成正比。 即样品的浓度与质谱的积分面积成正比， 通过测量质谱的峰面积来测定样品中元素的浓度。三、试剂和仪器（一）试剂硝酸（优级纯）H2O2（优级纯）纯水：电阻率大于 cm。铅（Pb） 、砷（As） 、镉（Cd）混合标准使用溶液：10 mg/L。锗（Ge） 、铟（In） 、铋（Bi）内标溶液：100 g/L（二）仪器Thermo fisher XSeriesII电感耦合等离子体质谱仪Millipore 超纯水制备仪美国 CEM Mars 微波消解仪及配套消解管和架子精确控温电热消解器千分之一天平100 ?L、1 mL、5 mL 可调移液器各一支，以及相应吸头若干100 mL 容量瓶 11 个、1000 mL 烧杯 1 个、10 mL 量筒 1 个、1000 mL 量筒 1 个四、操作步骤(一) 仪器开机预热（以下步骤基于实验老师将仪器预先调整到Vacuum ready 状态下进行）检查 Ar 气压力是否在范围内，排风是否正常，电源是否稳定；打开计算机，启动 Windows，打开循环冷却水的电源；双击“Plasma Lab” 图标，进入操作软件主窗口。检查蠕动泵、ICP 炬管、雾化室，关闭 ICP 等离子体发生器窗门；点击 on 点火；待仪器点火后，预热；（二） 标准溶液系列的制备1. 于 1000 mL 烧杯中加入 594 mL 去离子水，再定量吸取 6 mL 浓硝酸加入烧杯中，搅拌、冷却，配制成（1+99）的硝酸溶液；2. 于 5 个 100 mL的容量瓶中分别加入 0、50 ?L、200 ?L、1 mL和 mL 的铅（Pb） 、砷（As） 、镉（Cd）混合标准使用溶液（10 mg/L） ，用（1+99）的硝酸溶液定容至刻度，配制成浓度浓度分别为 0、5、20、100、250 ?g/L 标准溶液系列；（三） 样品处理1. 称取 0.5g 茶叶样品，记下样品具体重量（精确到小数点后第三位） ，平行样品数为三份2. 将称量好的三份平行样分别放入3 支微波消解管中，再取 3 支微波消解管作制备试剂空白用；每支消解管中分别加入 5 mL 浓硝酸和 1 mL H2O2，盖上消解管瓶塞及盖子；6支消解管对称放入微波消解架上， 放入微波消解仪中， 按照表 5-3-1 消解程序进行样品消解；表表 5-3-15-3-1 茶叶样品微波消解程序茶叶样品微波消解程序功率800 W爬升时间5 min温度178保持5 min3. 微波消解程序结束后，将消解管放到精确控温电热消解器上进行赶酸操作，温度设定 100 ，加热 10 h；4. 赶好酸的试剂空白及样品分别转入6 个 100 mL 容量瓶中，每支消解管用少量超纯水清洗 35 次，清洗液也转移至容量瓶中， 最后用超纯水定容至刻度， 制备成样品溶液剂试剂空白。（四） 测定1. 使用调谐液调整仪器各项指标，使仪器灵敏度、氧化物、双电荷分辨率等各项指标达到测定要求，仪器参考条件如下：RF 功率为 1400 W，载气流量为 0.93 L/min，采样深度为 150 mm，雾化器为同心雾化器、采样锥类型为镍锥，具体仪器条件应该以实际调整所获条件为主；2. 编辑测定方法、干扰方程、选择各测定元素及内标元素、选择校准方法、输入标准系列浓度；3. 引入在线内标溶液，观测内标灵敏度、待内标信号稳定后分别测定试剂空白、标准系列、样品溶液；4. 绘制标准曲线、计算回归方程、获取试剂空白及样品溶液浓度（五） 关机测定完毕，分别用5%硝酸溶液、超纯水冲洗样品管和内标管直至仪器响应值回到基线；点击 off 熄火，关闭循环水及 Ar 气，将进样系统的蠕动泵管放松，关闭计算机。五、结果计算茶叶样品中各待测元素的含量由以下公式计算：W (C样C空)1001000m其中，W 为茶叶样品中各待测元素的含量（?g/g） ；C 样为仪器所测定的样品溶液浓度（?g/L） ；C空为仪器所测定的试剂空白浓度的平均值（?g/L） ；m 为茶叶样品重量（g）最终茶叶样品中各待测元素的含量应以三个平行样品的含量均值来表示：W SD。其中W为茶叶样品中各待测元素的含量均值；SD 为标准偏差。六、注意事项（一）干扰及其消除电感耦合等离子体质谱法测定复杂样品时常存在以下干扰， 在试验过程中应该注意消除干扰影响。1 同量异位素干扰相邻元素间的异位素有相同的质荷比， 不能被四极质谱分辨， 可能引起异位素严重干扰，选择待测元素时应避免选择有同量异位素干扰的元素。2. 丰度较大的同位素对相邻元素的干扰丰度较大的同位素会产生托尾峰， 影响相邻质量峰的测定。 可调整质谱仪的分辨率以减少这种干扰。3. 多原子（分子）离子干扰由两个或三个原子组成的多原子离子， 并且具有和某些待测元素相同的质荷比所引起的干扰，本实验中可能存在的多原子（分子）离子干扰见表5-3-2。多原子（分子）离子干扰很大程度上受仪器操作条件的影响，通过调整或者干扰校正方程可以减少这种干扰。表表 5-3-25-3-2常见的分子离子干扰常见的分子离子干扰分子离子40Ar35Cl+ZrOMoO质量75106112108116受干扰元素AsCdCd本实验中，氧化物的干扰可通过调整仪器参数、降低氧化物生成来减少干扰；而As 的干扰可以通过干扰校正方程来消除，校正方程为：75As=75Mx?82My? (83M-z?83Kr)其中，x、y、z 的参考值分别为、 、 ，具体数值以77ArCl、82Se 和 83Kr 的实际仪器响应来计算。4. 物理干扰包括检测样品标准溶液的粘度、 表面张力和溶解性总固体的差异所引起的干扰。 用内标物可校正物理干扰。5. 基体抑制（电离干扰）易电离的元素增加将大大增加电子数量而引起等离子体平衡转变，通常会减少分析信号，称基体抑制。用内标法可以校正基体干扰。6. 记忆干扰经常清洗样品导入系统以减少记忆干扰。（二）仪器稳定性监测测定过程中， 应随时留意内标元素的仪器响应情况， 如内标元素仪器响应出现大幅度波动，应查明原因再重新测定。（三）样品制备由于样品赶酸过程较长，样品制备应提前进行。(刘洪涛)第四节第四节离子色谱法测定自来水中氟离子、氯离子含量离子色谱法测定自来水中氟离子、氯离子含量一、 实验目的（一）掌握离子色谱法测定自来水中氟离子、氯离子含量的基本原理及实验方法。（二）熟悉离子色谱仪的测定方法。（三）了解化学抑制的工作原理。二、 实验原理样品通过进样阀注入仪器，并随碳酸盐-重碳酸盐淋洗液进入离子交换柱系统（由保护柱和分离柱组成） ，由于样品中各种阴离子对分离柱中阴离子交换树脂的亲和力不同，移动速度亦不同， 从而进行分离。 已分离的阴离子流经阳离子交换柱或抑制器系统转换成具高电导度的强酸， 淋洗液则转变为弱电导度的碳酸。 由电导检测器测量出各阴离子组分的电导率，以相对保留时间和峰高或面积定性和定量。三、仪器和试剂（一）仪器1.离子色谱仪2.全自动进样器3.阴离子分离柱4.超声波清洗器5.超纯水系统6.真空泵7.过滤器8.十万之一分析天平9.滤膜：0.22?m10.聚乙烯塑料容量瓶：1000m1、100m1（二）试剂1.氟标准储备液（1000mg/L）2.氯标准储备液（1000mg/L）3.碳酸钠：分析纯4.碳酸氢钠：分析纯5.硫酸：优级纯6.去离子水四、操作步骤（一）水样预处理吸取 10mL 自来水样过?m 孔径的微滤膜过滤除去浑浊物质，然后上机待测。（二）溶液的配制1.氟 mg/L)、氯 mg/L)混合标准使用液：分别吸取将氟标准贮备液 1m1，氯标准储备液 10m1，置于 100mL 容量瓶中，然后用去离子水稀释至刻度，摇匀。2.氟、氯标准溶液的绘制：准确吸取1、2、5、10、20mL 氟、氯混合标准使用液分别置于 100mL 容量瓶中，最后用去离子水稀释至刻度，摇匀。3.淋洗液的配制(碳酸钠 mmol/L /碳酸氢钠 L)：准确称取碳酸钠0.1908g/L、碳酸氢钠0.1428g/L （于 105下烘干 2 小时， 并保存在干燥器内） ， 溶于去离子水中， 并转移到 1000mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀，并经真空泵过滤、除气，备用。4.再生液的配制（50mmol/L） ：准确吸取 3mL 硫酸到 1000mL 容量瓶中，用去离子水稀释至刻度，摇匀。5.冲洗液：去离子水。（三）仪器的条件1.柱温：室温2.淋洗液流速：1.0 m L/min3.进样量：20?l（四）样品测定1.装上淋洗液，依次打开全自动进样器、主机、连接色谱工作站的电脑开关。2.调节淋洗液和再生液流速，使仪器达到平衡，并指示稳定的基线。3.建立测定方法。4.待基线走稳后，用氟离子、氯离子的混合标准系列溶液进样 （可分别得到两种离子的工作曲线）绘制标准曲线。5.将预处理后的自来水样品注入色谱仪进样系统，记录峰高或峰面积。6.测量完毕后，冲洗柱子。7.关泵。五、结果计算根据测出的样品峰面积，仪器可直接在标准曲线上查得各阴离子的质量浓度（mg/L） 。如有稀释需乘以稀释倍数。C 样=C 检稀释倍数式中：C 样为样品的质量浓度，单位为毫克每升mg/L；C 检为在标准曲线上查出的质量浓度，单位为毫克每升mg/L。六、注意事项（一） 由于进样量很小， 操作中必需严格防止纯水、 器皿以及水样预处理过程中的污染，淋洗液应用去离子水配制，不宜配制太多、放置时间太长。（二）为了防止保护柱和分离柱堵塞，样品必须过?m 孔径的微滤膜。（三）每次开机后，观察白色的再生液和冲洗液的废液管是否有液体流出，是否被堵。（四）离子色谱仪长期不用时也要定期用超纯水清洗或将柱子卸下密封保存。（沈梅）第五节第五节气相色谱气相色谱- -质谱法测定蔬菜中的敌敌畏和甲拌磷含量质谱法测定蔬菜中的敌敌畏和甲拌磷含量一、 实验目的（一）了解气相色谱-质谱联用仪的基本结构及原理；（二）了解气相色谱-质谱仪使用的方法；（三）了解蔬菜中有机磷农药的提取方法；（四）熟悉气相色谱-质谱法的定性、定量的方法；（五）掌握内标标准曲线法的定量方法。二、 实验原理样品用乙腈匀浆后过滤，滤液盐析后离心，取上清液经固相萃取柱净化，用乙腈+甲苯（3+1）洗脱，洗脱液浓缩后，用气相色谱-质谱仪测定。气相色谱-质谱仪的工作原理：样品中各组份经气相色谱分离后进入质谱仪，被离子源轰击成不同质荷比（m/z）的碎片离子。碎片离子经过质量分析器后，由离子流检测器检测，并按照 m/z 的大小输出质谱图，以离子流强度为纵坐标， 保留时间为横坐标输出色谱图。 利用组分的保留时间和质谱图进行定性分析，用峰面积或者峰高进行定量分析。内标标准曲线法：将待测组分的纯物质配置成不同浓度的系列标准溶液（入等量的内标物质， 在一定实验条件下分析， 测得待测组分的峰面积以Ci） ，分别加Ai及内标的峰面积As，Ai/ As对Ci作图得内标标准曲线y ax b。再将同样量的内标物加入到待测样品中，进样分析，测出Ax/ As，由标准曲线求得待测组分的含量。三、试剂和仪器（一）仪器 GC-MS（2010QPPlus，日本岛津公司)；自动固相萃取仪或手动固相萃取仪；均质器；离心机，电子天平（精度分别为和） ；氮气吹干仪；100uL/ 1000uL 可调移液器；鸡心瓶；微量进样器。（二）试剂乙腈、甲苯、正己烷、氯化钠，均为优级纯。 Envi-18 和 Envi-Carb 活性炭固相萃取小柱（3 mL, g） 。敌敌畏、甲拌磷和环氧七氯标准品 (纯度95%，国家标准物质研究中心)。敌敌畏、甲拌磷和环氧七氯标准母液（ mg/mL）: 精确称取 mg 标准物质于 mL容量瓶中用正己烷定容。准确移取敌敌畏和甲拌磷标准母液各1 mL 置 10 mL 量瓶中，用正己烷稀释至刻度，得含 mg/mL 敌敌畏和甲拌磷的混合标准溶液。 准确移取该溶液 0， ， ， ， ，于5 mL 容量瓶中由空白基质提取液定容，得标准工作液0， ， ， ， ， ?g/mL。环氧七氯内标工作标准溶液（ ?g/mL） ： 准确移取 1 mL 环氧七氯母液于 25 mL 量瓶中，用正己烷稀释至刻度。四、操作步骤（一）仪器操作步骤：1. 确认处于正常工作状态。2. 对仪器进行调谐，获得调谐报告。3. 编辑检测方法，将检测方法发送给仪器，等待仪器达到设定好的条件。4. 编辑样品测定序列，将标准溶液和样品溶液放于自动进样器样品盘中。5. 仪器稳定后，开始测试。6. 样品测定完毕后，进行数据分析。（二）检测条件色谱柱：Rxi-5ms,30m?m；色谱柱温度程序：50保持 2 min，然后以 50/min 程序升温至 180， 再以 5/min 升温至 280， 保持 1min,在以 50/min升温至 300，保持 1min；载气：氦气，纯度%，流速：min；进样口温度：250；进样量：1 L；进样方式：无分流进样， min 后打开流阀和隔垫吹扫阀；电子轰击源：70 eV；离子源温度：250。GC-MS 接口温度：250；扫描方式：选择离子监测。监测离子见下表5-5-1：表表 5-5-15-5-1 待测组分及内标的定量离子和定性离子待测组分及内标的定量离子和定性离子化合物名称敌敌畏甲拌磷环氧七氯（三）样品处理：1. 提取称取 20 g 试样 （精确至 g） 于 50 mL 离心管中， 加入 40 mL 乙腈， 用均质器在 15 000r/min匀浆提取 1 min，加入5 g 氯化钠，再匀浆提取1 min，将离心管放入离心机，在3 000r/min离心 5 min，取上清液 20 mL（相当于 10 g 试样量） ，待净化。2. 净化（1） 将 Envi-C18 柱放入固定架上，加样前先用10 mL 乙腈预洗柱，下接鸡心瓶，移入鸡心瓶，移入上述 20 mL 提取液，并用 15 mL 乙腈洗涤柱，将收集的提取液和洗涤液在40水浴中旋转浓缩至约1 mL，备用。（2） 在 Envi-Carb 柱中加入约 2 cm 高无水硫酸钠，下接鸡心瓶放在固定架上，加样前先用 4 mL 乙腈+甲苯（3+1）预洗柱，当液面到达硫酸钠的顶部时， 迅速将样品浓缩液（1）转移至净化柱上，再每次用2 mL 乙腈+甲苯（3+1）三次洗涤样液瓶，并将洗涤液移入柱中。定量离子（强度）109（100）260（100）353（100）定性离子（强度）185（22） ，145（6）121（429） ，231（110）355（80） ，351（53）驻留时间/s在串联柱上加上 50 mL 贮液器，用 25 mL 乙腈+甲苯（3+1）洗涤串联柱，收集所有流出物于鸡心瓶中，并在 40水浴中旋转浓缩至约 mL。每次加入 5 mL 正己烷在 40水浴中旋转蒸发，进行溶剂交换二次，最后使样液体积为1 mL，加入 40 L内标溶液，混匀，用于气相色谱-质谱测定。五、结果计算（一）定性分析：进行样品测定时， 如果检出的色谱峰的保留时间与标准样品相一致， 并且在扣除背景后的样品质谱图中， 所选择的离子均出现， 而且所选择的离子丰度比与标准样品的离子丰度比相一致（相对丰度50%,允许10%偏差；相对丰度20%50%，允许15%偏差；相对丰度10%20%，允许20%偏差；相对丰度10%，允许50%偏差），则可判断样品中存在这种农药或相关化学品。如果不能确证，应重新进样，以扫描方式（有足够灵敏度）或采用增加其他确证离子的方式或用其他灵敏度更高的分析仪器来确定。（二） 定量分析： 分别以敌敌畏、 甲拌磷及内标的定量离子的质量色谱图进行面积积分，获得标准系列中待测组分的峰面积Ai及内标的峰面积As，以Ai/ As对Ci作图得内标标准AAA / Asx曲线y ax b。再测得样品中待测组分的峰面积x及内标的峰面积sx，计算x，由标准曲线求得待测组分的含量。（三）含量计算按下式计算出蔬菜中被测组分的含量：X CV1000m1000式中：X蔬菜试样中敌敌畏或甲拌磷的含量，单位为mg/kg； C从标准曲线计算得到的被测组分溶液浓度，单位为?g/mL；V试样溶液定容体积，单位为mL；M试样溶液所代表的试样质量，单位为g。六、注意事项（一） 为减少基质的影响， 定量用标准溶液通常采用空白基质提取液配置标准工作溶液。（二）在进行测定前，常进样一针溶剂空白，以检查仪器的状况。七、参考文献1.郭爱民 主编，卫生化学实验，北京：人民卫生出版社，2007。2.唐英章 主编，现代食品安全检测技术，北京：科学出版社，2004。（周枝凤）第六节第六节原子吸收光谱法测定水中的锌和铜原子吸收光谱法测定水中的锌和铜一、实验目的 (一) 掌握火焰原子吸收光谱法测定水中锌、铜的基本原理和操作技术。 (二) 熟悉原子吸收分光光度计的工作原理及火焰原子法的操作。实验原理在使用锐线光源条件下，基态原子蒸汽对共振线的吸收，符合朗伯-比尔定律，即：A lg（A为中心频率处的吸光度；L为原子蒸气的厚度；I0 0.4343 K0 LIK0峰值吸收系数）在试样原子化时，火焰温度低于3000 K 时，对大多数元素来讲，原子蒸汽中基态原子的数目实际上十分接近原子总数。 在一定实验条件下， 待测元素的原子总数目与该元素在试样中的浓度呈正比。则 A=kc 用 A-c 标准曲线法或标准加入法，可以求算出元素的含量。试剂和仪器(一) 试剂：不同浓度的锌、铜标准溶液；水样。(二) 仪器：原子吸收分光光度计；锌、铜空心阴极灯；电热板。四、操作步骤 (一) 锌、铜系列标准溶液的配制配制锌系列标准溶液： ， ， ， ， gmL-1。配制铜系列标准溶液： ， ， ， ， gmL-1。(二) 工作条件的设置表表 5-6-15-6-1 仪器参数的设置仪器参数的设置测试元素锌铜表表 5-6-15-6-1 仪器参数的设置（续）仪器参数的设置（续）测试元素锌铜 (三) 锌、铜的测定 1%硝酸为空白，测定锌、铜系列标准溶液和自来水样的吸光度A。 (四) 实验结束后，用 1%硝酸喷洗原子化系统 5 min，按关机程序关机。最后关闭乙炔钢瓶阀门，旋松乙炔稳压阀，关闭空压机和通风机电源。 (五) 绘制锌、铜的 A-c 标准曲线，由未知样的吸光度 A，求算出自来水中锌、铜含量（g/mL） ，按一元线性回归计算程序，计算锌、铜的含量。五、 注意事项乙炔为易燃易爆气体，必须严格按照操作步骤工作。在点燃乙炔火焰之前，应先开空气，后开乙炔；结束或暂停实验时，应先关乙炔，后关空气。乙炔钢瓶的工作压力，一定要控制在所规定范围内，不得超压工作。必须切记，保障安全。（韩伟立）测定方法浓度自续浓度自续工作曲线直线回归直线回归计算方式积分积分测定时间33重复次数33标准品数量55浓度单位g/mLg/mL背景校正否否样品数33延迟时间00工作模式火焰火焰空心阴极灯电流8 mA8 mA空心阴极灯预热时间20 min20 min狭缝宽度波长 nm喷头高度7mm7mm第七节第七节气相色谱法检测饮料中的防腐剂苯甲酸气相色谱法检测饮料中的防腐剂苯甲酸一、 实验目的（一）掌握气相色谱氢火焰离子化（FID）分析方法的原理和实验操作技术。（二）熟悉内标标准曲线法的定量分析方法。二、 实验原理食品防腐剂因具有杀灭或抑制微生物增殖的作用，而被广泛应用于各类食品、饮料中，防止食品变质及延长食品的保质期, 但过量食用对人体有一定毒性。 所以有必要对其进行检测监控。气相色谱法的工作原理： 是利用试样中各组份在流动相和固定相间的分配系数不同， 当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时， 组份就在其中的两相间进行反复多次分配， 由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，?因此各组份在色谱柱中的保留时间不同，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器， 产生的离子流讯号经放大后， 在记录器上描绘出各组份的色谱峰。利用保留时间对样品中的组分进行定性分析，用峰面积进行定量分析。内标标准曲线法：在一定实验条件下，待测组分的含量m 或浓度 C 与样品峰面积 Ai内标峰面积 As 成正比例。先用待测组分的标准品配置一系列已知浓度的标准溶液，加入相同量的内标物；再将同样量的内标物加入到同体积的待测样品溶液中，分别进样，测出Ai/As，作 Ai/Asm?或 Ai/AsC 图，由Ai（样）/As 即可从标准曲线上查得待测组分的含量。食品中苯甲酸先经乙醚萃取，以正十一烷酸作内标，采用内标标准曲线法定量。三、试剂和仪器（一）仪器 天美，GC-7900 气相色谱仪；FID 检测器；2010 双通道色谱工作站；中惠普 NHA-300S 气源发生器；微量进样器。（二）试剂 正十一烷酸，乙醇，乙醚均为分析纯。苯甲酸 (国家标准物质研究中心提供)，食品防腐剂标准工作液：L，用乙醇配制；正十一烷酸内标溶液：L，用乙醇配制。盐酸（1+1） ：取 100mL 盐酸，加蒸馏水稀释至 200mL。四、操作步骤（一）气相色谱仪操作步骤：1. 确认所需使用检测器，并相应的安装好分析柱。FID 使用 N2做载气；开机前需先打开N2气瓶总阀，开通载气。2. 打开仪器及计算机电源。运行D-7900 色谱工作站。3. 确认装了分析柱的载气气路有流量压力且正常。 设置进样口，检测器（FID120）及柱箱的温度。4. 在进样口、检测器、柱箱温度达到设定温度后，打开氢气发生器电源开关旋扭, 观察流量和压力显示是否正常，打开Air 气瓶总阀；按【点火】按键，点火，待基线稳定后即可进样分析。5. 测试完毕后，关闭H2, Air 气瓶总阀，设置进样口、检测器、柱箱温度为室温，仪器自动降温；待进样口、检测器、柱箱温度降至 80以下，即可关闭色谱仪电源。关闭计算机电源，关闭载气气瓶总阀。（二）色谱条件色谱柱: TM-MX 30m，毛细管柱；柱温: 130 ；进样口和FID 检测器温度均为 250；载气: 高纯氮；柱流速: min(恒流)；分流比 301；进样量 1L。（三）样品处理：称取的样品, 置于 25mL 具塞量筒中, 1mL 正十一烷酸内标液, 加盐酸(1：1)酸化, 用 20，15mL 乙醚提取两次, 每次振摇 1min, 将上层乙醚提取液通过装有无水硫酸钠三角漏斗(漏斗颈内塞少许脱脂棉) 滤入 100 mL 具塞三角瓶中, 再用 10mL 乙醚分两次洗涤无水硫酸钠, 置 40水浴上挥干, 加 200L 乙醇溶解残渣, 供色谱测定。用保留时间定性, 峰面积外标法定量。（四）标准曲线制备：准确量取标准工作液 0、 、 、 、 和 mL 于 6 个 10 mL 容量瓶中, 各加入内标液, 用乙醇定容, 进行色谱分析。使浓度在 0L 范围, 以标准物的浓度比为横坐标, 对应峰面积比为纵坐标作线性回归分析, 并根据信噪比 S/N=3, 计算最低检测浓度。（五）样品中苯甲酸的检测： 取实验样品，按上述气相色谱法测定，记录苯甲酸和内标物的峰面积。五、结果计算（一）根据保留时间对样品中苯甲酸进行定性分析。（二）标准曲线的绘制：由标准系列色谱图分别测量各标准液中苯甲酸的峰面积， 计算苯甲酸与内标的峰面积之比，以峰面积之比对浓度作图，得到苯甲酸的内标标准曲线。（三）根据样品色谱图苯甲酸的峰面积， 计算苯甲酸与内标的峰面积之比， 从苯甲酸的工作曲线中查得苯甲酸的浓度。六、注意事项（一）检测器温度100，以防结水，影响电极绝缘而使基线不稳。实际温度一般应高于柱温 3050，在启动仪器加热升温过程中，应先升检测器温度后升色谱柱箱温度，待升温过程基本完成，温度稳定，最后再开 H2点火，并保证火焰是点着的。氢气和空气的比例应 1：10，当氢气比例过大时 FID 检测器的灵敏度急剧下降， 在使用色谱时别的条件不变的情况下，灵敏度下降要检查一下氢气和空气流速。（二） 判断 FID 检测器是否点着： 不同的仪器判断方法不同， 有基流显示的看基流大小，没有基流显示的用带抛光面的扳手凑近检测器出口，观察其表面有无水汽凝结。（三）密封垫的更换：更换密封垫不要拧的太紧，一般更换时都是在常温，温度升高后会更紧，密封垫拧的太紧会造成进样困难，常常会把注射器针头弄弯。七、参考文献1.杜晓燕主编， 卫生化学实验，北京：人民卫生出版社，20072.唐英章主编，现代食品安全检测技术，北京：科学出版社，2004（杨雪梅）