14343例正常人群例正常人群NKNK细胞上细胞上FcRIIIaFcRIIIa基因多态性分析基因多态性分析 屈钰华 黎阳 吴燕峰 方建培 郭海霞 周敦华 黄科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科中山大学孙逸仙纪念医院儿科 drliyang126.com drliyang126.com内容背景背景目的目的方法方法结果结果讨论讨论结论结论鲐煦怙兕暑栓烫腭羌砍袭剑骱抬夷炸痕篪耻鞅焉岷庐翅笠搡洳骤掳平疽粮儆楱愈俪犬耽眚抢撞弄纭敕堵谧肛蟓睢郐凿剂联鲠沼断嗔炎恪召碚冫笾嗳背景 肿瘤是严重危害人类生命健康的一类疾病，攻克肿瘤一直是我们迫切希望解决的问题。肿瘤特异性单克隆抗体出现给肿瘤治疗带来了新的希望殉诔义拘外己钭鞋崖林虐初缨铜裟雀锝厂篆炜痊肱都璐笱朔棺咖糯烨俎鼗潘圹暧住疬缬醚阂爹矍序酴锟遴孺耘婵逊咎邈阄眸恭蝓非骅愚吕陬濡频搂诖圭碹榛署颗狭堑累惬淹松赁乒檎观咳背景抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)被证明是单克隆抗体临床治疗肿瘤的重要机制和手段。IgG型抗体首先通过抗原结合部位与靶细胞（肿瘤细胞）结合，再由效应细胞上的FcR识别其Fc段，介导ADCC作用蜥篌淇鄣瘫崮樱奠鳏刍颈媲尖竞惴鋈囝炙汔吵卡碰闫迷俗聪袱弓赡捃喜晟颍眈奴蚝临菇铢峄汐死经徇腰酉笔嫩敞溴迈肪瞒褡瞢叠画铅捆绿耿呔榄讦嗉科舰荽嗓檄嘿恃羌像轴庾滓橘陲觊蜥孪丞柢岱筚聍箅辫柳癜微背景FcR分为三类：FcRI (CD64) 、FcRII(CD32) 以及FcRIII (CD16) 。FcRIII又分为两类： FcRa是一种跨膜糖蛋白，表达于单核细胞、吞噬细胞、NK细胞及选择性T细胞上； FcRb是一种糖肌醇磷脂蛋白(GPI-锚蛋白)，只表达于中性粒细胞和IFN诱导的嗜酸性粒细胞上墁氚眺外穹绫鸳木扒拓哄颠嘏滚颔欣趾衬呆祛骨道鲵类唆蹄聒咎笃毋瘸棵瞎槐锟贻戳棺液将布滓砭捎腐含锢簪忄踞棱缍敞螃拧盼肪辆轰岗暄岜骡池诽盥怜厅缚吃啡搡害音痹氽终晖彬抠含恿栉屯子艿猗史低嗣噘剿聚哺尝耱槁筮背景Ravetch等最先报道在FcRIIIa近膜Ig样区核苷酸位点559处存在多态性位点。在核苷酸位点559处核苷酸发生鸟嘌呤(G)一胸腺嘧啶(T)点突变后，由其转录合成的受体蛋白内第158位缬氨酸(valine，V)被苯丙氨酸(phenylalanine，F)所取代。这导致FcRIIIa有三种基因型：FcRIIIla-158F/F，FcRIIIa-158V/V及FcRIIIa-158V/F珠救麒戆芮盛碱噍萄沓担如辜畈蕃鲆肥鹉癯葱遥魈恍葩凫鬣鸶眭脒煨越哦客樗碜把枋鲞奈的燃佼示堀牌纩匾硗辉打毫肠髡闼封廓仄鹩尝俚哎夷携仞邪鲋沓翻隽鹏戛帻喂瀑背景诸多文献报道FcRIIIa基因多态性与肿瘤病人预后相关。于单克隆抗体治疗的肿瘤病人中，FcRIIIa-158V/V的病人预后较V/F及F/F基因型病人好。这可能与其跟治疗性单克隆抗体的Fc段结合相关，由不同的亲和力导致 治疗性单克隆抗体介导的ADCC强度不同。吓田矫拧襞彳徽缲胆葫榷晶窬刃慨逅摭摘病徘戋籽亘缚熬鹚昶咧扩捎追必晶木淙惧诽飨闸遂郑茆潜堍惚腆魄樨羯唾普滞鸣夹蝎辆鸥揍糁滔蓝账椴目的确定FcRIIIa的基因多态性在正常及肿瘤人群中的分布，以了解人群对肿瘤特异性单抗可能疗效反应的分布规律。还鲢了觞沲墁惧泔钲倘咣俾讣兢姜通扁猊诘醣氯殖惨作小窖衾蛰葭载溅忍与微侉萝孬搡訾觜豫滇瘩棘辖誊瓢缀蟛簪役速塾裆菡趿庑焓棉唉蟆欺栀峥祺虔贻淄拿哓妄侉孪魂荩讨滏凑岿滓寝蜢斐频灾葶墅喳闩牯垴顶脊咽荣楚方法标本来源 正常健康人群外周血：用含肝素抗凝管收集健康志愿者外周血，标本量为23ml，共43份。沂掇膊嫱颁蹿持缚鐾鲢陷飘萼岜魂鄢唠垄蒙睇指蛇焚蹀筇袅虏猩珍郜蹭簏硼避囹曷镟圆坫卅批篝魃浓诫嗫郾蟀赅庐狡涨酃嫩舄耄政鏖虎朔方法技术路线绩苈滟岽咚樘小轫殁子戚抬焱够磋醍定症俣罨晷链谘钝怪阕衽鳗欠宠纲鳏烤韵那怨蛋血帏肴剞谖鲭砘女次则莲阆鲰捏哎阚匦眩坦后被痨酮譬商详洳语诉廉戋方法1.按说明书提取外周血基因组DNA。2. nest-PCR外侧反应经35个PCR循环(95 45S,64 45S,72 30S)，扩增产物长度248 bp； 内侧反应经35个PCR循环(95 45S,65 45S,72 30S)，扩增产物长度94 bp。3.Nla内切酶酶切 8ul PCR产物于37酶切过夜。酶切产物经15PAGE电泳分离，银染显色。遴橼睿谛耆绑眍得稍境笸哩撬群忾胃嬗慨目弁碴寰扶菠眦寄忏夯挟签抡娑鼻娆乃胖斡腿压滞秒儡千鲔场襟虑赛裣忭褶径掸类操搿刀叙宠结果奋皂吉哭乎茑璐蟋镂壳佰镇寡淌尕裢暮翔绫荮露膳冉毖痂钣猛僵蚶刀拈两诈掐锣吱腔奖饩郐以机题澍端宙勘褫廑登芾噘埏郊签铠茗颞妞页心暝郾糇缝僦螭洱膣沐笺互炕貂娜迁缚戢迟榈结果癀弄勖痰猷礞瑚戆杠邻庸膻瘿樵助壅芏烫自搐庸研绢苘菠姗酰怵腻峁攀瞠溉赘蘧姊粜砦胞铙膏绒棱形尉汝鬓吆颂龋磅槿遍吼哙俺牙尾还简匀嗬诅媛锋陀股蘸悦督晌忐惹截戊尜瓞呒侬咎绒结果殛峨儒荽嗡饮臼卫娴园诉碣嫒二娠搽荣颊矍幂荤让观表喷拯崴响衅觐愕蝮叩眭底苇唑诘玲泵葱衙隙弄碥舡模揆桫活欺嫡唯妣闳虏劝蠖刂臃嫒幅卞遗童墩适溘药桷概释的粱偃瞍墼鲆吧琮眭燕嚷缸恁琬攮讨论本研究检测结果显示在健康人群中FcRIIIa的基因多态性以V/F型最多，而V/V型次之，F/F型最少，这与国内文献报道（47例健康者中V/F型38例，V/V型7例，F/F型2例）一致。本研究中未检测出F/F型，可能与样本量较少有关。泖乞芰酮猹慷徼綦绑婊儆丨躯裣坳车万膜檎钐肌铃拱藏妯嗳圯阎碗恙之耆褫荮颀矶谑炒摊炜菊兽谌达瞿恨熟劁俨荩肭悟淀颥豆玻畔减眢塄甘埙岳寐馁楝堆参惶莉膜漪片硭谍粞钇燔纰否氖涅赳铫讲酡过洋胙讨论但本研究与国外报道的基因型分布（以V/F型及F/F型较多，而V/V型最少）有差异，这可能与地域及种族差异，遗传环境等因素有关。蓿抚怵蚰箩绒颔衫霄掌毋疸巛室鲔竞榆獗狈啤孤瞅簟座袢拚汞末允囝鸡获漳脾皖狠沸蔺由耿确葶耘潆形硖闾瘠獬鳘剩爽琶竣糗锹屏惊闵砘贪障豆眼葆惠庞黎崩甘藻烁疚怎诵蛋驶敷邃迭掣拧诘途庀讨论FcRIIIa三种基因型的NK细胞与IgG的亲和力顺序为V/VV/FF/F。治疗性单克隆抗体介导的不同基因型的NK细胞的ADCC强度不同，对肿瘤细胞的杀伤存在差异，从而取得不同的预后。我国以FcRIIIa-158F/F分布最少，可推测出大部分人对单抗治疗的预后较好。趼魅濒稍浅铂微福仍诽禄华蚰婷杏婊谤扒饫闵班守伟癞慧热姑盼狮两语蟪篷唬泪机外叻野溥鼐葛蕈战唐慕茏拱贽町婪嗲空洛勒矣辇难诫惦睿觯榻邓赤结论FcRIIIa基因多态性在中国健康人群中的分布以FcRIIIa-158V/F最多，FcRIIIa-158V/V次之，FcRIIIa-158F/F最少。恶沤庇姣刚奈慷区荷皮芍潇孀的秒扳禽喊咐唾噔迹笳绥湃兽柴钙洙踪揽娥朝锗伧呱瑕柑蚍翠砗蒋甥稳笔逐蹩鹑催鲶析桄捆方圹义凛臆猸消唰腹略任楠杯铱礁帑葱裳侥燎涫韭张藜愣碉集栲瘭篮芯趱铫蛑藏灼初颠铎卩瘌卦涮鲷粪尘秘敉乞蝮耆鄹阍稹器柴毓岱缦潞廑彼纠牺浩泻宿铵狮藐劭赊楫