宫颈癌检查技术操作宫颈癌检查技术操作（阴道及宫颈分泌物检查）（阴道及宫颈分泌物检查）1.（一）阴道/宫颈分泌物检查方法及部位检查方法 取材部位及方法 检查目的 阴道分泌物湿片镜检 阴道侧壁上1/3 检查有无滴虫、假菌丝或芽生孢子、线索细胞及清洁度 阴道分泌物涂片革兰染色镜检 阴道侧壁上1/3 线索细胞、加德纳菌、厌氧菌、假菌丝或芽生孢子、乳杆菌等 宫颈分泌物涂片革兰染色镜检 宫颈管内1-2cm，稍用力转动，停留10-30秒后取出 中性粒细胞、淋病奈瑟菌 阴道阴道/宫颈分泌物检查方法及部位宫颈分泌物检查方法及部位2.（二）阴道分泌物检查1.胺试验胺试验原理原理细菌性阴道病时，正常菌群乳酸杆菌减少或消失，而阴道加德纳菌、厌氧菌及人型支原体等微生物过度生长，导致乳酸杆菌产生的乙酸浓度降低，而厌氧菌的代谢产物胺类如腐胺、尸胺和三甲胺增多，使阴道分泌物PH值增高。在分泌物中滴加10KOH可导致游离氨释放，产生典型的鱼腥样气味，该试验被称为胺试验。3.标本采集标本采集 插入窥器，暴露阴道和宫颈后，观察分泌的色泽，用拭子从阴道侧壁上中1/3处取分泌物。4.方法和结果方法和结果.PH值测定 使用PH范围在3.8-5.4的精密PH试纸。用拭子取出阴道分泌物后，直接与PH试纸接触读PH值。也可在窥器从阴道取出后，将PH试纸直接接触其下叶凹窝处分泌物读PH值。.胺试验 取少量阴道分泌物置于载玻片上，加一滴10%KOH，闻到氨味或鱼腥样气味即为胺试验阳性。5.临床意义临床意义 正常成人阴道分泌物呈酸性，PH值为3.8-4.5左右。在细菌性阴道病时PH值通常4.5。PH值测定的敏感性较高（92%-97%），但特异性低。阴道分泌物污染了月经血、宫颈粘液及患者有滴虫感染时，其PH值亦可增高。6.2.阴道分泌物湿片镜检阴道分泌物湿片镜检标本采集标本采集 插入窥器，暴露阴道和宫颈后，观察分泌物的色泽，用灭菌拭子从阴道侧壁上1/3处取分泌物。7.方法与结果方法与结果 在载玻片上加1滴或2滴生理盐水，将阴道分泌物与生理盐水混合成悬液，加盖玻片后，在显微镜下检查。.将阴道分泌物加生理盐水作涂片，用高位镜检查，主要依靠上皮细胞、杆菌与球菌的比例、白细胞的数量划分清洁度。8.阴道分泌物清洁度分级阴道分泌物清洁度分级清洁度 杆菌 球菌 上皮细胞 白细胞 临床意义 +0-5/HPF 正常 +5-15/HPF 大致正常或细菌性阴道病 +15-30/HPF 提示炎症 +30/HPF 多见于严重的阴道炎和/宫颈炎盆腔炎 9.在低倍镜（10X10）下检查，寻找呈典型晃动运动的毛滴虫。10.在高倍镜（10X40）下检查，观察假丝酵母菌（孢子和假菌丝）和毛滴虫，以及线索细胞。线索细胞为阴道上皮细胞表面吸附或聚集许多球杆菌，使细胞呈颗粒状外观，细胞边缘模糊不清呈锯齿状。注：将标本溶于1滴生理盐水，并加入1滴10%KOH溶液，更容易识别假丝酵母菌，因为KOH能将其它细胞溶解。11.白色念珠菌12.临床意义临床意义.阴道分泌物清洁度分级的临床意义.湿片检查见到活动滴虫，可诊断滴虫性阴道炎，但其敏感性仅38%-82%，尤其是对无症状的滴虫感染者诊断率较低。.湿片中观察到假菌丝或芽生孢子支持假丝酵母菌性阴道病的诊断，10%KOH湿片检查的敏感性85%。.一般认为当线索细胞占全部上皮细胞的20%以上时为线索细胞阳性。根据线索细胞能准确诊断85%-95%的细菌性阴道。.卵巢功能不足、雌激素减低，阴道上皮增生较差时可见到阴道杆菌减少，易感染。当清洁度为-度时常可同时发现病原微生物，提示存在感染引起的阴道炎和/或宫颈炎、盆腔炎。13.3.阴道分泌物涂片革兰染色镜检阴道分泌物涂片革兰染色镜检标本采集标本采集 插入窥器，暴露阴道和宫颈后，观察分泌物的外观，用棉拭子从阴道侧壁上1/3处取分泌物。阴道分泌物标本采集前24小时内禁止性交、盆浴、阴道灌洗及局部用药等，以免影响检查结果。分泌物经固定与革兰染色后，置于镜下观察。14.结果判断结果判断 在油镜（10X100）下检查涂片，观察阴道菌群的情况及有无线索细胞。正常阴道菌群以乳酸杆菌占优势，可能有少量的球菌和棒状杆菌。乳酸杆菌为在的革兰阳性杆菌，末端钝圆或平齐，呈单根、链状排列。细菌性阴道病时乳酸杆菌减少或消失，而其它细菌增多，呈混合菌群。阴道加德纳菌为革兰染色不定性球杆菌，厌氧包括动弯杆菌、普氏杆菌或阳性球菌。15.临床意义临床意义 革兰染色镜检观察细菌的染色性、形态和排列，观察假丝酵母菌孢子和假菌丝。革兰染色镜检观察阴道分泌物中线索细胞的敏感性和特异性高于湿片法，分别为89%和93%。16.（三）宫颈分泌物涂片革兰染色镜检（三）宫颈分泌物涂片革兰染色镜检标本采集标本采集 插入窥器，暴露阴道和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用灭菌拭子清除过多的分泌物。将女用取材拭子插入宫颈管内1-2cm，稍用力转动，停留10-30秒后取出。分泌物经固定与革兰染色后，置于显微镜下观察。17.结果判断结果判断 在油镜下（10X100）检查涂片。注意观察细胞类型（如上皮细胞、中性粒细胞），病原体的染色特性（革兰阳性或阴性）、形状（球状或杆状）、排列及位置（细胞内或细胞外）等。在中性粒细胞内见到形态典型的革兰阴性双球菌则支持淋菌性宫颈炎的诊断。18.临床意义临床意义.宫颈分泌物涂片革兰染色镜检多形核白细胞数15/HPF，或油镜下可见每视野多形核白细胞10个提示有宫颈感染，为诊断黏液脓性宫颈炎的指标之一。.革兰染色诊断宫颈淋球菌感染与培养的符合率50%-70%，确诊需做淋病奈瑟菌培养。19.（四）淋病奈瑟菌培养（四）淋病奈瑟菌培养标本采集标本采集 插入窥器，暴露阴道和宫颈，如果宫颈口外面的分泌物较多，先用无菌棉拭清除过多的分泌物。将女用取材拭子插入宫颈管内1-2cm，稍用力转动，停留10-30秒后取出。男性尿道分泌物标本采集：生理盐水清洗尿道口，男用拭子插入尿道口1-2cm，停留10余秒钟，轻轻旋转采集标本。20.结果判断结果判断 标本培养24-48小时后观察结果，48小时仍无菌生长时，可作出淋病奈瑟菌培养阴性的报告。对选择性培养基上分离的可疑菌落应作初步鉴定和确证性鉴定。菌落特征，革兰染色和氧化酶试验是初步鉴定淋球菌的三个主要指标。确证性鉴定是在初步鉴定的基础上利用生化反应将细菌鉴定到种。 菌落特征：生长24小时淋病奈瑟菌菌落直径大约为0.5-1mm,呈圆形、灰白色、湿润、光滑、半透明呈露滴样凸起菌落。 氧化酶试验：试剂为1%盐酸四甲基对苯二胺或1盐酸二甲基对苯二胺溶液。在10-15秒内出现深紫红色（二甲基对苯二胺）或深紫色（四甲基对苯二胺）即为阳性反应。淋病奈瑟菌氧化酶试验为阳性，但氧化酶反应并非特异性试验。所有奈瑟菌属细菌及许多其它细菌亦呈阳性。如氧化酶阴性，一般可排除淋病奈瑟菌。21.革兰染色革兰染色 取单个可疑菌落制备涂片作革兰染色镜检。24小时的新鲜菌落可见到呈典型肾形的革兰阴性双球菌（约占25%），其余呈单个、四联或八叠形。22.临床意义临床意义 淋病奈瑟菌培养是诊断淋病的“金标准”，对女性淋病的确认应做淋球菌培养，培养的敏感性81-100%。对于取自泌尿生殖道的标本，在选择性培养基上分离出氧化酶阳性、革兰阴性的双球菌一般可诊断为淋病奈瑟菌的准确性为98%。但对取自泌尿生殖道以外部位的标本，来自低危人群如儿童的分离株，以及涉及医疗法律案例的分离株，必须对分离的菌株鉴定到种。23.24.